硝普钠及SOD降低大鼠心肌细胞DNA蛋白激酶二聚体和Ku70/80表达

目的观察硝普钠(SNP)及自由基清除剂超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)对大鼠心肌细胞H9C2和心肌组织DNA-PKcs和Ku70/80表达的影响。方法体外培养H9C2心肌细胞按SNP浓度和加入的自由基清除剂SOD和CAT浓度分组;SD大鼠随机分为5组,每组8只,分别采用0.9%氯化钠溶液、SNP、SNP+SOD、SNP+CAT和SNP+SOD+CAT行腹腔注射,1周后收集心肌组织。用Western blot法检测各组细胞DNA-PKcs和Ku70/80表达,免疫组织化学法检测DNA-PKcs和Ku70/80表达。结果心肌细胞的DNA-PKcs和Ku70/80蛋白相对表达量均随SNP剂量增加呈递增趋势;加入SOD或CAT或二者合用,均显著降低DNA-PKcs和Ku70/80表达(P<0.05)。SNP组、SNP+SOD组、SNP+CAT组和SNP+SOD+CAT组大鼠心肌组织DNA-PKcs和Ku70/80表达水平均显著高于对照组(P<0.05)。结论自由基清除剂SOD和CAT能够通过降低心肌细胞DNA-PKcs和Ku70/80的表达拮抗NO对心肌细胞的损伤。

葡萄糖转运体p63和DNA蛋白激酶在卵巢浆液性肿瘤中的表达及其意义

目的研究在卵巢浆液性肿瘤中葡萄糖转运体(GLUT-1)、p63和:DNA蛋白激酶(DNA-PKcs)的表达及其意义。方法应用免疫组织化学的方法检测卵巢浆液性肿瘤中GLUT-1、p63和DNA-PKcs的表达,用χ2检验分析其异常表达与临床病理参数之间的相关性。结果正常卵巢组织中,GLUT-1、p63表达均为阴性,DNA-PKcs表达为阳性。GLUT-1、p63在恶性卵巢浆液性肿瘤中的表达明显高于良性和交界性卵巢浆液性肿瘤,差异有统计学意义(P<0.01);DNA-PKcs在良性、交界性、恶性卵巢浆液性肿瘤中的阳性表达率分别为95.0%、90.0%和60.0%,差异有统计学意义(P< 0.01)。GLUT-1表达与年龄、临床分期、腹腔种植、腹水、淋巴结转移均相关(P<0.05);p63除与腹水无关外,与其他临床病理参数均有关(P<0.05);DNA-PKcs仅与临床分期和淋巴结转移有关(P< 0.05),与腹水、腹腔种植无关(P>0.05)。结论GLUT-1、p63和DNA-PKcs的异常表达与卵巢浆液性肿瘤的生长、恶变、侵袭及转移均有密切关系,有望成为卵巢浆液性肿瘤恶变的标志物。

DNA依赖蛋白激酶在Ⅰ～Ⅱ期非小细胞肺癌中的表达及意义

背景与目的Ku70基因、Ku80基因和DNA-PKcs基因是DNA双链断裂修复的主要因子。本研究的目的是探讨Ku70、Ku80和DNA-PKcs蛋白在Ⅰ～Ⅱ期非小细胞肺癌中的表达及其临床意义。方法利用组织芯片(tissue microarray,TMA)技术和免疫组织化学二步法,对86例行术后辅助化疗的早期非小细胞肺癌标本进行上述3种重组修复相关蛋白的检测。结果在肺癌组织中Ku70、Ku80、DNA-PKcs蛋白的阳性率分别为68.6%、72.1%和87.2%,其表达与临床病理类型无明显关系(P>0.05)。预后较差的患者Ku70、Ku80、DNA-PKcs的表达水平有高于预后较好患者的趋势,但其差异无统计学意义(P>0.05)。结论Ku70、Ku80、DNA-PKcs在未经化疗的肺癌组织中均有不同程度表达,其表达高低对早期非小细胞肺癌术后辅助化疗无指导意义。

