基于CRISPR/Cas9系统建立DNA结合抑制因子3基因敲除人皮肤成纤维细胞系

目的利用CRISPR/Cas9技术建立转录因子DNA结合抑制因子3(ID3)稳定敲除的人皮肤成纤维细胞系(BJ-5ta),为研究ID3生物学功能提供细胞模型。方法针对ID3基因的生物学特性设计3对小向导RNA(sgRNA),将其分别插入LentiCRISPR v2载体中,构建重组质粒;用构建的慢病毒载体感染BJ-5ta细胞,通过嘌呤霉素筛选获得ID3基因稳定敲除的BJ-5ta细胞系;利用T7核酸内切酶Ⅰ酶切实验和Western印迹实验检测ID3基因敲除效果;利用逆转录实时定量PCR(RT-qPCR)实验检测ID3下游负调控基因转录产物的表达情况;利用CCK-8试剂盒检测敲除ID3基因对BJ-5ta细胞增殖的影响。结果T7核酸内切酶Ⅰ酶切和Western印迹实验结果表明利用CRISPR/Cas9技术有效敲除BJ-5ta细胞ID3基因;RT-qPCR结果表明ID3基因敲除后其下游负调控基因转录产物表达上调;CCK-8实验结果表明ID3基因敲除对BJ-5ta细胞增殖无影响。结论成功构建人源ID3基因敲除BJ-5ta细胞系,可为研究ID3调控机制和深入了解其在人皮肤成纤维细胞中的生物学功能提供细胞模型。

巨噬细胞抑制因子-1、胰岛素样生长因子结合蛋白3、糖类抗原19-9检测对胰腺癌患者预后的预测价值

目的探讨糖类抗原19-9(CA19-9)、胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP3)、巨噬细胞抑制因子-1(MIC-1)检测对胰腺癌患者预后的预测价值。方法选取82例胰腺癌患者作为观察组,另选取81例健康体检志愿者作为对照组。对比两组受试者MIC-1、IGFBP3、CA19-9水平,分析胰腺癌患者预后的影响因素和MIC-1、IGFBP3、CA19-9单独及联合检测对胰腺癌患者预后的预测价值。结果观察组患者MIC-1、IGFBP3、CA19-9水平均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。82例胰腺癌患者根据预后情况分为好转组61例与预后不良组21例,好转组与预后不良组患者分化程度、临床分期、淋巴结转移情况及MIC-1、IGFBP3、CA19-9水平比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。分化程度为低分化、临床分期为Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移、MIC-1≥500 pg/ml、IGFBP3≥40 U/ml、CA19-9≥40 U/ml均为胰腺癌患者预后不良的独立危险因素(P﹤0.05)。MIC-1、IGFBP3、CA19-9联合检测预测胰腺癌患者预后的灵敏度和特异度分别为87.4%、71.9%,曲线下面积为0.816(95%CI:0.715~0.917),高于MIC-1、IGFBP3、CA19-9单独检测。结论MIC-1、IGFBP3、CA19-9水平升高均与胰腺癌患者预后不良密切相关,三者在胰腺癌患者预后预测中有较高的使用价值。

GATA3通过调控LIFR抑制人乳腺癌细胞的迁移能力

目的探究GATA结合蛋白3(GATA binding protein 3,GATA3)对乳腺癌细胞迁移能力的影响。方法在MCF7细胞中利用慢病毒载体介导的基因干涉技术敲低GATA3基因,使用实时定量荧光PCR(qRT-PCR)和蛋白质印迹检测GATA3和LIFR的mRNA和蛋白表达水平,Transwell实验检测MCF7细胞的迁移能力。在MCF7和T47D细胞中用染色质免疫沉淀(ChIP-qPCR)实验检测GATA3在LIFR的启动子区的结合位点。在敲低GATA3基因的MCF7细胞中回补LIFR,通过细胞划痕实验和Transwell实验检测MCF7细胞的迁移能力。结果与对照组相比,敲低GATA3基因的MCF7细胞的迁移能力增强(P_(均)<0.05)。与对照组相比,敲低GATA3基因的MCF7细胞的LIFR表达水平降低(P_(均)<0.05)。乳腺癌细胞MCF7与T47D中GATA3在LIFR的启动子区有结合(P_(均)<0.05)。在敲低GATA3基因的MCF7细胞中稳定过表达LIFR可以部分挽救GATA3基因敲低引起的细胞迁移能力的增强(P_(均)<0.05)。结论GATA3通过转录激活LIFR抑制乳腺癌细胞MCF7的迁移。

