骨形态发生蛋白4/DNA结合抑制剂2信号通路在晚期内皮祖细胞修复血管内皮损伤中的作用

目的研究骨形态发生蛋白4(BMP4)信号通路在晚期内皮祖细胞(LEPC)介导的血管内皮修复中的作用与分子机制。方法分离健康人外周血单核细胞体外培养7d和28d分别得到早期内皮祖细胞(EEPC)和LEPC,观察BMP4在EEPC和LEPC中的表达情况。体外采用短发卡RNA(shRNA)沉默技术和基因转染干预BMP4的表达,观察其下游分子靶点DNA结合抑制剂2(Id2)表达情况及对LEPC的迁移、黏附等功能的影响。建立裸鼠颈动脉内膜拉脱损伤模型,在体观察干预BMP4信号通路如何介导LEPC修复血管内皮损伤。结果相对于EEPC,BMP4选择性高表达于LEPC(P<0.01)。shRNA法沉默LEPC的BMP4表达后,其下游靶点Id2的表达水平下调(P<0.01);相应的LEPC体外迁移、黏附能力明显减低(P<0.01);将沉默了BMP4的LEPC在体移植到裸鼠后其颈动脉内皮损伤的修复面积明显减小[(34±6)%比(58±7)%,P<0.01]。基因转染上调LEPC的BMP4表达后,其下游的Id2表达明显增强(P<0.01),LEPC的迁移、黏附功能改善(P<0.01),移植到裸鼠体内后其颈动脉内皮损伤的修复面积明显增加[(75±5)%比(59±6)%,P<0.01]。结论LEPC修复血管内皮损伤的作用与BMP4/Id2信号通路的表达密切相关。

参芪复方调控GK大鼠生物钟相关基因Id2、Usp2的实验研究

目的采用基因芯片技术探索参芪复方减少2型糖尿病血糖波动的内在机制。方法30只自发性2型糖尿病(GK)大鼠适应性喂养4周后,随机分为模型组、参芪复方组(参芪组)和西格列汀组(西药组),每组10只,另设10只Wistar大鼠为正常组。参芪复方组给予参芪复方浸膏灌胃,西药组给予西格列汀混悬液灌胃,空白组、模型组给予生理盐水灌服,连续给药8周。药物干预期间观察大鼠一般状态,并根据体重变化及时调整灌胃量,每周1次测1日内8:00、10:00、14:00、16:00、18:005个时间点的血糖情况,计算每日血糖平均水平(MBG)、每日平均血糖的标准差(SDBG)、最大血糖波动幅度(LAGE)。实验第8周处死大鼠,采集血液标本,采用放免法和ELISA法测定血清胰岛素(INS)、胰高血糖素(GC)水平。应用基因芯片技术检测DNA结合抑制剂2(Id2)及泛素特异性加工酶2(Usp2)水平,同时采用实时荧光PCR检测Id2、Usp2 mRNA表达水平。结果造模期间,各组GK大鼠随着周龄增长,出现精神萎靡,反应迟缓,动作缓慢的现象,参芪组能改善GK大鼠多食、多饮现象。与正常组比较,模型组INS水平、Usp2 mRNA表达水平降低,GC、MBG、SDBG、LABG均明显升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,西药组INS水平升高,GC水平降低(P<0.01);参芪组、西药组Usp2 mRNA表达升高,MBG、SDBG、LABG及Id2 mRNA表达均明显降低(P<0.05,P<0.01)。同时参芪组GC、SDBG、LABG水平高于西药组(P<0.01)。结论参芪复方可能通过调节生物钟相关基因Id2、Usp2减少血糖波动。