从桑树营养组织中提取高纯度DNA的方法

本文通过改进ＳＤＳ和ＣＴＡＢ提取ＤＮＡ的方法，对不同的桑树材料进行了ＤＮＡ的提取。结果表明２种方法都获得了高质量的ＤＮＡ，并进一步提出ＣＴＡＢ法特别适合多糖、酚类化合物以及样品氧化程度高的材料。

高纯度质粒DNA规模化生产流程的建立和改进

通过对质粒提取过程进行分析,探讨质粒提取过程中的影响因素,分析影响质粒质量的因素,以及优化提取工艺流程,并建立质控标准来控制质粒提取过程中带来质量和数量损失,从而制备出高纯度的质粒DNA。温度诱导可以增加质粒DNA的产量,在大肠杆菌对数生长中期进行温度诱导,从37～43℃,每间隔1℃度进行诱导,结果表明经42℃诱导12h,质粒DNA的产量可以增加66%以上,为降低成本,大规模生产重组质粒提供良好保障。另外对碱裂解粗提质粒的方法和流程进行改进,采取LiCl去除细胞碎片和杂蛋白;PEG8000沉淀质粒DNA从而去除经RNAase消化的RNA;之后利用少量的酚氯仿混合液去除蛋白质;不仅蛋白质,RNA去除干净,而且在实验时间安排上以及试剂使用量上进行控制,达到了贵重试剂使用量少,去除杂质干净的效果,更为后续的精提做好准备。利用凝胶层析,亲和层析,阴离子交换层析依次去除残余在质粒DNA中的蛋白质、RNA、非超螺旋DNA以及内毒素,达到了制备高纯度质粒DNA要求,并且达到了可以在动物实验中进行转染的质量要求。

PVP在桑叶总DNA提取中的应用

采用CTAB(CetyltrimethyleAmmoniumBromide ,十六烷基三乙基溴化铵 )缓冲液 ,附加 1%PVP(Polyvinylpyrrolidone,聚乙烯吡咯烷酮 ) ,用平衡酚 -氯仿 -异戊醇 -核糖核酸酶法提取桑叶总DNA ,经全自动分光光度计SmartSpecTM检测 ,结果表明用附加PVP的CTAB缓冲液提取的桑叶总DNA纯度高 ,A2 6 0 /A2 80比值在 1.80～ 1.90之间 ,多糖、蛋白质、RNA去除较彻底 ,能满足对总DNA质量要求较高的试验 。

FFPE组织提取DNA样本质量评价的多中心调研

中性福尔马林固定石蜡包埋（formalin fixed paraffin embedded,FFPE）一直是病理科处理组织样本的标准程序,也是病理科形态学诊断的基石。随着医学的发展,靶向药物在临床治疗中被广泛地使用,FFPE的组织块还必须用于药物靶点的基因诊断,特别是体细胞突变相关基因诊断,为患者提供基因的诊断结果以指导临床诊疗。

一种快速的植物DNA制备方法

介绍一种DNA提取方法 ,该方法具有快速、简便、高效的优点 ,可在 6 0min内提取出纯净无RNA的DNA ,获得的DNA纯度高 ,DNA质量可满足酶切及PCR等分子生物学实验要求。

一种禽类血液基因组DNA高效提取通用方法的建立

为了建立一种适合禽类血液的廉价、高效、通用的基因组DNA提取方法,试验采用鸡、鸭、鹅、鸽、火鸡、麻雀6种禽类血液为材料,提取的禽类血液DNA经微量分光光度计分析、基因组DNA凝胶成像分析以及PCR扩增效果检测。结果表明：提取的6种禽类血液DNA质量较好（OD260/OD280值范围为1.80-1.84,OD260/OD230值范围为2.21-2.30）,基因组DNA电泳主条带和PCR扩增产物条带清晰、整齐、无拖带。说明本方法能够完全适用于大批量禽类血液基因组DNA的提取,且DNA纯度较好,满足后续相关分子生物学试验要求。

