卵巢癌顺铂耐药细胞中DNA转录与修复相关基因的表达

目的研究DNA转录与修复相关基因的表达与卵巢癌顺铂耐药性之间的关系。方法以卵巢癌亲本细胞系COC1为对照,应用cDNA微阵列检测其顺铂耐药细胞系COC1/DDP中DNA转录与修复相关基因的表达。结果和结论与COC1细胞相比,COC1/DDP细胞有143个基因的表达水平发生改变,其中共有20个DNA转录与修复相关基因的表达发生改变,表达上调的有13个基因,表达下调的有7个基因,包括CAD、DDB1、DDIT4等大量DNA修复基因以及一般转录因子RNA多聚酶Ⅰ、Ⅱ基因和DHX9、DDX3X基因的表达上调以及MLH1和BTF3基因的低表达,提示COC1/DDP细胞对顺铂的耐药性与DNA转录和损伤修复能力的异常有关。

干旱胁迫棉花转录组DNA损伤修复相关基因的分析

【目的】研究干旱胁迫下,棉花DNA损伤修复基因的表达情况,从整体水平探讨棉花DNA损伤修复相关基因表达与抗旱的相关性。【方法】用2.5%PEG6000处理棉花幼苗,利用RNA-Seq技术对干旱胁迫下棉花幼苗的转录组进行测序。【结果】从棉花干旱胁迫响应的转录组中,筛选获得差异表达的DNA损伤修复相关基因共51个,其中差异表达的上调基因23个,差异表达的下调基因28个,干旱胁迫能够影响棉花DNA损伤修复相关基因的表达。选取4个差异基因进行生物信息学分析及qRT-PCR验证,HMGB1、rec A1、UDGs和GMP synthase基因的表达变幅有一定的差异,但基因的表达趋势一致,棉花转录组测序结果通过qRTPCR验证是可靠的。【结论】DNA损伤修复相关基因可能与干旱胁迫有一定的相关性,干旱胁迫能够影响棉花DNA损伤修复相关基因的表达。

DNA修复基因的拷贝数变异与年龄相关性白内障的关系

目的探讨中国汉族人群中DNA修复基因的拷贝数多态性(copy number variations,CNV)与年龄相关性白内障(age-related cataract,ARC)易感性的关系。方法研究对象来自"江苏眼病研究"流行病学人群,包括ARC组780例和对照组525人。采集受试者外周静脉血,提取全血基因组DNA。通过实时荧光定量PCR方法检测四种DNA修复基因的拷贝数(copy number,CN),分析ARC组和对照组基因CN的差异以及相对危险度(odds ratio,OR)。结果在WRN基因中发现了新的CNV。WRN基因高拷贝(CN=3+)与ARC的易感性有关(OR=1.88,P=0.02);HSF4基因低拷贝(CN=1)的人群对ARC易感(OR=4.09,P=0.004)。WRN基因高拷贝与核性以及后囊下性ARC的易感性有关(OR=2.06、3.72,均为P=0.02)。HSF4基因低拷贝与核性以及后囊下性ARC的易感性有关(OR=5.73,P=0.001;OR=6.80,P=0.01)。WRN和HSF4基因的联合作用显著增加了ARC的易感性。经过多重校正以后,仅有HSF4的CNV与ARC的易感性有关,尤其与核性和后囊下性ARC的易感性有关。结论 HSF4基因与WRN基因的CNV可能与中国汉族人群ARC的易感性有关。DNA修复基因对ARC易感性有一定的作用,并且对不同亚型ARC产生不同的影响。

紫外线照射对DNA修复基因RAD24转录的影响

目的：紫外损伤对ＤＮＡ修复基因ＲＡＤ２４转录的影响。方法：以酿酒酵母ＨＹ６８４为实验对象，用波长２５４ｎｍ紫外线分别在０、３７、５０和７０Ｊ／ｍ２等强度下照射不同时间，提取总ＲＮＡ，应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交方法检测ＲＡＤ２４基因转录水平的变化。结果：３７Ｊ／ｍ２及５０Ｊ／ｍ２分别照射２０～１２０ｍｉｎ明显提高ＲＡＤ２４基因转录水平。结论：低剂量紫外线照射可提高ＲＡＤ２４基因转录水平，该基因的表达具有损伤诱导性。

DNA氧化损伤修复相关基因hOGG1、MGMT在肺癌细胞中表达研究

目的研究DNA氧化损伤修复相关基因hOGG1和MGMT在正常人支气管上皮细胞(Human bronchial epithe-lial,16HBE)、反式7,8-二羟-9,10-环氧苯并芘(BPDE)转化细胞和裸鼠成瘤细胞中的表达。方法采用原位杂交技术检测hOGG1和MGMT在正常16HBE、反式BPDE转化细胞和裸鼠成瘤细胞中mRNA水平的表达。结果hOGG1、MGMT mRNA在反式BPDE转化细胞中阳性表达明显增强,而在裸鼠成瘤细胞中阳性表达相应减弱。结论DNA损伤修复相关基因hOGG1、MGMT mRNA在转化细胞模型中的表达水平明显增强。