DNA结合抑制因子-1在子宫内膜异位症中的表达及其与微血管密度的关系

目的检测DNA结合抑制因子-1(Id-1)在子宫内膜异位症(EMs)中的表达及其与血管生成的关系,探讨其在EMs发病机制中的作用。方法采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测EMs在位内膜(60例)、异位内膜(60例)及正常子宫内膜(30例)中Id-1 mRNA的表达水平,同时应用免疫组化SP法对CD34标记阳性的血管进行微血管密度(MVD)测定,分析两者的相关性。结果 EMs在位内膜Id-1 mRNA相对表达量和MVD值明显高于正常子宫内膜,但低于EMs异位内膜,而且随着临床期别增加EMs在位及异位内膜Id-1表达水平和MVD值均增加,差异有统计学意义(P<0.01)。正常子宫内膜、EMs在位及异位内膜的增殖期和分泌期比较,Id-1 mRNA表达水平和MVD值均差异无统计学意义(P>0.05)。EMs在位和异位内膜Id-1mRNA表达水平和MVD值呈明显正相关性(r=0.879,P=0.000;r=0.829,P=0.000)。结论 Id-1在EMs在位和异位内膜中存在过度表达,且与血管生成密切相关,推测Id-1可能通过促血管生成途径参与EMs的发病机制。

结直肠腺癌中DNA结合/分化抑制蛋白-1和血管内皮生长因子-C的表达及意义

目的检测结直肠腺癌中DNA结合/分化抑制蛋白(ID)-1和血管内皮生长因子(VEGF)-C的表达,关注其相关性。方法 67例结直肠腺癌的临床资料及术后留取的石蜡标本为观察组,45例距肿物边缘>8 cm的非肿瘤性结肠黏膜组织的石蜡标本为对照组,应用免疫组化二步法检测两组ID-1和VEGF-C表达。结果两组ID-1和VEGF-C表达差异有统计学意义(P<0.001),观察组中ID-1和VEGF-C表达与病变增殖指数、脉管累犯和淋巴结转移密切相关,ID-1表达与肿瘤分化程度和浸润深度密切相关。相关分析显示观察组中ID-1和VEGF-C表达呈正相关。结论 ID-1和VEGF-C在结直肠腺癌术后组织中表达明显升高,对肿瘤的形成和发展有一定调节作用。ID-1与淋巴管生长因子可能有一定协同作用。

DNA结合抑制因子1在非小细胞肺癌组织中的表达

目的探讨DNA结合抑制因子1(Id1)在非小细胞肺癌(NSCLC)发生、发展中的作用及与NSCLC临床病理特征之间的联系。方法选取30例NSCLC癌组织、癌旁组织和正常肺组织以及10例肺良性病变组织和正常肺组织,采用RT-PCR和免疫组化SP法测定其Id1 mRNA和Id1蛋白的表达情况。结果 (1)Id1 mRNA、Id1蛋白在NSCLC癌组织中的阳性表达率为96.67%(29/30)、93.33%(28/30),在癌旁组织中的阳性表达率为13.33%(4/30)、10%(3/30),在NSCLC正常肺组织、肺良性病变组织及其正常肺组织中均未见表达。(2)NSCLC癌组织Id1 mRNA和Id1蛋白的表达强度随癌细胞分化程度的降低而增强。(3)NSCLC患者Id1 mRNA和Id1蛋白的表达与病理类型、瘤体大小、淋巴结转移及预后无明显相关性。结论 Id1因子可能是鉴别NSCLC与肺良性病变的重要分子标记物之一,且其表达水平与NSCLC癌细胞分化程度呈负相关。

