用DNA纯化试剂分离除去PCR抑制剂

作者对于影响PCR扩增成功的抑制剂进行了去除实验,发现使用Wizard^(?) DNA Clean-Up SystemDNA纯化试剂Wizard^(?) DNA Clean-Up System是一种去除色素和泥土PCR抑制剂的较好方法.经多起案件检材使用效果良好.

一种新的小分子DNA纯化方法——石英棉纯化法

建立了小分子DNA的高效分离纯化方法，适合于分离几十到300个核苷酸组成的基因，在此基础上，建立更大的DNA片段的分离纯化方法。对不同大小的DNA片段经琼脂糖凝胶电泳后，采用石英棉分离纯化法纯化DNA。结果显示，石英棉的分离效果最好，对于200个碱基以下的DNA的回收率约高达90％以上，对于300个碱基的DNA回收率为约85～90该项技术纯化的DNA的酶切、酶连效率与试剂盒法纯化的DNA的酶切、酶连效率相同。该分离纯化DNA技术明显优于试剂盒方法。

优化磁性粒子为基础的系统的DNA纯化方案的重要性

从复杂生物基质中快速、高效地分离核酸是在获取各种实验的最佳起始原料的重要一步。磁性粒子为基础的操作流程提供了一个快速简单的解决方案,它特别适合用于自动化,在获得纯净和完整的DNA或RNA时以最少的动手时间获得良好的重现性结果。因此,必须优化基于磁珠的纯化流程来达到最高质量与数量的核酸提取。本文介绍了一个自动化、高速、以磁性粒子为基础的纯化系统来实现理想的DNA纯化方案,并考察了不同搅拌速度组合,以及在洗脱步骤的加热效应对DNA纯化数量和质量的影响。

“DNA粗提取和鉴定”实验设计与改进

对DNA粗提取与鉴定实验进行优化,探究植物组织的多种破碎方法对DNA粗提取的影响,并用氯仿等有机物对DNA粗提取物进一步纯化,分析DNA未纯化与纯化后的纯度差异。结果显示,相较于破壁机破碎、加液氮研钵研磨以及玻璃匀浆器研磨,不添加液氮用研钵研磨效果更好。DNA粗提液经纯化后纯度显著提高,蛋白质及盐类等污染明显减少。

从土壤中快速提取纯化DNA方法的建立

比较了从土壤中提取及纯化DNA的不同方法,确立了TENS-乙酸铵提取方法和PVPP柱层析的纯化方法.结果显示:TENS-乙酸铵提取方法对不同土壤均有较好的提取效果,DNA片段长度在23.1 kb以上,且无明显降解;PVPP柱层析的纯化方法比胶回收纯化方法的DNA回收效率高、质量好,可用于PCR扩增.

高盐极端环境土壤基因组DNA的分离纯化方法研究及基因文库的构建

以钦州市犀牛角镇晒盐池内（盐浓度〉25％）的土壤样品为研究对象，对土壤混合基因组DNA的提取和纯化方法进行了深入研究，结果表明。冻融法、十二烷基磺酸钠（SDS）和蛋白酶K联合使用的提取法，能有效提高DNA得率，DNA的产量达到每克土壤样品10～15μg。交联聚乙烯吡咯烷酮（PVPP）、SeDhadex G-200树脂以及大量胶回收的使用，可有效纯化DNA。纯化的DNA产量可达每克土壤样品4～6μg，DNA片段大小〉30kb，将纯化的DNA用BamH Ⅰ部分酶切后构建以pLAFR3为载体的混合基因组文库，该文库包含15600个克隆，外源片段DNA平均大小为18kb。通过DNA序列测定和同源性比较，对从文库中随机挑取的10个克隆进行了序列分析，发现9个外源插入片段包含未知DNA序列。

纳米磁性粒子在DNA分离与纯化中的应用进展

纳米磁性粒子是一种新型的亲和纯析固相载体 ,其粒径小 ,具有超顺磁性 ,表面积大 ,表面可赋予多种反应基团如链霉亲和素、抗体等 ,或DNA片段 ,在磁场作用下可分离目的DNA ,已逐步应用于分子生物学领域中 ,有着极为广泛的应用前景。