慢性髓系白血病DNA依赖蛋白激酶催化亚基基因的研究

本研究旨在探讨髓系粒细胞白血病(CML)的DNA依赖蛋白激酶催化亚基(DNA-PKcs)基因表达水平、调控机制及其在CML急性变中的作用。用半定量RT-PCR、Western blot方法分别检测62例CML患者及K562细胞的DNA-PKcs mRNA和DNA-PKcs蛋白表达,并与23例正常人作对照;对26例接受同种异基因外周血干细胞移植(allo-PBSCT)及4例使用伊马替尼治疗的CML患者用RT-PCR、Western blot方法分别动态检测bcr-abl mRNA和DNA-PKcs蛋白表达水平;用伊马替尼体外作用CML患者的单个核细胞(MNC)及K562细胞后,用RT-PCR、Western blot方法分别检测DNA-PKcs mRNA和DNA-PKcs蛋白表达及bcr-abl融合蛋白的酪氨酸磷酸化水平。结果表明:与正常人比较,CML患者及K562细胞的DNA-PKcs蛋白表达量明显降低(P<0.05);26例allo-PBSCT及4例使用伊马替尼治疗的CML患者,DNA-PKcs蛋白表达量随着bcr-abl mRNA表达量的降低而升高;伊马替尼体外作用于CML患者MNC及K562细胞后,DNA-PKcs蛋白表达量随着bcr-abl融合蛋白酪氨酸磷酸化水平的降低而升高。结论:bcr-abl融合基因通过转录后机制下调DNA-PKcs蛋白的表达;DNA-PKcs蛋白表达下降可能是CML急性变的机制之一。

沉默DNA依赖蛋白激酶亚基对肝癌耐药细胞Bel-7402/5-Fu DNA损伤修复功能的影响

目的探讨DNA依赖蛋白激酶亚基(DNA-PKcs)基因沉默后对肝癌耐药细胞Bel-7402/5-Fu DNA损伤修复功能的影响。方法采用阳离子脂质体法将sh DNA-PKcs干扰质粒转染Bel-7402/5-Fu细胞,根据荧光细胞数计算转染率,实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)及Western blot检测DNA-PKcs的沉默效率;Western blot检测TopoⅡ、γ-H2AX蛋白表达;5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷法检测细胞DNA合成。结果质粒的转染效率为67%;q RT-PCR及Western blot检测结果显示,DNA-PKcs m RNA及蛋白水平的沉默效率分别为82.6%和71.8%;Western blot结果显示,实验组TopoⅡ蛋白表达水平比对照组低,差异有统计学意义(P<0.05),γ-H2AX蛋白表达水平比对照组高,差异有统计学意义(P<0.01)。5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷法结果显示,实验组DNA合成率比对照组低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 sh DNA-PKcs干扰质粒能下调Bel-7402/5-Fu细胞中DNA-PKcs、TopoⅡ蛋白的表达,抑制Bel-7402/5-Fu细胞DNA合成。

敲低DNA依赖蛋白激酶催化亚基(DNA-PKcs)抑制Bel7402/5-Fu耐药肝癌细胞的细胞周期及机制

目的研究DNA依赖蛋白激酶催化亚基(DNA-PKcs)基因沉默后对Bel7402/5-氟尿嘧啶(5-Fu)肝癌耐药细胞的细胞周期及机制的影响,探讨DNA-PKcs影响化疗敏感性的相关机制。方法采用MTT法检测Bel7402/5-Fu细胞转染siDNA-PKcs后,对5-Fu、阿霉素(ADM)的敏感性;采用阳离子脂质体法将siDNA-PKcs寡核苷酸片段转染Bel7402/5-Fu细胞;流式细胞术检测细胞周期;Western blot法检测细胞P21、细胞周期蛋白B1(cyclin B1)、细胞分裂周期蛋白2(CDC2)的蛋白表达情况;实时定量PCR检测细胞毛细血管扩张共济失调突变基因(ATM)、p53的mRNA水平,Western blot法检测细胞ATM、P53蛋白水平。结果敲低细胞DNA-PKcs水平后,siDNA-PKcs组5-Fu、ADM的半数抑制浓度(IC50)明显降低,S期细胞减少、G2/M期细胞增多,细胞周期抑制因子P21蛋白水平增加,cyclin B1、CDC2蛋白水平降低,ATM、p53的mRNA及蛋白水平增加。结论敲低DNA-PKcs水平,增加P21蛋白水平,同时抑制cyclin B1、CDC2蛋白水平,诱导Bel7402/5-Fu细胞G2/M期阻滞,其机制可能与ATM-p53信号途径有关。