一种快速微量提取植物叶片DNA的方法

介绍了一种快速提取微量DNA的方法。该方法简单易行,无需任何特殊设备,所需样品量少。提取的DNA纯度高,D260nm/D280nm在1.9～2.1之间,可满足RAPD、SSR、转基因植株的PCR检测等以PCR扩增为基础的实验需要。

Sorghum属7个近似种的DNA微量提取方法比较

本研究以Sorghum属中 7个近似种的种子为试验材料 ,采用CTAB、SDS、CTAB与SDS相结合及TaKaRaDNA提取试剂盒等 4种方法提取DNA ,并对不同提取方法所获取的DNA纯度、浓度及DNA提取率进行研究分析比较。结果表明 :采用Moller方法对其 7个近似种的基因组DNA的提取为最佳方法。

天津海底淤泥微生物DNA的提取方法研究

[目的]探索一种快速、高效提取海底淤泥中微生物DNA的最佳方法,为开展海底淤泥微生物的分子生物学研究奠定基础。[方法]分析了不同DNA提取液浓度和不同的腐植酸去除方法对淤泥中微生物DNA提取的产率、纯度的影响,探讨天津市海底淤泥中微生物DNA提取的最佳方法。[结果]海底淤泥用焦磷酸钠和氢氧化钠混合浸提剂提取腐植酸后,再用蒸馏水洗去浸提液,用4 ml DNA提取液提取,所得DNA的产率及纯度均优于对照组。[结论]该试验结果为海底淤泥微生物的分子生物学研究奠定了基础。

影响外周血DNA提取质量因素分析

目的探讨人体外周血冻存标本存放时间对提取DNA质量的影响。方法使用外周血DNA提取试剂盒FlexiGene DNA Kit（250）,对-80℃冻存1a、2a、3a和4a的外周血标本进行DNA提取,NanoDrop-2000分光光度仪检测DNA浓度和OD260/OD280比值,1%琼脂糖进行电泳检测,采用单因素方差分析比较DNA质量。结果冻存1a、2a和3a的外周血DNA浓度之间无差异（P〉0.05）,冻存4a的外周血提取DNA浓度明显低于冻存1-3aDNA的浓度（P〈0.05）。冻存1a的外周血DNA纯度明显高于冻存2a及以上的样品（P〈0.05）。结论外周血标本-80℃冻存时间超过3a对提取DNA的质量有明显的影响。

利用简化的SDS法提取杨树基因组DNA

以杨树组培苗幼嫩叶片为材料,在室温下采用简化的SDS法快速制备其基因组DNA,并对制备DNA过程中的影响因子进行了初步研究。结果表明,采用此方法制备的基因组DNA在数量和纯度上可以满足聚合酶链式反应(PCR)的要求。另外,DNA提取缓冲液中添加一定浓度的PVP、β-巯基乙醇,有利于DNA提取。

板栗叶片DNA的提取及AFLP反应体系的建立

以初展开的板栗嫩叶为材料,利用改进的CTAB法,提取到高质量的板栗叶片总DNA。通过优化酶切连接、预扩增、选择性扩增等试验条件,建立了板栗AFLP银染反应体系,得到了清晰的板栗AFLP指纹图谱。为板栗品种的分子标记和板栗品种间亲缘关系等研究奠定了基础。研究结果表明:①DNA模板的质量影响酶切以及后续的连接扩增反应。以初展开的嫩叶提取的板栗叶片总DNA纯度最高,所含蛋白质、小分子杂质少,改良的CTAB提取法可用于板栗AFLP分析,形成清晰的AFLP指纹。②先进行酶切后再进行酶连的反应体系比酶切酶连一起进行的体系效果更好。板栗基因组DNA最佳酶切反应体系为:模板DNA总量500ng,反应体积为25μl,10×Y+/TanqoTMBuffer2.5μl,BSA0.8μl,EcoRI5U,MseI5U。连接反应体系中T4DNA连接酶浓度2U即达最佳效果。酶切、酶连反应最佳温度均为37℃。③以板栗为材料进行AFLP标记时,E AAC+M CAA、E AAC+M CAT和E AGT+M CAT三个引物均获得较好的多态性。其中以E AGT+M CAT引物组合的扩增条带信号强度一致性好,条带分布均匀,能够得到稳定、清晰、分辨率较高的指纹谱带,可进行中国板栗的遗传变异分析。