DNA修复基因的多态性以及DNA损伤与年龄相关性白内障的关系

目的探讨DNA氧化损伤修复基因BLM、WRN、ERCC6以及OGG1的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNP)是否影响年龄相关性白内障(age-related cataract,ARC)的发生,并检测SNP是否会引起外周血淋巴细胞DNA损伤程度的改变。方法从"江苏眼病研究"人群收集ARC患者789例及对照组531例。提取DNA分析BLM、OGG1、ERCC6及WRN基因18个SNP位点的基因型。同时应用彗星试验检测部分受试者外周血淋巴细胞的DNA损伤程度。结果WRN-rs11574311与ARC、皮质型以及混合型ARC相关(P=0.003,OR=1.49;P=0.001,OR=1.68;P<0.000 1,OR=2.08),BLM-rs1063147与核型ARC相关(P=0.03,OR=1.31),WRN-rs2725383与皮质型ARC相关(P=0.01,OR=1.49),WRN-rs4733220以及WRN-rs2725338与混合型ARC相关(P=0.04,OR=0.74;P=0.003,OR=0.60)。经过Bonferroni校正后,WRN-rs11574311仍与皮质型以及混合型ARC相关,WRN-rs2725338仍然与混合型ARC相关。SNP位点不同基因型的外周血淋巴细胞DNA损伤程度的差异无统计学意义。结论WRN基因在ARC的发生发展过程中起重要作用,而且在不同亚型ARC中所起的作用也有所不同,说明不同亚型ARC可能具有特异性的危险因素以及致病机制。

PC12细胞缺氧培养后DNA损伤和修复相关基因表达的研究

目的:探讨PC12细胞缺氧后细胞凋亡与DNA损伤和修复的关系,进一步阐明缺氧导致PC12细胞凋亡的机制。方法:采用TUNEL法,结合应用流式细胞术观察PC12细胞缺氧培养不同时间点细胞凋亡现象,以及DNA损伤修复相关基因表达的改变。结果:在缺氧0.5h时,开始出现凋亡细胞,此时P53、P21waf1/cip1蛋白表达也开始增高,GADD45蛋白表达达到高峰(P<0.01)。至缺氧1h凋亡细胞达高峰,此时P53、P21蛋白表达最高(P<0.05),而GADD45表达则明显下降(P<0.05)。至缺氧6—12h,则以坏死为主,此时以上的基因表达均减弱。结论:PC12细胞缺氧早期(0.5—1h),主要出现凋亡为主的细胞死亡,伴随着DNA损伤相关基因表达的动态改变,提示缺氧后PC12细胞凋亡部分是由于DNA损伤严重,损伤不能及时修复所致。

DNA修复基因在年龄相关性白内障患者晶状体皮质中表达的研究

目的研究DNA修复基因在年龄相关性白内障（age-related cataract,ARC）患者晶状体皮质和正常对照晶状体皮质之间的表达差异。方法使用TaqMan~人类DNA修复基因表达芯片板检测年龄和性别匹配的3例ARC患者和3例正常对照晶状体皮质组织中DNA修复基因的表达。表达差异在1.5倍以上的基因使用实时荧光定量聚合酶链式反应（real-time PCR）进行验证（30例ARC患者和30例正常对照）。数据使用SPSS 17.0软件进行分析,ARC患者与正常对照间数据的比较采用独立样本t检验。结果 TaqMan人类DNA修复基因表达芯片板检测显示：相对于正常对照晶状体皮质,在ARC患者晶状体皮质中有7个DNA修复基因（ATM、ERCC6、POLA1、POLD1、POLQ、PSMB8、CCNO）表达下调1.5倍以上（0.35±0.07、0.26±0.09、0.41±0.07、0.37±0.14、0.37±0.07、0.15±0.05、0.57±0.13）,差异均有统计学意义（t=8.98,P=0.01;t=4.71,P=0.04;t=10.42,P=0.01;t=4.65,P=0.04;t=8.92,P=0.01;t=4.94,P=0.04;t=7.63,P=0.02）,4个基因（CHEK2、ERCC1、FANCE、GADD45G）表达上调1.5倍以上（2.58±0.25、1.95±0.09、8.82±0.78、3.18±0.89）,差异均有统计学意义（t=18.18,P=0.00;t=20.92,P=0.01;t=19.55,P=0.01;t=6.20,P=0.02）。real-time PCR的验证结果与其一致。结论 ARC患者晶状体皮质和正常对照晶状体皮质中部分DNA修复基因的表达存在差异,这些表达有差异的基因可能在ARC的形成和发展中起到一定作用。