乳腺癌组织中DNA依赖蛋白激酶的表达变化

目的探讨乳腺癌组织中DNA依赖蛋白激酶(DNA-PK)的表达变化及其意义。方法采用免疫组化SP法检测56例乳腺癌组织及50例乳腺良性病变组织中DNA-PK的3个亚基DNA-PKcs、Ku70、Ku86的表达情况,同时检测这些组织中雌激素受体(ER)及癌基因c-erbB-2的表达。结果Ku70、Ku86在乳腺癌组织中的表达明显低于乳腺良性病变组织(P<0.01),而且Ku70和Ku86的表达随乳腺癌病理分级的升高而降低,但DNA-PKcs在两者中的表达则无明显变化。Ku70与Ku86的表达在ER阳性组高于ER阴性组,在c-erbB-2阳性组的表达则低于c-erbB-2阴性组,差异均有极显著性意义(均P<0.01)。结论Ku70和Ku86的低表达在乳腺癌的发生和发展中有重要意义,且其与ER、c-erbB-2关系密切,对乳腺癌的临床治疗及预后判断有一定的指导意义。

低剂量放射超敏感性和放射拒抗与DNA依赖蛋白激酶的表达

低剂量放射超敏感性是最近十几年来研究的热点课题之一。是继放射敏感性之后的又一重大发现,是对传统放射生物学的一个有益补充和发展。有助于解决肿瘤细胞的放射耐受和正常组织的放射损伤问题。对放射治疗分割方法的设计、物理计划设计和生物学优化都具有重要指导意义。低剂量放射超敏感性主要包括放射超敏感期和放射拒抗期。放射超敏感期与细胞凋亡密切相关,放射拒抗期主要以DNA损伤修复后非同源末端连接相关,DNA-PK(DNA-PKcs、Ku70、Ku80)等蛋白参与DNA非同源末端连接,在超敏中具有重要作用。本文对DNA-PK在低剂量超敏感性中的作用做一综述。

鼻咽癌病变过程中DNA依赖蛋白激酶表达水平的相关研究

目的研究鼻咽癌病变过程中DNA依赖蛋白激酶(DNA-PKcs)表达规律。方法在鼻咽癌高发区,选择鼻咽炎患者30例、鼻咽上皮细胞不典型增生或化生患者42例及鼻咽癌患者34例作为研究对象,免疫组化检测患者鼻咽组织DNA-PKcs的表达水平。结果鼻咽炎、鼻咽上皮细胞不典型增生或化生及鼻咽癌患者鼻咽组织DNA-PKcs的表达水平分别是6.7%、64.3%、55.9%(P<0.001),依据病理分级严重程度的不同,DNA-PKcs呈现不同的表达水平。结论DNA-PKcs在鼻咽癌变过程中可能发挥一定的作用。

DNA依赖蛋白激酶催化亚基与细胞周期蛋白T2相互结合的鉴定

目的鉴定与DNA依赖蛋白激酶催化亚基(DNAPKcs)相互结合的蛋白,以深入探讨其生理功能。方法通过免疫共沉淀获得DNAPKcs的相互结合蛋白复合物,SDSPAGE电泳分离蛋白,肽质指纹分析和Western印迹鉴定蛋白。结果以DNAPKcs抗体进行免疫共沉淀从HeLa细胞中获得DNAPKcs的相互结合蛋白,对部分结合蛋白进行质谱分析和蛋白数据库检索,发现转录延伸因子PTEFb的亚基细胞周期蛋白(cyclin)T2是其中之一。其后,通过Western印迹检测,进一步证实DNAPKcs与cyclinT2相互结合作用。结论首次发现DNAPKcs与cyclinT2的相互结合,提示DNAPKcs参与基因转录调控或转录偶联修复反应的生物学功能。

DNA依赖的蛋白激酶和检查点激酶1对卵巢癌细胞周期阻滞的研究

目的:探讨DNA-PK和CHK1对卵巢癌Skov3的细胞周期阻滞的机制。方法:通过对DNA-PK shRNA和CHK1 shRNA的构建及有效干扰载体的筛选,流式细胞仪检测G2期。结果:转染DNA-PK shRNA的Skov3细胞和Hela细胞经2Gy X射线照射后进入G2期的细胞比率无差异;转染CHK1 shRNA的Skov3细胞经2Gy X射线照射后4h进入G2期的细胞比率显著高于Hela细胞(t=2.618,P=0.026),28h时明显低于Hela细胞(t=2.705,P=0.022);转染DNA-PK shRNA和CHK1 shRNA的Skov3细胞经2Gy X射线照射后4h进入G2期的细胞比率显著高于Hela细胞(t=2.965,P=0.014),28h时明显低于Hela细胞(t=2.302,P=0.044)。结论:干扰DNA-PK和CHK1的表达可增强卵巢癌细胞对辐射的敏感性。

