健脾康复丸对肝癌大鼠CTGF、DNA甲基转移酶活性影响的研究

目的:本研究旨在探究健脾康复丸对肝癌大鼠CTGF(结缔组织生长因子)、DNA甲基转移酶活性的影响。方法:本研究以50只大鼠作为研究对象,其中40只建立肝癌模型。通过对大鼠进行随机的抽样分析,分为健康对照组、肝癌模型组、中药低剂量组、中药高剂量组、西药对照组,平均每组10只大鼠。采用ELISA检测各组大鼠血清中VEGF(血管内皮细胞生长因子)、ET-1(内皮素-1)、CTGF(结缔组织生长因子)的表达,采用PCR检测各组大鼠肝组织中DNA甲基转移酶(DNMT1、DNMT2、DNMT3A、DNMT3B)活性。结果:中药组中VEGF、ET-1、CTGF的表达明显低于肝癌模型组(P<0.05),且中药组中大鼠肝组织中DNA甲基转移酶(DNMT1、DNMT2、DNMT3A、DNMT3B蛋白)的表达也明显低于肝癌模型组(P<0.05)。结论:健脾康复丸能够有效抑制肝癌大鼠CTGF、DNA甲基转移酶的活性表达,提示其对肝癌的发生发展及转移复发可能具有抑制作用,为中药抗癌机制研究和临床应用提供了实验依据。

放射治疗对宫颈癌DNA甲基转移酶表达的影响

目的:研究放射治疗对宫颈癌(cervical cancer,CIN)组织中DNA甲基转移酶(DNA methyltransferase,DNMT)1、3A和3B表达的影响,探讨其在放射治疗耐受中的作用。方法:选用12例宫颈癌患者放射治疗前、中、后三个时期的组织,应用qPCR检测宫颈癌组织在放射治疗前期、中期和后期的DNMT1、DNMT3A和DNMT3B mRNA的表达变化。结果:宫颈癌放射治疗前、中、后三个时期DNMT1对β-actin mRNA的相对表达量分别是(0.1229±0.0217)、(0.5696±0.0217)和(0.1620±0.0352);放射治疗期间和放射治疗之前宫颈癌组织中DNMT1 mRNA的表达差异有统计学意义(P<0.05),放射治疗期间和放射治疗之后宫颈癌组织中DNMT1 mRNA的表达差异有统计学意义(P<0.05),放射治疗之前和放射治疗之后宫颈癌组织中DNMT1 mRNA的表达差异有统计学意义(P<0.05);DNMT3A对β-actin mRNA的相对表达量分别是(0.0012±0.0001)、(0.0021±0.0001)和(0.0014±0.0001),放射治疗期间和放射治疗之前宫颈癌组织中DNMT3A mRNA的表达差异有统计学意义(P<0.05),放射治疗期间和放射治疗之后宫颈癌组织中DNMT3A mRNA的表达差异有统计学意义(P<0.05),放射治疗之前和放射治疗之后宫颈癌组织中DNMT3A mRNA的表达差异无统计学意义(P>0.05);DNMT3B对β-actin mRNA的相对表达量分别是(0.6627±0.0348)、(0.8104±0.0845)和(0.2391±0.0470),放射治疗期间和放射治疗之前宫颈癌组织中DNMT3B mRNA的表达差异有统计学意义(P<0.05),放射治疗期间和放射治疗之后宫颈癌组织中DNMT3B mRNA的表达差异有统计学意义(P<0.05),放射治疗之前和放射治疗之后宫颈癌组织中DNMT3B mRNA的表达差异有统计学意义(P<0.05)。结论:放射治疗使宫颈癌组织中DNMT1,DNMT3A和DNMT3B表达发生变化,其可能在放射耐受中起到了作用。

