PBMC中HBV cccDNA与HBV宫内感染关系的研究

目的 :对外周血单个核细胞 (peripheralbloodmononuclearcells,PBMC)中乙型肝炎病毒 (HBV)共价闭合环状DNA (covalentlyclosedcircularDNA ,cccDNA)进行扩增 ,并对其产物直接测序鉴定 ,以证实PBMC为HBV肝外复制的场所 ,从而进一步证实PBMC感染为乙型肝炎宫内感染的途径之一。方法 :选择性PCR扩增PBMC中HBVcccDNA ,并对 1例阳性产物直接测序鉴定 ,测序结果与GeneBank中已知序列进行同源性比较。结果 :HBsAg阳性孕妇PBMCHBVcccDNA的检出率为 9 .93% ,新生儿PBMCHBVcccDNA的检出率为 4 . 5 8% ,PBMCHBVcccDNA与公布的已知序列的同源性为 10 0 %。结论 :PBMC为HBV肝外复制的场所 ,PBMC感染很可能是乙肝宫内感染的传播机制之一。

铅诱发雏鸡红细胞核浓缩

目的 给新生鸡雏进行铅染毒,观察铅引起的红细胞核浓缩情况。方法 设立标准饲料对照组、标准饲料染毒组、低Ca对照组以及低Ca染毒组。染毒后的不同时间点,测定血铅浓度及细胞核浓缩情况。结果 标准饲料铅染毒组第2天血铅浓度达到最大值5 7 7μg g ;低钙铅染毒组血铅浓度第4天达到最大值37 2 μg g ;标准饲料染毒组与低Ca染毒组同时在第4、6、8天观察到显著的核浓缩,核浓缩在染毒第6天达到高峰。约2 0 %红细胞核浓缩,同时两染毒组的无核红细胞显著增加。观察低Ca对照组与低Ca染毒组的红细胞DNA电泳,低Ca染毒组DNA呈梯凳状,被分割成大小不等的DNA片段。结论 铅直接作用于鸡红细胞,引起细胞核浓缩。

博尔纳病病毒持续感染细胞系中病毒RNA的原位PCR检测

目的建立检测博尔纳病病毒(BDV)RNA的原位PCR方法。方法首先设计BDV特异性引物以及检测BDV-RNA的原位PCR扩增系统,然后对BDV持续感染细胞(BDV/OL)和正常细胞(OL细胞)爬片进行原位PCR扩增,进而分别用DNA酶或RNA酶消化处理BDV/OL细胞爬片后,再进行原位PCR扩增。结果经原位PCR扩增后,约60%～70%的BDV持续感染细胞核中出现了阳性反应信号,但正常细胞无信号出现,并且病毒感染细胞中的阳性信号在RNA酶消化作用下消失,但不受DNA酶作用的影响。结论该研究建立的PCR检测方法具有BDV和RNA特异性,可以应用于检测相关动物或神经精神疾病患者的脑组织中BDV-RNA,为进一步证明BDV的致病性奠定基础。

饮食服务业人群乙肝病毒DNA感染率调查及意义

目前已证实乙肝病毒标志物(HBVM)是病毒基因编码的产物,只有HBVDNA才是乙肝病毒复制,高传染性的直接证据.为了解饮食服务业人群HBV感染者的传染水平,我们应用PCR法对1185名HBV感染者进行了HBVDNA的检测,现将结果报告如下.

全血基因组DNA快速提取法

目的 建立一种简便、快速、有效、微量外周血基因组DNA的提取方法。方法 采用NaI作细胞裂解剂裂解细胞和细胞核,用氯仿:异戊醇(2 4 :1)直接提取基因组DNA。结果 该方法提取外周血基因组DNA的纯度高,提取效率每毫升外周血可得DNA 33±3.5 2 μg。结论 本法简便、快速、有效,适应于批量临床标本的处理。

JC病毒样颗粒可直接转运进入细胞核

目的 探讨JC病毒 (JCV)病毒样颗粒 (VLP)是否可以直接转运进入细胞核。方法 应用JCV主要外壳蛋白VP1体外表达、重组VLP ,在其表面标记异硫氰基荧光素 (FITC) ,同时在其内部包裹荧光染料Cy3,感染培养的HeLa细胞和SVG细胞 ,荧光显微镜观察VLP入核转运。结果 HeLa和SVG细胞感染包裹Cy3的FITC VLP时 ,FITC与Cy3同时出现于细胞核内相同部位 ;而感染FITC VP1与Cy3混合物时 ,FITC虽可在细胞核内检测到 ,但Cy3信号几乎消失。包裹Cy3的VLP用SDS PAGE展开 ,荧光显像后行考马斯亮蓝 (CBB)染色 ,发现Cy3和VLP移行至不同部位 ,证明Cy3不能与VP1结合 ,提示VLP以完整的颗粒形式转运进入细胞核。应用包裹外源性DNA的VLP感染培养的HeLa和SVG细胞 ,发现包裹的DNA在细胞浆和细胞核内均可检测到 ,提示JCV入核过程与VLP相同。结论 VLP可以不经裂解直接转运进入细胞核 ,JCV入核转运可能与VLP相同。

单克隆抗体与原位杂交检测早期培养细胞中巨细胞病毒的比较(文摘)

巨细胞病毒(CMV)感染人群(如AIDS病人，化疗患者和新生儿等)日益增多．追切需要一种快速敏感检测诊断CMV的方法。目前，检验诊断CMV的方法有：用免疫荧光法检测CMV早期抗原和分离培养病毒，观察CPE的出现等。本文详细地比较了4种检测早期培养细胞CMV诊断方法。这4种方法是(1)直接McAb荧光染色法(DFA)；(2)间接McAb荧光染色法(IFA)；(3)生物素标记DNA探针的原位杂交及(4)辣根过氧化物酶直接标记DNA(HRP—DNA)探针的原位杂交。

广西壮族人群HIV协同受体CCR5基因突变的检测

目的了解广西壮族人群中HIV协同受体CCR5△32等位基因突变频率和多态性的特点,为评估广西壮族人群对HIV的遗传易感性和艾滋病的防治提供理论依据。方法以152例壮族大学生为研究对象,应用PCR和DNA直接测序等方法检测CCR5及CCR5△32突变体。结果未发现CCR5△32等位基因。结论由于未发现CCR5△32,推测广西壮族人群对HIV-1病毒感染可能具有较大的遗传易感性。

电离辐射旁效应信号因子的研究进展

通常人们认为细胞受到直接照射后，能量沉积在细胞核中，引起DNA损伤，继发产生一系列生物学效应，没有受到照射的细胞则不会产生任何生物学效应。然而，近来的研究表明，电离辐射所致的损伤效应并不局限于受照细胞本身，还可在周围未受照射细胞中得到表达，