DNA依赖性蛋白激酶在妇科肿瘤中的研究进展

DNA依赖蛋白激酶(DNA-PK)是哺乳动物细胞DNA损伤修复的关键酶。研究表明,妇科肿瘤,如宫颈癌、卵巢癌中普遍存在DNA-PK表达的变化,提示该酶在妇科肿瘤的发生、发展过程中发挥着重要的作用,并与肿瘤的临床分期、放射敏感性和预后有重要关系。近年来,关于DNA-PK的结构与功能、在肿瘤细胞株中的活性、在肿瘤组织中表达的研究日益深入,以DNA-PK为靶点的DNA修复抑制剂作为肿瘤放化疗增敏药已陆续研发并进入临床前试验,有望成为肿瘤诊断和治疗的新靶点。

DNA依赖蛋白激酶生物学功能与肿瘤相关性研究进展

近年来利用现代分子生物技术检测各种肿瘤标志物和基因以探索其与肿瘤的相关性,为肿瘤综合治疗提供合理的指导已成为可能。目前,国内外有关DNA-PK的研究报道较多,本文就DNA-PK的主要生物学功能及其与肿瘤的相关研究做如下综述。

DNA依赖蛋白激酶的研究新进展

DNA依赖蛋白激酶(DNA-PK)是DNA损伤修复的关键酶。大量研究表明,各种恶性肿瘤中普遍存在DNA-PK表达的变化,提示该酶可作为一种肿瘤标志物,其表达水平不但与肿瘤的发生、发展有关,还与某些肿瘤的病理类型、分期及侵袭性有关,并与肿瘤放射敏感性和预后有重要关系。近年来,关于DNA-PK的研究日益深入,以DNA-PK为靶点的DNA抑制剂作为肿瘤放化疗增敏药有望成为肿瘤诊断和治疗的新靶点。

DNA依赖蛋白激酶与切除修复交叉互补基因1在上皮性卵巢肿瘤组织中的表达及意义

目的分析DNA依赖蛋白激酶(DNA-PKcs)、切除修复交叉互补基因1(ERCC1)在上皮性卵巢肿瘤组织中的表达及其意义。方法采用免疫组化SP法检测65例上皮性卵巢癌、20例卵巢交界性肿瘤、18例卵巢良性肿瘤及15例正常卵巢组织中DNA-PKcs、ERCC1的表达,并分析其异常表达与卵巢恶性肿瘤临床病理特征的关系;分析DNA-PKcs与ERCC1表达的相关性。结果 DNA-PKcs在卵巢癌(66.15%)、交界性卵巢肿瘤组织(55.00%)中的阳性表达率高于卵巢良性肿瘤(11.11%)及正常卵巢(6.67%),差异有显著性,ERCC1在卵巢癌(67.69%)、交界性卵巢肿瘤组织(60.00%)中的阳性表达率高于卵巢良性肿瘤(16.67%)及正常卵巢(13.33%),差异有显著性;DNA-PKcs、ERCC1表达与残留灶大小有关,与FIGO分期、病理类型、病理分级及淋巴结转移无关;DNA-PKcs与ERCC1表达呈正相关。结论 DNA-PKcs、ERCC1表达与卵巢癌的发生发展有关,在促进卵巢癌的浸润转移过程中可能起重要作用。

DNA依赖性蛋白激酶催化亚基在非同源末端连接修复中作用的研究进展

DNA的精确复制对维持基因组稳定性具有重要作用,而DNA双链断裂(DSB)损伤可能诱导细胞凋亡和染色质重排,在肿瘤的发生发展过程中发挥作用。DNA依赖性蛋白激酶催化亚基(DNA-PKcs)是磷脂酰肌醇3-激酶样蛋白激酶(PIKK)家族中相对分子质量最大及表达量最高的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。与Ku70/80结合后,DNA-PKcs在离子辐射诱导DSB后的非同源末端连接(NHEJ)有效修复过程中,发挥非常重要的作用。DNA-PKcs或其他NHEJ修复因子的缺失会导致辐射敏感性和DSB的未修复,以及V(D)J重组缺陷和免疫缺陷。本文主要对DNA-PKcs的结构,在DSB位点的募集与激活,在NHEJ修复中的作用过程及其与疾病的关系进行总结与展望,希望能为DNA-PKcs的深入研究及临床应用提供理论基础。