丹葛解酲汤对酒精性肝病大鼠DNA甲基化转移酶表达的影响

目的观察丹葛解酲汤对酒精性肝病(ALD)大鼠DNA甲基化转移酶(DNMTs)表达的影响。方法将96只SD大鼠随机分为空白组13只、造模组83只,造模组采用白酒灌胃法建立ALD模型,将成功造模的68只大鼠随机分为模型组、丹葛解酲汤高剂量组、丹葛解酲汤低剂量组、益肝灵片组,每组17只,分别进行干预。干预结束后采用赖氏法检测血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)的含量,酶联免疫吸附法检测血清DNMT1、DNMT3a、DNMT3b的含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测肝脏组织中DNMT1、DNMT3a、DNMT3b mRNA表达水平。结果与空白组比较,模型组AST、ALT含量明显升高(P<0.01),DNMT1、DNMT3a含量明显降低(P<0.01),DNMT1mRNA、DNMT3a mRNA、DNMT3b mRNA表达水平明显降低(P<0.01)。与模型组比较,益肝灵片组AST、ALT、DNMT1、DNMT3a、DNMT1mRNA、DNMT3a mRNA、DNMT3b mRNA明显升高(P<0.01);丹葛解酲汤高剂量组AST、ALT、DNMT1、DNMT3a、DNMT1mRNA、DNMT3a mRNA、DNMT3b mRNA明显升高(P<0.01);丹葛解酲汤低剂量组ALT、DNMT1、DNMT3a mRNA明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论丹葛解酲汤通过上调ALD大鼠DNMTs的表达,进而影响甲基化状态,可能是其防治ALD的作用机制之一。

急性低氧后小胶质细胞中DNA甲基转移酶的表达变化

目的:探究小胶质细胞在急性低氧后DNA甲基转移酶的变化情况。方法:以BV2细胞为研究对象,将其分为对照组(control)、H-0组(低氧12 h不进行复氧)、H-2组(低氧12 h复氧2 h)、H-4组(低氧12 h复氧4 h)、H-8组(低氧12 h复氧8 h)、H-12组(低氧12 h复氧12 h)、H-24组(低氧12 h复氧24 h)。将BV2细胞低氧12 h,在不同的时间点进行复氧构建模型,通过荧光倒置显微镜明场观察细胞形态;采用Real-time PCR检测DNMT1、DNMT 3A、DNMT 3B在mRNA水平上的表达变化;采用Western blot检测DNMT1、DNMT 3A、DNMT 3B在蛋白水平上的表达变化。结果:与control组相比,H-0组的细胞数量减少,细胞形态皱缩,大部分细胞触角伸长,细胞暗淡无光,折光度降低。随着复氧时间的增加(H-2、H-4、H-8、H-12、H-24),贴壁细胞逐渐减少。与control组相比,DNMT1在H-0组中蛋白的表达水平显著上升(P<0.05),H-8、H-12、H-24组DNMT1的mRNA和蛋白水平表达显著降低(P<0.05)。DNMT 3A在H-8、H-12组中的mRNA和蛋白水平表达显著降低(P<0.05)。DNMT 3B在H-0、H-4、H-8、H-12、H-24组细胞中的mRNA和蛋白水平无显著变化。结论:在低氧后小胶质细胞中DNMT1、DNMT 3A发挥了重要作用。

