双色FISH和DNA纤维FISH方法的建立与应用

在构建了含毛细胞白血病相关的结构性倒位inv(5)(p13.1q13.3)的细胞系后,为了确定该新建细胞系在建株过程中其倒位断裂点关键区遗传物质是否发生改变,以生物素或地高辛标记的cCI5-216和cCI5-267黏粒DNA为探针,进行染色体中期、间期和DNA纤维3种双色荧光原位杂交的分析。结果表明:该新建细胞系的3种双色荧光原位杂交结果,均与该细胞系的原代细胞的完全相同,证实了该细胞系倒位断裂点关键区的遗传物质结构未发生改变。该细胞系是揭示毛细胞白血病发病的分子机理的重要研究材料。

大麦45S和5SrDNA定位及5SrDNA伸展纤维的FISH分析

用荧光原位杂交技术对45S和5SrDNA在大麦(HordeumvulgareL.)有丝分裂中期染色体进行了确定分析,较强的45SrDNA信号共有2对,分别分布在大麦的第1染色体的短臂和第2染色体的长臂。而5SrDNA则只有1对杂交信号,位于第3染色体的长臂,但信号较弱。用伸展DNA纤维的荧光原位杂交(Fiber-FISH)技术测定了5SrDNA在大麦的基因组中的拷贝数,计算出5SrDNA的拷贝数约为408～416。对大麦品种中rDNA位点数目的可变性进行了讨论。

高含固率木质纤维素厌氧发酵物总DNA的4种提取方法比较

不同的样本特性和提取方法对获得微生物总DNA的质量有重要影响。文章基于高含固率木质纤维素厌氧发酵物腐殖酸、酚类物质含量高、质地均一性差、微生物浓度低的特点,研究了4种方法提取不同高含固率粪秸厌氧发酵物中微生物总DNA的效果。结果表明,常规的十二烷基磺酸钠法(sodium dodecyl sulfate,SDS)、十二烷基磺酸钠和溴化十六烷基三甲铵结合法(sodium dodecyl sulfate and cetyltrimethyl ammonium bromide,SDS-CTAB)和商业的粪便试剂盒法提取的DNA质量均较差,SDS法和试剂盒法未能获得聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增目的条带,SDS-CTAB法得到的条带较模糊;改进SDS-CTAB法获得的DNA杂质少、纯度高,具有较好的稳定性,A260/A280和A260/A230值分别为1.74~1.86和1.65~1.86,每克样品的DNA浓度在50 ng·μL^-1以上,电泳条带单一齐整、清晰明亮,PCR扩增的目的条带清晰度高,适宜后续分子生物学技术的分析。林格氏液洗脱、聚乙烯吡咯烷酮-40(Polyvinyl Pyrrolidone-40,PVP-40)洗涤液除杂以及裂解液和多种酶联合破壁是改进SDS-CTAB法获得该类专一性样本高质量微生物总DNA的关键步骤。

莲藕DNA纤维的制备方法

建立了一种高效制备莲藕伸展DNA纤维的方法 。

使用DNA分析方法鉴定织物中动物纤维的研究进展

近年来世界各地（特别是欧洲、日本和北美洲）用动物天然纤维生产高档纺织品的需求有所增加。由于数量有限．价格昂贵，产品的掺杂现象时有发生。通常，纤维的分析是在扫描电子显微镜（SEM）上进行的。但是．该方法非常费时．且价格昂贵．测试结果很大程度上取决于测试步骤及专家的专业水准。

采用DNA分析技术进行天然动物纤维鉴别获得突破

由上海出入境检验检疫局工业品与原材料技术中心完成的“基于DNA技术的羊绒羊毛精确定性定量检测方法的建立及应用”项目．创新了特种动物纤维的定性和定量方法，确立了有效的毛发DNA抽提法、实现了通过检测动物纤维自身携带的DNA来完成动物纤维的鉴别和山羊绒／绵羊毛混合物的定量，提高了检测的客观性和准确性。项目建立的检测技术填补了国内外空白，部分成果达到了国际先进水平。

羊毛?羊绒?不再傻傻分不清楚——基于DNA技术的羊绒羊毛精确定性定量检测方法的建立及应用

羊毛,羊绒,疑似羊绒?究竟一块面料一件服装里含有哪种纤维,这些纤维各自的含量又是多少,这些"雾里看花"已久的问题,如今终于得以"豁然开朗"。基于DNA技术的羊绒羊毛精确定性定量检测方法的建立及应用项目,以特种动物纤维为主要研究对象,由上海出入境检验检疫局工业品与原材料检测技术中心研究完成。该中心成立于1999年。

软组织骨化性纤维黏液样肿瘤：临床病理学、蛋白学组和基因学组研究

软组织骨化性纤维黏液样肿瘤（OFMTs）是一种分化方向不确定的罕见骨和软组织交界性肿瘤。而恶性OFMT的有无尚存争议,为了更好的理解OFMT的自然属性和分化方向,根据2003年Folpe和Weiss系统进行病例分类,通过光镜、免疫组化、基因学组、蛋白学组和FISH方法,作者对46例临床和随访资料完整的病例进行了研究。