DNA-PKcs在DNA损伤修复中的作用及机制

机体在体内因素如DNA碱基错配、自身不稳定性、机体代谢产生活性氧自由基(ROS)等,体外因素如辐射、化学毒物、药物、病毒和霉菌等作用下,可以造成DNA损伤。DNA损伤有碱基损伤、错配、DNA单链或双链断裂、嘧啶二聚体形成等多种类型。其中,DNA双链断裂(DSB)是一种非常严重的损伤类型。DSB的修复方式主要有两种,分别是同源重组(HR)、非同源末端连接(NHEJ)[1]。

NSCLC中DNA-PKcs的表达及其与凋亡相关蛋白关系的研究

目的 检测非小细胞肺癌 (NSCLC)中DNA依赖蛋白激酶催化亚基 (DNA PKcs)的表达 ,探讨其与凋亡相关蛋白表达之间的关系。方法 采用免疫组化SP法检测 113例NSCLC患者肿瘤组织中DNA PKcs、p5 3和bcl 2的表达。 结果 NSCLC中DNA PKcs、p5 3和bcl 2的检出率分别为 89.3 8%、61.95 %及5 9.2 9% ;DNA PKcs的表达顺序依次为细支气管肺泡癌 >腺癌 >腺鳞癌 >鳞癌 ,而且DNA PKcs表达水平随肿瘤分化程度的增高亦逐渐增高 ,差异均具有高度显著性 (P <0 .0 5 ) ,但其表达与淋巴结转移无明显关系 ;p5 3在不同临床病理类型NSCLC中的表达无明显差别 ;bcl 2在不同组织学类型NSCLC中的表达顺序依次为鳞癌 >腺鳞癌 >腺癌 >细支气管肺泡癌 ,差异具有高度显著性 (P <0 .0 1) ,但其表达与肿瘤分化程度及淋巴结转移无关 ;DNA PKcs与 p5 3 (P <0 .0 1)、p5 3和bcl 2 (P <0 .0 5 )的表达之间有显著相关性。 结论 DNA PKcs高表达导致的DNA损伤修复系统活性增高以及突变型p5 3和bcl 2过表达导致的凋亡抑制相互影响、共同作用 。

DNA-PKcs蛋白和MGMT蛋白在肝癌组织中的表达及意义

目的探讨DNA依赖蛋白激酶催化亚单位(DNA-PKcs)和O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)在肝癌发生、发展中的作用及临床应用价值。方法应用免疫组化方法检测DNA-PKcs蛋白和MGMT蛋白在68份肝癌组织(肝癌组)和10份正常肝脏组织(对照组)中的表达情况,采用χ2检验及Spearman秩和相关检验分析结果。结果肝癌组及对照组DNA-PKcs蛋白表达阳性率分别为85%和10%,MGMT蛋白表达阳性率分别为40%和90%(P均<0.05);两者表达具有负相关性(r=-0.475,P<0.05)。结论DNA-PKcs和MGMT在肝癌发生、发展中起重要作用:有望作为肿瘤标记物、基因靶点等用于肝癌的诊治。

卵巢上皮性肿瘤组织中DNA-PKcs、Ku70蛋白的表达变化及意义

目的观察卵巢上皮性肿瘤组织中DNA依赖性蛋白激酶催化亚单位(DNA-PKcs)和调节亚单位Ku70蛋白的表达变化,并探讨其在上皮性卵巢癌发生、发展中的作用。方法采用免疫组织化学法,检测63例上皮性卵巢癌患者及20例良性上皮性卵巢肿瘤组织中DNA-PKcs、Ku70蛋白的表达,分析两者表达的关系及与上皮性卵巢癌临床病理参数之间的关系。结果上皮性卵巢癌组织中DNA-PKcs、Ku70蛋白的阳性表达率均显著高于良性上皮性卵巢肿瘤(P均<0.05);其中DNA-PKcs蛋白的表达与上皮性卵巢癌病理学分级和手术病理分期相关(P<0.05),Ku70蛋白的表达与上皮性卵巢癌手术病理分期、病理学分级、腹水及淋巴结转移均相关(P<0.05),二者均与组织病理学类型无关(P<0.05);DNA-PKcs蛋白与Ku70蛋白的表达呈正相关r=0.619(P<0.001)。结论DNA-PKcs、Ku70蛋白高表达可能在上皮性卵巢癌发生、发展及转移中发挥协同作用,且有可能成为上皮性卵巢癌早期诊断、预后判断的新指标及治疗靶点。