N^(6)-甲基腺苷(m6A)转移酶METTL3和m6A调控LINC01465在肝细胞癌增殖转移中的作用机制

目的探讨甲基转移酶样3(METTL3)在肝癌细胞中调控m6A水平,影响长链非编码(lncRNA)LINC01465的表达,促进肝癌细胞增殖转移的机制。方法利用人类癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析METTL3在肝癌组织和正常肝组织中的表达差异及与患者预后的关系;用Western blot、RT-qPCR分析验证METTL3在细胞、组织中的表达;用m6A比色法验证肝癌细胞及正常肝细胞中的m6A水平;敲低METTL3后进行CCK-8、克隆形成、Transwell迁移、侵袭实验,研究METTL3对肝癌增殖转移的调控作用;转录组RNA m6A甲基化测序确定METTL3的下游调控基因LINC01465。RT-qPCR验证沉默METTL3后LINC01465的表达量,以及LINC01465在肝细胞癌中的表达水平。结果METTL3在肝癌组织和细胞中明显高表达且与患者预后较差相关;高表达的METTL3促进HCC细胞增殖、迁移和侵袭;METTL3影响LINC01465的m6A水平及其表达量来促进肝细胞癌的发展进程。结论METTL3可通过m6A依赖的方式来影响LINC01465的表达水平,促进肝癌细胞增殖转移,METTL3可能成为肝癌预后及治疗的靶向标志物。

DNA甲基转移酶1缺乏通过改善胆固醇积累改善巨噬细胞运动和伤口愈合

目的皮肤伤口的愈合需要在损伤部位招募巨噬细胞,驱动巨噬细胞运动的机制尚不清楚。方法通过微吸管吸吮实验,发现巨噬细胞中Dnmt1的抑制可以消除LPS刺激的细胞弹性和黏弹性的变化。纳米压痕法测定的细胞刚度表明,LPS以dnmt1依赖的方式增加了胆固醇的细胞积累,胆固醇含量决定细胞刚度和运动性。脂质组学分析表明,Dnmt1抑制改变了细胞脂质稳态,并将抑制剂封装在热敏PF-127水凝胶中,将其作用于全层皮肤伤口探讨伤口愈合机制。结果和结论在这项研究中,骨髓特异性Dnmt1缺失增强了伤口修复。本研究发现,用LPS处理细胞增加了巨噬细胞的弹性模量k1(但没有k2)和黏性模量,表明细胞硬化的表型。LPS诱导的巨噬细胞硬化是由Dnmt1介导的。本研究验证了膜胆固醇含量和细胞刚度之间的相关性。通过使用经典的方法来增加或减少膜胆固醇,结果表明,添加胆固醇增加细胞硬度。本研究利用脂质组学分析定量研究胆固醇酯组分,有趣的是,与WT巨噬细胞相比,Dnmt1缺失降低了游离胆固醇含量,增加了胆固醇酯。此外,在热敏PF-127水凝胶中,avasimibe和probucol联合处理,可抑制Dnmt1KO小鼠的局部伤口愈合率。本研究揭示了Dnmt1依赖于巨噬细胞机械特性和相关趋化运动的表观遗传机制,表明Dnmt1既是疾病的标志,也是伤口愈合治疗干预的潜在靶点。

何首乌饮通过DNA甲基转移酶1延缓大鼠睾丸间质细胞衰老

目的探讨何首乌饮能否通过DNA甲基转移酶1(DNMT1)延缓大鼠睾丸间质细胞衰老。方法40只Wistar雄性大鼠随机分为4组,每组10只。免疫组织化学检测各组大鼠睾丸组织中DNMT1表达水平。ELISA实验检测各组大鼠血清中的睾酮含量。通过自由基氧化损伤建立大鼠睾丸间质细胞衰老模型。在睾丸间质细胞中使用慢病毒敲低DNMT1,通过β-半乳糖苷酶(β-GAL)染色、免疫荧光染色和ELISA实验检测细胞衰老状态和细胞上清液中睾酮和睾酮合成关键酶3β羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)、细胞色素P450家族成员11A1(CYP11A1)的含量。结果与青年对照组相比,自然衰老组大鼠睾丸组织中P16蛋白表达和β-GAL阳性率明显升高,DNMT1表达和血清睾酮含量降低(P<0.05);何首乌饮干预能够降低衰老大鼠睾丸组织P16蛋白表达和β-GAL阳性率,提高DNMT1表达和血清中的睾酮含量(P<0.05)。衰老的睾丸间质细胞中呈现相同的趋势。在睾丸间质细胞中敲低DNMT1后,β-GAL阳性率和P16蛋白表达明显增加,睾丸间质细胞的睾酮分泌量和睾酮合成关键酶3β-HSD、CYP11A1含量明显减少,与正常组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。加入何首乌饮后,上述现象得到改善。结论何首乌饮可以通过DNMT1延缓大鼠睾丸间质细胞衰老。