食管鳞癌中DNA结合/分化抑制蛋白-1和血管内皮生长因子-D表达及意义

目的观察DNA结合/分化抑制蛋白(ID)-1和血管内皮生长因子(VEGF)-D在食管鳞癌中的表达,关注其相关性。方法 87例食管鳞癌为观察组,23例距肿物边缘>2 cm的非肿瘤性食管黏膜组织的石蜡标本为对照组,ID-1和VEGF-D表达的检测应用免疫组化法。结果两组ID-1和VEGF-D表达差异有统计学意义,观察组ID-1和VEGF-D表达与脉管累犯和淋巴结转移相关,ID-1表达与增殖指数和分化程度相关。二者均与炎细胞浸润程度无相关性。ID-1和VEGF-D呈正相关。结论食管鳞癌中ID-1和VEGF-D表达升高,可以促进肿瘤进展。ID-1与VEGF-D有一定正向协同作用。

白血病复发患儿骨髓DNA结合抑制因子4蛋白表达及意义

目的探讨DNA结合抑制因子4(inhibitor of DNA binding 4,ID4)蛋白表达与儿童白血病复发的关系。方法采用免疫组化对48例确诊并进行系统治疗的白血病患儿初发、缓解时骨髓片进行ID4蛋白表达分析。结果 13例复发儿童白血病初发时骨髓片ID4蛋白均为阴性(0%),缓解时仅有4例ID4蛋白为阳性(30.8%);未复发病例初发时ID4蛋白5例为阳性(14.3%),缓解时ID4蛋白阳性者25例(71.4%)。缓解时ID4蛋白阳性率两者差异有统计学意义(P=0.019)。结论白血病复发病例在缓解时ID4蛋白表达率低,缓解时骨髓ID4蛋白表达与否可作为白血病复发的观察指标。

子宫内膜腺癌DNA结合抑制因子-1的表达及与雌激素受体(ER)α的相关性

目的探讨DNA结合抑制因子-1(Id-1)在子宫内膜腺癌组织中的表达状态及与雌激素受体(ER)α之间的关系。方法免疫组化法检测56例子宫内膜腺癌、18例子宫内膜不典型增生、20例正常子宫内膜组织中Id-1及ERα蛋白表达。结果在正常子宫内膜组织、子宫内膜不典型增生及子宫内膜癌中Id-1表达逐渐增强(P<0.05),ERα表达则逐渐减少(P<0.05)。Id-1蛋白阳性表达与组织分化程度及浸润肌层深度、手术病理分期有关(P<0.05)。ERα阳性表达与浸润肌层深度有关(P<0.05)。Id-1高表达患者的5年生存率低,但两组生存率差别无显著性意义(P>0.05)。Id-1与ERα表达之间呈正相关(r=0.284,P=0.034)。结论 Id-1在子宫内膜癌中存在着过表达,并且可能与ERα协同参与了子宫内膜腺癌的发生发展。

DNA结合抑制因子、Rab5基因在子宫内膜异位症患者中的表达及其意义

目的探究DNA结合抑制因子2(ID2)、Rab5基因在子宫内膜异位症(EMS)患者中的表达及其意义。方法以2017年6月至2019年8月本院138例EMS患者为研究组,另120例行输卵管绝育手术患者作为对照组。检测两组子宫内膜组织中Rab5 mRNA、ID2 mRNA表达量,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析两者单独及联合的诊断价值。研究组按照r-AFS分期划分,比较不同病情分期患者Rab5 mRNA、ID2 mRNA、临床指标[血清癌胚抗原125(CA125)、子宫内膜抗体(EmAb)]水平,分析Rab5 mRNA、ID2 m RNA与病情分期、血清CA125、EmAb的相关性。结果研究组子宫内膜组织中Rab5 mRNA、ID2 m RNA表达量高于对照组(P<0.05);Rab5 mRNA与ID2 mRNA联合诊断EMS的AUC最大,为0.802,最佳诊断敏感度为78.99%,特异度为69.17%;EMS患者病情分期与Rab5 mRNA、ID2m RNA表达及血清CA125、EmAb水平存在正相关关系(P<0.05);EMS患者Rab5 mRNA、ID2 mRNA表达与血清CA125、EmAb水平存在正相关关系(P<0.05)。结论 EMS患者Rab5 m RNA、ID2 mRNA表达异常增高,与病情分期及血清CA125、EmAb水平关系密切,可辅助临床EMS诊断。