3种真核藻类DNA提取方法比较

目的建立一种简单、快速、高效的从自然水样中提取藻类总DNA的方法。方法通过DNA产物的浓度和纯度、DNA产物的完整性及PCR扩增的比对,对3种真核藻类DNA的提取方法 [纤维素酶法、改良十六烷基三乙基溴化铵(CTAB)法和超声波破碎试剂盒法]进行比较。结果 3种方法得到的基因组DNA均较完整,片段大小都在23 kb左右;且3种方法得到的DNA浓度均较高。CTAB法和试剂盒法提取得到的总DNA A_(260nm)/A_(280nm)的比值分别为1.767和1.824,并且A_(260nm)/A_(230nm)比值均在1.9以上,说明提取得到的总DNA纯度较高,且PCR产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳检测得到明亮的条带。而纤维素酶法得到的DNA的A_(260nm)/A_(280nm)比值与A_(260nm)/A_(230nm)比值分别为1.617和1.522,表明盐及蛋白质污染较前两者严重。结论综合考虑后,认为CTAB方法更适合从自然水样中提取藻类DNA。

慢性乙型肝炎防治指南(2015更新版)

本指南为规范慢性乙型肝炎（CHB）的预防、诊断和抗病毒治疗而制订,涉及CHB其他治疗方法和策略请参阅相关的指南和共识。中华医学会肝病学分会和感染病学分会于2005年组织国内有关专家制订了《慢性乙型肝炎防治指南》（第1版）,并于2010年第1次修订。近5年来,国内外有关CHB的基础和临床研究取得很大进展,为此我们对本指南再次修订。

乳腺癌MGMT和TopoⅡα表达及临床意义

目的:探讨乳腺癌中拓朴异构酶Ⅱα(T opoⅡα)和DNA修复酶(MGMT)表达的相关性及临床意义。方法:采用SABC免疫组织化学方法,检测乳腺组织和乳腺纤维腺瘤各30例和76例乳腺癌标本中T opoⅡα和MGMT的表达率。结果:乳腺腺瘤中T opoⅡα无阳性表达;而MGMT阳性率为15%(3/20)。乳腺癌中MGMT阳性率为59.21%(45/76)。T opoⅡα阳性率为68.42%(52/76)。T opoⅡα和MGMT有低度相关性。61岁以上老年组T opoⅡα和MGMT阳性率均低于60岁以下组。有淋巴结转移组阳性率高于无转移组。结论:T opoⅡα和MGMT过表达率与乳癌患者年龄及有否淋巴结癌转移有关。检测乳腺癌中T opoⅡα和MGMT对提示予后和临床选择化学治疗方案有指导意义。

可溶性TGF-β_1Ⅱ型受体逆转录病毒表达载体的构建

目的:构建表达人TGF—β1Ⅱ型受体细胞外结合区和人IgG1 Fc的融合蛋白逆转录病毒载体,为进一步肝纤维化的基因治疗奠定实验基础. 方法:以RT—PCR方法扩增目的基因TβRⅡ-IgG1 Fc,扩增产物纯化后克隆至测序载体pGEM—T—Easy,挑取阳性克隆酶切鉴定后测序;利用重组DNA 技术,将TβRⅡ-IgG1 Fc基因亚克隆至逆转录病毒载体pLXSN中,重组质粒pL(TβRⅡ-IgG1 Fc)SN在脂质体介导下转染PA317包装细胞,G418筛选,直至出现抗性克隆,扩大培养,测定病毒滴度. 结果:经测序、限制性酶切分析及PCR方法鉴定,载体插入基因序列、大小、位置均正确,并用PA317细胞进行包装、病毒滴度测定、筛选,建立具有较高滴度的感染性重组病毒产生细胞系. 结论:成功构建了重组质粒pL(TβRⅡ-IgG1 Fc)SN, 可望为肝纤维化的基因治疗提供有效途径.

pSLX-CMV/TβRII-IgG1Fc载体的构建

目的构建表达人TGFβ1II型受体细胞外结合区和人IgG1Fc的融合蛋白逆转录病毒载体,为进一步肝纤维化的基因治疗奠定实验基础。方法以RTPCR方法扩增目的基因TβRIIIgG1Fc,扩增产物纯化后克隆至测序载体pGEMTEasy,挑取阳性克隆酶切鉴定后测序;利用重组DNA技术,将TβRIIIgG1Fc基因亚克隆至逆转录病毒载体pSLXCMV中,重组质粒pSLXCMV/TβRIIIgG1Fc在脂质体介导下转染PA317包装细胞,G418筛选,直至出现抗性克隆,扩大培养,测定病毒滴度。结果经测序、限制性酶切分析及PCR方法鉴定,载体插入基因序列、大小、位置均正确无误,并用PA317细胞进行包装、病毒滴度测定、筛选,建立具有较高滴度的感染性重组病毒产生细胞系。结论成功构建了重组质粒pSLXCMV/TβRIIIgG1Fc,可望为肝纤维化的基因治疗提供有效途径。

《慢性乙型肝炎防治指南》(2015更新版)

本指南为规范慢性乙型肝炎（CHB）的预防、诊断和抗病毒治疗而制订,涉及CHB其他治疗方法和策略请参阅相关的指南和共识。中华医学会肝病学分会和感染病学分会于2005年组织国内有关专家制订了《慢性乙型肝炎防治指南》（第1版）,并于2010年第1次修订。近5年来,国内外有关CHB的基础和临床研究取得很大进展,为此我们对本指南再次修订。

皮肤美白要慎重

黑色素可以护肤 皮肤中的黑色素能将日光中的有害光线地过滤，清除紫外线照射引起的自由基，防止弹力纤维变性所致的皮肤老化。它还能保护皮肤细胞中的DNA，使其免遭有害因素引起的致突变效应，从而减少皮肤癌的发生。