组蛋白甲基化转移酶SMYD3在肺癌中的研究进展

组蛋白甲基化转移酶SET和MYND结构域蛋白3(SET and MYND domain-containing protein 3,SMYD3)是催化组蛋白和非组蛋白底物甲基化的酶,在许多生物学环境中发挥关键作用,如肌肉发育和部分癌症的进展。本综述对SMYD3进行相关的基本介绍,并探讨SMYD3在肺癌中的研究,旨在为SMYD3在肺癌中的进一步研究提供依据。

DNA甲基转移酶在结直肠癌发生发展中的作用研究

目的 探讨DNA甲基转移酶在结直肠癌发生发展过程中发挥的作用。方法 选取2021年9月至2022年6月包头医学院第二附属医院结直肠癌患者的结直肠癌组织及癌旁组织。通过Real-time PCR和Western Blot对癌组织及癌旁组织中DNMT1、DNMT3A及DNMT3B的m RNA和蛋白水平表达进行检测。结果 与癌旁组织相比,DNMT1、DNMT3A、DNMT3B在结直肠癌中m RNA表达水平及蛋白表达水平均显著上升,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 DNA甲基转移酶的过表达促进了结直肠癌发生发展。

RNA甲基转移酶METTL3在急性髓系白血病发生发展及耐药中的研究进展

急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)是成人最常见的血液系统恶性肿瘤,其广泛的基因组变化和分子突变为药物的开发提供了潜在靶点。目前靶向治疗药物及免疫治疗无法替代传统的“3+7”方案。30%~40%的初治AML患者对于传统蒽环类方案原发耐药,治疗效果极差,是AML治疗及研究领域的重大难题。甲基转移酶样3(methyltransferaselike 3,METTL3)作为重要的甲基转移酶在调节AML发生发展及耐药中具有重要意义。本文总结了METTL3在AML发生发展及耐药中的作用及其在抗白血病治疗中的潜力,以期为克服AML的耐药及复发提供新思路及潜在治疗靶点。

急性脑出血患者血清E盒锌指结合蛋白1及DNA甲基化转移酶1与神经功能缺损和预后的相关性分析

目的探讨急性脑出血(ACH)患者血清E盒锌指结合蛋白1(ZEB1)、DNA甲基化转移酶1(DNMTl)与神经功能缺损、预后的关系。方法选取2019年7月—2022年7月本院收治的105例ACH患者为ACH组,依据ACH患者入院时美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分将其分为轻度组(n=34)、中度组(n=41)、重度组(n=30)。根据改良Rankin量表(mRS)评分将ACH患者分为预后良好组(n=65)和预后不良组(n=40)。另纳入同期105例体检健康者为对照组。选取2021年7月—2022年7月本院诊治的45例ACH患者对构建的ACH预后模型的受试者工作特征(ROC)曲线进行验证。采用酶联免疫吸附试验检测血清ZEB1、DNMT1水平;采用Spearman法分析ACH患者ZEB1、DNMT1水平与NIHSS评分的关系;采用多因素Logistic回归模型分析ACH患者预后的影响因素,采用ROC曲线评估血清ZEB1、DNMT1水平对ACH患者预后的预测价值。结果与对照组相比,ACH组血清ZEB1、DNMT1水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与轻度组相比,中度组和重度组ACH患者血清ZEB1、DNMT1、NIHSS评分均升高,差异有统计学意义(P<0.05);与中度组相比,重度组ACH患者血清ZEB1、DNMT1、NIHSS评分均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。Spearman分析结果显示,ACH患者血清ZEB1、DNMT1水平与NIHSS评分均呈正相关(r=0.569、0.763,P均<0.001)。单因素分析结果显示,与预后良好组比较,预后不良组患者NIHSS评分、血肿体积、ZEB1及DNMT1水平均升高或增大,差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,ZEB1、DNMT1、NIHSS评分、血肿体积增大是ACH患者预后不良的危险因素(P<0.05)。血清ZEB1、DNMT1预测ACH患者预后的曲线下面积(AUC)分别为0.834、0.854,ZEB1、DNMT1联合预测ACH患者预后的AUC为0.944,灵敏度为95.0%,特异度为86.2%。以验证组人群对预测预后的ROC曲线进行验证,结果显示AUC为0.903(95%CI:0.854~0.951),提示预后预测曲线具有较好的区分度。结论ACH患者血清ZEB1、DNMT1水平较高,二者均与ACH患者神经功能缺损、预后显著相关,且血清ZEB1、DNMT1联合可能更有利于临床评估ACH患者预后情况。