不同酶切体系对胶回收纯化DNA浓度的影响

目的通过建立不同的酶切体系,找寻酶切效果好、胶回收试剂盒纯化DNA得率高的实验设计。方法使用XhoⅠ单酶切重组质粒pcDNA3-P2X4,酶切体系的体积分别为:150μl、160μl、170μl、180μl;酶切体系组成为:dddH2O(补足体积)、BufferR(应用浓度是酶切体积的10%)、质粒DNA(无论所得质粒浓度如何,琼脂糖凝胶电泳胶回收的DNA上样量统一为23μg),XhoⅠ10μl(6μl、4μl两次加入);反应温度为:37℃;酶切的时间为2～3h。结果酶切体系越大,所需要的酶切时间越短、酶切效果越好、酶切条带越接近Marker标准条带(通过电泳拍照观察所得),但是胶回收纯化后DNA的浓度却越低:150μl体系DNA的浓度=308.96±8.71μg/ml,160μl体系DNA的浓度=286.62±8.37μg/ml,170μl体系DNA的浓度=245.80±15.64μg/ml,180μl体系DNA的浓度=198.00±16.54μg/ml(方差分析,P<0.05,n=5)。结论将酶切的体系放大,杂质将相对稀释,不需增加酶的用量就能取得较好的酶切效果;提取质粒的浓度和纯度也决定着酶切效果。

植物类药材基因组DNA提取与纯化的方法学研究

本文探讨了菊科9种植物和地胆草的4种对口商品药材基因组DNA提取与纯化的原理、方法，通过对3种常用植物基因组DNA提取方法（CsC1梯度超速离心法、CTAB／CsC1梯度超速离心法和DTAB微量提取法）的条件摸索，在DNA产率、纯度以及提取纯化过程中影响PCR扩增因子方面进行比较，认为CTAB微量提取法是植物类药材基因组DNA一种比较省时、有效、经济的提取方法。

从土壤样品中提取和纯化微生物DNA方法研究进展

自然界存在的微生物只有一少部分能够通过标准纯培养方法获得,而绝大多数是难培养和不能培养的微生物,近年出现了一些新的直接从环境基质中提取微生物DNA的方法,用来研究环境中微生物多样性。对目前用于提取和纯化环境样品中微生物DNA的研究进展进行了综述.

红壤中微生物总DNA的分离与纯化

采用2种不同的土壤DNA直接提取方法,提取了4种不同类型红壤的微生物总DNA,并对提取的DNA用Sephadex G-200离心层析法进行了纯化。结果表明:2种方法都可以从红壤中提取到分子量大于10kb的DNA的片段,不同提取方法获得的DNA的产量存在较大差异。方法二用冻融进行预处理再结合SDS和溶菌酶的化学裂解方法,是效果较好的DNA抽提方法。其提取DNA产量高,重复性好,适合于土壤少量样品的DNA提取。Sephadex G-200离心层析法能较好地去除土壤中的有机物杂质,DNA溶液由原来的黄褐色变得澄清透明,且不会使提取的DNA断裂或损失,是一种较好的土壤微生物总DNA纯化方法。

用琼脂糖包埋——小室电洗脱纯化DNA的新方法

先将５５℃保温的ＤＮＡ粗提液与１．２％琼脂糖凝胶等体积混合，然后把混合物注入由１．５ｍｌＥｐｐｅｎｄｏｒｆ离心管制作的小室电洗脱装置进行电洗脱纯化。纯化后的ＤＮＡ能被限制性内切酶完全酶解，其纯度足以进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交等分析。该法具有所需条件简单、操作方便且花费低等特点，可作为常规的ＤＮＡ纯化方法。

家畜冷冻精液DNA的纯化及影响因素分析

[目的]基于人精液DNA试剂盒提取法,优化家畜冷冻精液DNA纯化方法,探讨冷冻精液中影响DNA提取质量的因素。[方法]使用摩拉水牛冷冻精液,按100μL(或200μL)样品初始量,以及0.5、1、1.5、2、3和5 h的蛋白酶解时间,用试剂盒法纯化DNA。从DNA产物浓度、A 260/A 280和A 260/A 230值3方面,结合琼脂糖凝胶电泳和PCR检测进行分析,最终确定DNA纯化的最佳精液初始量以及最佳蛋白质酶解时间。在此基础上,纯化67份来源于牛、马、驴等不同家畜品种的冷冻精液DNA,同时测定每份精液中蛋白质、甘油/甘油三酯和果糖的含量,结合精液样品的冻存时间,研究以上4种因素对DNA纯化质量的影响。[结果]使用100μL冷冻精液,蛋白酶解3 h的纯化效果最好,而且酶解2和3 h的DNA产物,均可以满足后续核基因组和线粒体基因组常规PCR的要求。家畜冷冻精液中蛋白质、甘油/甘油三酯和果糖含量与提取DNA浓度、A 260/A 280和A 260/A 230值(纯度)在不同程度上呈斯皮尔曼负相关,其中果糖是干扰DNA纯化的关键因素,同时样品的冻存时间与DNA质量存在显著正相关关系。虽然冷冻精液中蛋白质、甘油/甘油三酯和果糖等成分可以减轻冷冻复苏对精子的损伤,但这些成分的增加,会对DNA纯化质量产生一定的负面影响,即使它们随着冻存时间及DNA纯化时酶解时间的延长而有所消耗。[结论]优化后的人精液DNA试剂盒法可完全适用于家畜冷冻精液DNA的纯化。