几种微量提取盐芥DNA方法的比较

[目的]探讨一种提取盐芥高质量DNA的方法。[方法]分别采用简化SDS法、改良CTAB法、CTAB法和改良尿素法提取盐芥DNA,测定不同方法所提取DNA的纯度和浓度,并进行电泳和酶切检测,并对其结果进行比较。[结果]改良CTAB法提取的DNA纯度高、质量好,没有糖类、酚类及蛋白质的污染,能用于PCR扩增和限制性内切酶酶切。CTAB法提取的DNA没有蛋白质的污染,但有酚类物质的污染,可作为PCR扩增的模板。SDS法以及尿素法提取的DNA质量较差,不能满足分子生物学研究的要求。[结论]改良CTAB法比其他方法更适合分子生物学分析和研究。

1种快速提取转基因冰草基因组DNA的方法

本文介绍了1种改良SDS法提取转基因冰草基因组DNA的方法。该方法具有快捷、高效、经济等特点,所提取的DNA纯度符合分子生物学操作要求,可用于转基因冰草植株的PCR检测及Southern检测等。

从绵羊全血提取DNA的改进方法

以小尾寒羊冷冻全血为材料 ,介绍了提取DNA的改进方法。试验表明 ,提取的DNA纯度高 ,产量在正常范围之内 ,PCR扩增效果良好 。

动物组织DNA试剂盒提取水牛精液基因组DNA效果观察

为了快速、高效地提取水牛精液基因组DNA,试验采用动物组织DNA试剂盒并对一些步骤进行优化,以此方法抽提DNA。结果表明：使用动物组织DNA试剂盒可以获得水牛精液基因组DNA,DNA纯度（OD260/OD280值）为1.71±0.22,浓度为（61.38±20.68）ng/μL,水牛精液基因组DNA可直接用于PCR反应。

介绍一种改量的粪便细菌基因组DNA提取试验方法

目的观察改变细菌裂解温度对提取粪便细菌基因组DNA量和纯度的影响。方法收集10例肝硬化患者粪便,每例患者粪便等分成两份,再随机分成两组。采用QIAamp DNA Stool Mini Kit试剂盒(国际通用粪便细菌基因组DNA提取试剂盒)进行抽提,一组(A组)按照试剂盒说明书温度要求进行粪便细菌基因组DNA提取,一组(B组)对试剂盒细菌裂解温度改良后再进行提取。结果与按照试剂盒说明书温度进行提取组相比,改变细菌裂解温度后粪便基因组DNA提取量明显增高(P<0.05),而粪便基因组DNA提取纯度(OD260/280、OD260/230)无明显变化(P>0.05)。结论改变细菌裂解温度能明显提高粪便细菌基因组DNA提取量,而不改变粪便细菌基因组DNA的提取纯度。该方法可以解决因粪便采样量少导致粪便基因组DNA提取量不足的问题。

DNA自动测序中几种影响因素的研究

目的探讨恒温ＤＮＡ自动测序中几种因素对测序结果的影响。方法对ＤＮＡ纯度、浓度和测序过程中所用水的质量对ＤＮＡ自动测序结果的影响进行了回顾性研究。结果当ＤＮＡ纯度较低时，核苷酸曲线的信噪比降低，或多个核苷酸峰重叠而判读困难；使用低浓度ＤＮＡ时，所能判读的核苷酸长度明显短于较高浓度时；测序反应过程中和配制测序胶时所用的纯水水质较差时，核苷酸峰可变宽、变平，或出现双峰，影响判读结果。结论ＤＮＡ纯度和浓度以及测序反应中及配制测序胶时所用水的质量对测序结果有明显影响。提示恒温ＤＮＡ自动测序时须使用高纯度的ＤＮＡ和高质量的纯水；若要获得较长ＤＮＡ片段的序列。