m6A甲基转移酶样蛋白3在溃疡性结肠炎病人结肠组织中的表达及意义

目的:探讨m6A甲基转移酶样蛋白3(METTL3)在溃疡性结肠炎(UC)病人结肠组织中的表达及其临床意义。方法:纳入UC病人100例作为研究对象,依据Mayo评分方法判定病情活动度:轻度活动期30例,中度活动期34例,重度活动期36例。根据预后情况分为不良预后组(56例)和预后良好组(44例)。另以同期结肠息肉病人60例为对照组。通过qRT-PCR法检测UC病人及对照组结肠黏膜METTL3 mRNA的表达,采用免疫组织化学法检测UC病人METTL3蛋白水平。比较UC不同严重程度病人METTL3 mRNA及蛋白表达变化,分析其与UC严重程度及预后的关系;受试者工作特征(ROC)曲线评价METTL3 mRNA对UC预后的预测效能;Cox回归分析影响UC预后不良的相关因素。结果:研究组病人结肠黏膜METTL3 mRNA水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。与轻度活动期相比较,中度活动期与重度活动期病人结肠黏膜METTL3 mRNA水平以及阳性率显著升高(P<0.05);与中度活动期相比较,重度活动期病人结肠黏膜METTL3 mRNA水平以及阳性率显著升高(P<0.05)。预后不良组病人Mayo评分、METTL3 mRNA水平、METTL3阳性表达率及CRP均显著高于预后良好组(P<0.05~P<0.01)。Spearman相关性分析结果显示,研究组病人METTL3 mRNA与Mayo评分呈正相关关系(r=0.540,P<0.05)。ROC结果显示,METTL3 mRNA诊断病人预后的曲线下面积为0.882(95%CI:0.813~0.951),灵敏度为82.10%,特异度为86.40%。Cox回归分析显示,Mayo评分、METTL3 mRNA水平升高是UC病人发生不良预后的独立危险因素(P<0.05)。结论:UC病人METTL3水平与预后有关,其高水平可提示病人预后不良。

甲基转移酶样蛋白3与前列腺癌患者预后的相关性

目的探讨甲基转移酶样蛋白3(METTL3)与前列腺癌(PCa)患者预后的相关性,以期建立新的预测PCa患者预后的方法。方法使用开放数据集和PCa组织芯片评估METTL3基因和蛋白的表达、METTL3与Gleason评分(GS)之间的相关性以及METTL3预测PCa不良预后的能力,构建列线图模型定量评估PCa预后。结果与正常前列腺组织比较,PCa组织中METTL3基因和蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。METTL3在高危PCa组(GS>7分)中的基因和蛋白表达水平明显高于中-低危PCa组(GS≤7分)(P<0.05)。METTL3基因高表达组患者的短期和长期无进展生存率和总体生存率均较METTL3基因低表达组患者差(P<0.05)。此外,本研究建立了一个由7个受METTL3 N6-甲基腺嘌呤(m6A)修饰调控的靶基因组成的风险模型。该风险模型中的7个靶基因主要与细胞周期过程密切相关,METTL3蛋白表达水平与细胞周期蛋白B1(CCNB1)的蛋白表达水平呈显著正相关(r=0.30,P=0.0025)。结论METTL3具有预测PCa预后的潜力,其可能通过m6A修饰调控与细胞周期过程密切相关的靶基因的表达来影响PCa预后。