DNA结合抑制因子-1、Maspin在乳腺浸润性导管癌中的表达及预后意义

目的探讨DNA结合抑制因子-1(Id-1)、Maspin在乳腺浸润性导管癌中的表达及其意义。方法采用免疫组化Elivision二步法检测80例浸润性导管癌中Id-1、Maspin蛋白的表达情况,并分析其临床病理意义。结果80例浸润性导管癌组织中Id-1蛋白表达与TNM分期及淋巴结转移呈正相关(P<0.05)。Maspin蛋白表达与组织学分级、TNM分期及淋巴结转移呈负相关(P<0.05)。Id-1与Maspin表达有相关性(P<0.05)。对80例浸润性导管癌患者应用Cox回归分析,Maspin蛋白是保护因素,Id-1蛋白是危险因素(P<0.05)。结论Id-1、Maspin蛋白的表达在乳腺癌的复发、转移过程中起重要作用。联合检测Id-1、Maspin蛋白可作为判断乳腺癌预后不良的参考指标。

DNA结合抑制因子与肿瘤相关性的研究进展

DNA结合抑制因子(DNA-binding inhibitory factor,Id)属于螺旋-环-螺旋(helix-loop-helix,HLH)转录因子家族,是细胞分化的负性调控因子,目前在哺乳类动物细胞中发现含有4种Id因子Id-1至Id-4,其在肿瘤中常有过度表达,并与肿瘤的侵袭转移有密切的相关性,近年来的研究表明,其在对肿瘤的治疗上有望成为肿瘤治疗的新靶点。

DNA结合抑制因子-1在子宫内膜异位症中的表达及其与细胞凋亡的关系

目的探讨DNA结合抑制因子-1(Id-1)在子宫内膜异位症(EMs)在位及异位内膜中的表达及其与EMs细胞凋亡的关系。方法取60例EMs患者的在位内膜和异位内膜为实验组,30例非EMs患者的正常子宫内膜为对照组,采用免疫组化SP法检测Id-1蛋白的表达情况,TUNEL法测定细胞凋亡指数(AI),统计分析二者的相关性。结果无论是增殖期还是分泌期,正常子宫内膜、EMs在位及异位内膜Id-1蛋白表达阳性率依次升高,而AI值依次降低,差异有统计学意义(χ2=27.228,P=0.000;F=90.845,P=0.000)。随着临床期别增加,EMs在位及异位内膜Id-1表达水平增加,而AI值降低,差异有统计学意义(χ2=8.333,P=0.040;χ2=11.322,P=0.010;F=36.319,P=0.000;F=28.690,P=0.000)。正常子宫内膜和EMs在位内膜增殖期AI值低于分泌期,差异有统计学意义(t=-7.568,P=0.000;t=-3.435,P=0.001);而EMs异位内膜在增殖期和分泌期比较,AI值差异无统计学意义(t=0.200,P=0.842)。EMs在位和异位内膜Id-1蛋白表达水平和AI值呈明显负相关性(r=-0.307,P=0.017;r=-0.542,P=0.032)。结论 Id-1高表达在EMs发生发展中起重要作用,与抑制EMs细胞凋亡密切相关。

DNA结合抑制因子4在肿瘤发生发展中的作用

DNA结合抑制因子4(Id4)是Id转录因子的成员之一,Id4基因的表达受多种调控元件的调控,在正常组织及肿瘤组织中均有表达。Id4蛋白在细胞增殖,细胞分化及细胞凋亡的调控中起着重要的作用,并在肿瘤的发生和发展过程中起着不同的作用。

TLR4/NF-κB/NLRP3通路抑制炎症反应作用的研究

Toll样受体(TLRs)是参与非特异性免疫的一类重要的蛋白质,是表达与固有免疫细胞最重要的模式识别受体之一,可识别来源于微生物的具有保守结构的分子,即病原体相关分子模式(PAMAs),从而激活机体产生免疫应答。核因子κB(NF-κB)在几乎所有类型的细胞和组织中都有表达,在调节对外部刺激的显著多样性的反应中起着关键作用,因此是多个生理和病理过程中的关键因素。而核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3),即NLRP3炎性小体通路在脑缺血再灌注和焦亡中具有重要意义,如NLRP3在脑缺血再灌注损伤时在小胶质细胞中被激活,随后在神经元和微血管内皮细胞中表达。由TLRs激活、NF-κB传递、NLRP3启动形成的TLR/NF-κB/NLRP3信号通路在机体各器官炎症反应中起到关键性作用,本文探讨了各类药物通过抑制该通路炎症反应,起到保护身体各大重要器官的作用。