一种有效纯化低拷贝质粒DNA的改良硅藻土法

碱法制备的低拷贝质粒因含有大量杂质而无法获得有效的测序结果。为此,以纯λDNA为样品,对硅藻土纯化DNA的方法进行了优化,表明硅藻土悬液的最佳用量是20μl/μgλDNA,回收率达77.31%。应用此改良硅藻土法纯化一长为14953bp的低拷贝质粒pLZ14,所得质粒纯度达23.87%,比未纯化前提高了11.06倍。经纯化的pLZ14质粒测序信号强、无误认碱基,而未经纯化的质粒测序时信号弱、错误普遍存在。

红树林土壤环境DNA提取和纯化方法比较

探讨适合红树林土壤环境DNA的提取及纯化方法,筛选出可以提取到高质量且物种覆盖度广的环境DNA的方法。本研究通过多种方法提取和纯化红树林土壤环境DNA,并进行物种覆盖度(细菌、真菌、底栖无脊椎动物、植物、线虫)的比较评估。用6种方法提取红树林潮间带林下土壤环境DNA,并使用2种方法对DNA进行纯化;用不同物种类群的通用引物进行PCR扩增,评估各种方法提取和纯化的环境DNA的物种覆盖度。结果显示,不同方法提取DNA的效率有一定的差异,但2种方法纯化前后DNA的质量并没有显著差异;5种试剂盒方法提取的DNA均可以有效扩增出细菌和无脊椎动物的DNA;DNeasy PowerSoil试剂盒提取的DNA扩增植物引物结果最佳;来自不同区域红树林土壤的DNA在扩增真菌对应引物时差异较大;2种试剂盒直接提取的DNA可以有效扩增出线虫的DNA。本研究为今后基于环境DNA技术研究红树林生物多样性工作的顺利开展提供科学依据,奠定了一定的基础。

环境样品中DNA的分离纯化和文库构建

采用研磨 /冻融和SDS/蛋白酶K热处理等理化方法 ,直接从性质不同的环境样品中提取和纯化混合基因组DNA。所获得纯品DNA的产量为每克样品 2～ 1 6μg。对纯品DNA进行限制性内切酶处理后 ,构建了以pUC1 8为载体的DNA文库。建库效率为从每克环境样品获得约 1 0 3～ 1 0 4 个含 3～ 8kb外源随机插入片段的克隆。通过DNA序列测定和基因注释 ,对从文库中随机选取的克隆进行了分析 ,发现外源插入片段均含序列未见报道的新基因。本文所做的尝试对于保存。

太湖流域土壤微生物基因组总DNA分离纯化及其质粒文库的初步构建

采用研磨 /冻融和SDS/蛋白酶K热处理以及CTAB处理等理化方法 ,直接从太湖流域土壤样品中抽提得到微生物总基因组DNA .所得粗DNA用透析袋法以及NucleaotrapsuspensionDNA纯化试剂盒进行了纯化 .纯化过的DNA能够满足常用限制性内切酶酶切、细菌 16SrDNA通用引物和随机引物进行PCR扩增的要求 .将所得纯品DNA经过EcoRI部分酶切之后与酶切并脱磷酸的pSK-空载体连接 ,再以大肠杆菌JM10 9为宿主细胞初步构建了土壤微生物基因组文库 .图 6参

法医DNA提取纯化试剂盒在MP-120自动化工作站上提取案件样本DNA的性能研究

本文利用自主研制的法医DNA提取纯化试剂盒在MP-120自动化工作站上对48份检材样本DNA进行了提取和扩增,成功检测到所有样本DNA的STR分型,检测成功率为100%。结果表明法医DNA提取纯化试剂盒具有较高的灵敏度和检材适应性,提取得到的DNA模板质量完全能够满足法医日常DNA检验工作的需要。

法医DNA提取纯化试剂盒在Hamilton Microlab~ Starlet DNA自动提取仪上的应用研究

本文利用自主研制的法医DNA提取纯化试剂盒在Hamilton Microlab~ Starlet DNA自动提取仪上提取276份血斑样本DNA,PCR扩增检测到270份样本STR分型,成功率达97.8%。结果表明法医DNA提取纯化试剂盒可与国外进口的DNA自动提取仪相配伍进行血斑样本的批量提取。