刺五加DNA甲基转移酶基因的适应性进化分析

本研究以刺五加(Eleutherococcussenticosus)的DNA甲基转移酶(cytosine-5DNA methyltransferase,C5-MTase)基因为研究对象,探究其适应性进化的特征。在刺五加的基因组中共鉴定出11条C5-MTases序列,对其进行生物信息学分析和系统发育分析,并分别利用PAML软件的分支模型、位点模型、分支-位点模型以及MEC模型、SLAC(singlelikelihood ancestorcounting,SLAC)和FEL(fixed effects likelihood model,FEL)等方法对刺五加C5-MTases基因的选择位点进行检测。生物信息学分析结果表明刺五加C5-MTases的基因结构高度保守。系统发育分析结果显示,11条C5-MTases基因序列可分为CMT、MET和DNMT三大分支。适应性进化分析结果表明,纯净选择在刺五加C5-MTases基因的进化过程中占主导地位。

甲基转移酶样3调节食管鳞癌细胞功能的研究

目的:探究甲基转移酶样3(methyltransferase-like 3,METTL3)在食管鳞癌中的表达水平和作用机制。方法:体外构建食管鳞癌细胞Eca-109的METTL3敲低模型,利用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRTPCR)、Western Blot验证敲低水平,检测肿瘤细胞的增殖、迁移能力。利用差异分析、富集分析以及生存分析等寻找METTL3的靶基因。结果:敲低METTL3可以显著抑制食管癌细胞的增殖和迁移能力;利用生物信息学分析寻找到受METTL3调控的9个可能的靶基因(精脒/精胺N1-乙酰基转移酶1(spermidine/spermine N1-acetyltransferase 1,SAT1)、低密度脂蛋白受体(low density lipoprotein receptor,LDLR)、整合素β1(integrin subunit beta 1,ITGB1)、细胞间黏附分子5(intercellular adhesion molecule 5,ICAM5)、富含谷氨酸的WD重复序列蛋白1(glutamate-rich WD40 repeat containing 1,GRWD1)、含纤维连接蛋白Ⅲ型结构域3A蛋白(fibronectintype-Ⅲdomain-containing protein 3A,FNDC3A)、DnaJ热休克蛋白家族成员C2[DnaJ heat shock protein family(Hsp40)member C2,DNAJC2]、卷曲螺旋域蛋白88C(coiled-coil domain containing 88C,CCDC88C)、Rho GTP酶激活蛋白12(Rho GTPase activating protein 12,ARHGAP12),其中SAT1高表达与食管鳞癌患者预后不良密切相关,差异有统计学意义。结论:METTL3在食管鳞癌中发挥促癌作用,可能通过调控SAT1等靶基因的m6A甲基化影响食管鳞癌患者的预后。