DNA结合抑制因子4研究进展

DNA结合抑制因子4(Id4)属于螺旋-环-螺旋(HLH)蛋白家族,可与碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)蛋白分子形成二聚体,负性调节bHLH的功能,影响相关基因的转录。Id4在正常组织与肿瘤中有不同的表达谱,与肿瘤进程有密切关系。在肿瘤发生、发展过程中,Id4通过竞争结合转录因子等途径而发挥重要作用。Id4基因是抗癌治疗的靶因子,其启动子区在多种肿瘤中发生甲基化导致基因沉默,可以用于临床诊断和治疗,有广阔的应用前景。

DNA结合抑制因子1在非小细胞肺癌发生、发展中的作用分析

目的:分析DNA结合抑制因子1(Id1)在非小细胞肺癌发生、发展中的作用。方法:选取2013年10月-2015年9月本院收治的非小细胞肺癌的患者41例为非小细胞肺癌组,选择同期在本院就诊的肺部良性病变的患者40例为良性病变组,再选择同期在本院进行健康体检的受检者42例为健康组。三组受检者均进行免疫组化S-P法检查,观察三组受检者肺组织中Id1的表达情况。结果:非小细胞肺癌组中Id1的表达率为95.12%,显著高于良性病变组的2.5%和健康组的0(P<0.05);非小细胞肺癌组织不同分化程度Id1蛋白阳性表达率比较差异有统计学意义(P<0.05),且癌组织Id1蛋白阳性表达率随着分化程度的降低而升高(P<0.05);肺鳞癌和肺腺癌、瘤体直径≤3 cm和瘤体直径>3 cm、淋巴结转移不同时期的Id1蛋白阳性表达率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:Id1与非小细胞肺癌发生、发展有着密切的关系,且其表达水平与非小细胞肺癌癌细胞的分化程度呈负相关,可作为诊断非小细胞肺癌的重要标志物。

5-氮杂-2'-脱氧胞苷对人红白血病K562细胞系生物学活性及DNA结合抑制因子4基因表达的影响

本研究探讨5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人慢性髓系白血病(CML)急红变细胞系K562细胞生物学活性和DNA结合抑制因子4(ID4)基因表达的影响,探寻白血病基因治疗的新靶点。应用甲基化特异性PCR方法检测K562细胞中ID4基因甲基化情况;实时荧光定量PCR检测5-Aza-CdR处理K562细胞后ID4 mRNA的表达水平;流式细胞术分析5-Aza-CdR处理后细胞凋亡率和细胞周期的变化。结果表明,K562细胞中存在ID4基因的甲基化;5-Aza-CdR处理后K562细胞ID4 mRNA表达增加,并具有浓度依赖性,不同浓度药物处理组之间差异具有统计学意义(p<0.01)。5-Aza-CdR可使K562细胞凋亡率增加,并且作用呈时间剂量依赖性。且细胞凋亡率与ID4 mRNA的相对表达水平呈高度相关(r=0.95)。5-Aza-CdR处理K562细胞48小时后,随着药物浓度的增加,G0/G1期细胞逐渐增多,G2/M期细胞逐渐减少,细胞阻滞在G0/G1期。结论:甲基化转移酶抑制剂5-Aza-CdR能促使CML急红变细胞系K562细胞中沉默的ID4基因重新表达,可能进而参与K562细胞凋亡和细胞周期阻滞的调控。

DNA结合抑制因子与肿瘤关系的研究进展

DNA结合抑制因子(Id)是螺旋—环—螺旋转录因子家族的一员,具有广泛的生物学作用,如抑制细胞分化、促进细胞增殖、调控细胞凋亡等。哺乳类动物细胞含Id1~Id4四种,通常分布于胚胎及未分化成熟的组织细胞中,正常细胞内Id蛋白随着细胞分化成熟而逐渐降低。近年研究发现,Id蛋白家族与肿瘤相关的细胞周期调控、细胞衰老与凋亡,以及肿瘤的发生、发展、侵袭、转移等有关,已成为研究细胞生命过程以及探寻治疗人类疾病有效靶向药物的一类重要分子,或可成为靶向药物治疗肿瘤的新靶点。