甲基化转移酶抑制剂SGI-1027对肺腺癌细胞迁移侵袭抑制及SPG20基因甲基化调节作用观察

目的分析甲基化转移酶抑制剂SGI-1027对肺腺癌A549细胞迁移、侵袭能力的抑制作用及痉挛性截瘫-20(SPG20)基因甲基化水平的调节作用,以探讨甲基化转移酶抑制剂对肺腺癌细胞迁移、侵袭的影响及机制。方法以不同浓度甲基化转移酶抑制剂SGI-1027作用于肺腺癌A549细胞,MTT法测算细胞增殖活力,筛选得到SGI-1027最佳作用浓度为7.5μmol/L,作为后续实验的作用浓度。将A549细胞分为SGI-1027组和二甲基亚砜(DMSO)组,SGI-1027组培养基中加入SGI-1027培养,对照组培养基中加入DMSO培养。两组培养48 h时,采用划痕愈合实验观察细胞迁移能力,Transwell小室实验观察细胞侵袭能力;采用qRT-PCR法检测细胞DNA甲基转移酶3b(DNMT3b)、SPG20 mRNA,焦磷酸测序法检测细胞SPG20基因甲基化水平,Western blotting法检测细胞DNMT3b、SPG20蛋白。结果培养48 h时,与DMSO组比较,SGI-1027组细胞迁移距离小、穿膜细胞数少(P均<0.05)。与DMSO组比较,SGI-1027组DNMT3b mRNA及蛋白相对表达量下降,SPG20 mRNA及蛋白相对表达量升高(P均<0.05)。SGI-1027组SPG20基因甲基化率较DMSO组降低(P<0.05)。结论甲基化转移酶抑制剂SGI-1027可抑制肺腺癌A549细胞迁移、侵袭能力,降低细胞SPG20基因甲基化水平;SGI-1027可能通过下调细胞内SPG20基因甲基化水平进而抑制肺腺癌细胞的迁移、侵袭能力。

缺氧/复氧经DNA甲基转移酶途径减弱人绒毛外滋养细胞的迁移和侵袭

目的探讨缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)对人绒毛外滋养细胞(extravillous trophoblast,EVT)侵袭能力的调控机制。方法体外培养EVT永生化细胞系HTR-8/SVneo、早孕胎盘绒毛分离的原代EVT细胞和绒毛外植体,1%O2和20%O2浓度转换条件下模拟EVT细胞侵入子宫时的H/R环境,Western blot、免疫荧光技术检测细胞侵袭等关键因子的表达,Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭。结果经H/R诱导后,HTR-8/SVneo细胞迁移和侵袭能力减弱,体外培养的绒毛外植体的外延能力和分离的原代EVT细胞迁移、侵袭能力均减弱;H/R条件下,HTR-8/SVneo细胞中基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9,整合素integrin-β1和integrin-α5蛋白水平降低(P<0.05),DNA甲基转移酶(DNA methyltransferase,DNMTs)的蛋白表达亦下调(P<0.01);H/R条件下,原代EVT细胞中上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的正调控因子Slug、Snails等被抑制(P<0.05),上皮细胞标志因子E-cadherin表达上升(P<0.01),MMP-2和-9、integrin-β1和-α5蛋白水平下降(P<0.05),细胞侵袭能力下降并伴随DNMT1、DNMT3A的表达下降(P<0.05)。HTR-8/SVneo细胞中过表达DNMT1、DNMT3A和DNMT3B可促进间质型标志因子N-cadherin、MMP-2和-9的蛋白表达上调(P<0.05)。结论H/R通过DNMTs调控MMP-2/9等EMT相关因子的表达从而减弱EVT细胞迁移和侵袭能力。

家蚕不同化性品系间DNA甲基转移酶基因转录特性及胚胎早期甲基化水平差异分析

DNA甲基化修饰参与昆虫胚胎发育。家蚕是典型的胚胎滞育昆虫,为探明家蚕DNA甲基化在胚胎发育及滞育调控中的作用,以不同化性家蚕品系为材料,包括一化性品系安康4号(V^(1)AK4)和鲁一(V^(1)Lu1)、二化性品系秋丰(V^(2)QF)和P50(V^(2)P50)、有滞育多化性品系四海(V^(3)SH)、无滞育多化性品系Nistari(V^(3)Nistari),利用qRT-PCR技术分析家蚕甲基化酶基因BmDnmt在家蚕不同化性品系的表达水平,并利用免疫荧光法测定胚胎发育早期DNA甲基化水平。结果显示,在胚胎发育早期BmDnmt1和BmDnmt2在V^(1)AK4、V^(2)P50和V^(3)Nistari品系中表达水平较高,在V^(3)Nistari品系中BmDnmt1的表达水平显著高于V^(3)SH品系;在幼虫期,BmDnmt1和BmDnmt2在多化性家蚕卵巢或精巢组织中表达水平显著高于二化性家蚕,且它们在V^(3)Nistari中的表达水平显著高于V^(3)SH。采用免疫荧光法测定子代蚕卵的DNA甲基化水平,发现不同化性品系中DNA甲基化水平整体呈上升趋势,在产卵后96 h,多化性品系的DNA甲基化水平显著高于二化性品系。以上结果表明,BmDnmt在家蚕不同化性品系胚胎发育早期的表达水平和DNA甲基化水平均存在差异,推测家蚕幼虫期卵巢组织及胚胎发育早期的DNA甲基化水平与家蚕滞育性及化性有关联。研究结果为进一步解析DNA甲基化在家蚕胚胎发育和滞育中的调控机制提供了新的见解。

m6A甲基转移酶METTL3通过AFF4/NF-κB/MYC信号网络影响膀胱癌的研究进展

膀胱癌(BCa)是泌尿外科最常见的恶性肿瘤之一,发病机制目前尚未明确。甲基转移酶3(METTL3)是N6-甲基腺苷甲基转移酶复合物(m6A MTC)的核心部分,介导mRNA的甲基化修饰,影响mRNA的稳定性和翻译过程。研究表明METTL3可以通过AFF4/NF-κB/MYC信号网络对BCa细胞分裂增殖起到促进作用。该信号网络涉及多种信号分子,METTL3可分别影响AFF4、NF-κB和MYC的表达水平影响其下游通路,促进肿瘤发展。

甲基转移酶样3抑制剂STM2457通过调节线粒体功能改善代谢相关脂肪性肝病

目的探讨甲基转移酶样3(METTL3)特异性抑制剂STM2457在代谢相关脂肪性肝病(MAFLD)中的作用及机制。方法动物水平:15只SPF级雄性C57BL/6J小鼠随机分为基础组(CD组,n=5,10%低脂饲料喂养16周)、高脂组(HFD组,n=5,60%高脂饲料喂养16周,建模MAFLD)、STM2457组(STM组,n=5,60%高脂饲料建模小鼠MAFLD后,给予STM245750 mg/kg腹腔注射2周)。斑点杂交实验(Dot-blot)检测小鼠肝组织m6A修饰水平,检测各组肝组织匀浆甘油三酯(TG)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)含量,HE染色观察小鼠肝组织形态,IPGTT和IPITT检验小鼠胰岛素抵抗程度,代谢笼实验检测代谢方式的改变,透射电镜(TEM)检测线粒体的形态。细胞生物学水平:油酸钠/棕榈酸钠作用48 h诱导建立人肝癌细胞株HepG2脂肪变性模型(FFA)。STM2457组在诱导脂肪变性的同时给予STM2457(1μmol/L)作用48 h,通过线粒体膜电位荧光探针(JC-1)检测线粒体功能。结果经高脂饮食诱导建立的MAFLD模型小鼠,其肝组织中m6A修饰水平升高,METT3的mRNA表达上调,与CD组比较,HFD组METT3的mRNA表达上调1.557±0.074倍(P<0.05),而在STM2457作用下,小鼠体质量显著下降且肝脏脂质沉积减少,肝组织m6A修饰水平下降,葡萄糖耐量和胰岛素敏感性升高,肝组织匀浆TG含量减少,(P<0.05),血清ALT、AST含量降低(P<0.05),。HFD组肝细胞线粒体肿胀明显,线粒体膜电位下降,STM2457作用后线粒体形态恢复正常,膜电位上升(P<0.05)。结论METTL3抑制剂STM2457能够通过减轻高脂饮食诱导的线粒体损伤改善MAFLD。