紫外照射对DNA修复基因RAD24转录的影响

以酿酒酵母HY684为实验对象,用波长254nm紫外线分别在0,37,50和70J/m^2等强度下照射不同时间,提取总RNA,应用North-ern杂交方法检测RAD24基因转录水平的变化。结果显示37J/m^2、50J/m^2照射20分钟到120分钟明显提高RAD24基因转录水平,70J/m^2照射时,则恢复至正常水平,这说明低剂量紫外线照射可提高RAD24基因转录水平,该基因的表达具有损伤诱导性。

无机砷及其代谢物对DNA修复相关基因的体外实验研究

目的探讨无机砷及其代谢物致细胞中毒及自我修复的相关分子机制。方法从8例6～10岁的健康儿童志愿者中,取包皮组织分离、培养成纤维细胞(Fibroblast),分别以无机砷化合物亚砷酸钠(Sodium Arse-nate,Na2AsO2)、二甲基胂酸(Dimethylarsinic arsenical,DMAⅤ)、单甲基胂酸(Monomethylated arsenical,MMAⅢ)进行染毒,混匀分组为4组,即高、中、低剂量染毒组及对照组。在72h后,MTT法检测皮肤成纤维细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞周期,Real-Time PCR检测XPA、XPC、PARP1、ERCC3基因的表达水平。结果人真皮成纤维细胞通过MTT比色法检测得出结果:与对照组对比,人真皮成纤维细胞经不同浓度的iAsⅢ、DMAⅤ、MMAⅢ刺激后,吸光度值发生变化,存在剂量-反应关系(P<0.05);用0、5、15、25μmol/L的iAsⅢ、DMAⅤ、MMAⅢ的浓度作用人真皮成纤维细胞,G0/G1期细胞比例明显下降(P<0.05),G2/M期和S期细胞比例较对照组明显增加(P<0.05);高、中剂量iAsⅢ、DMAⅤ、MMAⅢ处理组细胞G1期细胞所占百分数增多,提示细胞在G1期出现阻滞的趋势,G2和S期细胞所占百分数较少。XPA、XPC、PARP1、ERCC3在iAsⅢ、DMAⅤ、MMAⅢ药物作用下,mRNA在0～15μmol/L浓度的表达量出现上升趋势,而随着iAsⅢ、DMAⅤ、MMAⅢ药物作用浓度的增加,在15～25μmol/L浓度的mRNA表达量显示有下降趋势,有统计学意义(P<0.05)。结论低浓度无机砷及其代谢产物对人真皮成纤维细胞增殖,高浓度具有细胞毒性。

DNA修复基因与肾透明细胞癌相关性的研究进展

肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)深刻且广泛地影响全人类,肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)是其最主要病理亚型。在过去30年,肾细胞瘤的生物分子机制被不断挖掘,随着DNA修复途径及相关基因研究深入,逐渐发现了他们之间的联系。细胞总是暴露在各种损伤因素下,导致基因组损伤,若DNA修复系统功能缺陷,导致基因组不稳定,最终细胞凋亡或转变为癌细胞。DNA修复基因(DNA repair gene,DRG)与ccRCC在易感性,预后及治疗方面具有显著的生物学相关性,为进一步探索ccRCC与DNA损伤修复之间的分子机制,确定ccRCC新的分子标志物,寻找合适免疫抑制物治疗靶点奠定了一定的基础。

德国研究小组发现与DNA双链断裂修复相关新基因

德国研究人员在寻找参与修复脱氧核糖核酸（DNA）双链断裂的基因方面获得进展。研究小组在人类细胞中找到61个位点，并发现了此前未知的与DNA双链断裂修复有关的基因。该研究结果将显著加速DNA修复基因的继续搜寻，并带来新的医疗应用可能。相关研究成果发表在6月29日的《公共科学图书馆·生物学》杂志上。

实验性脑出血后的细胞凋亡和凋亡相关基因转录、表达水平

目的 通过实验性脑出血动物模型研究脑出血后的细胞凋亡和凋亡相关基因转录、表达水平。方法 自体动脉血注入法建立实验性脑出血动物模型 ,分别行 Bcl- 2、bax、caspase- 3和 TNF- α免疫组化染色 ,细胞凋亡检测采用 TUNEL 法、流式细胞仪检测及 DNA电泳 ,RT- PCR检测血肿周围组织 caspase- 3m RNA的含量。结果 血肿形成后 6 h～ 7d,周围组织中 bcl- 2阳性细胞数逐渐下降至 1d达到最低 ;bax、caspase- 3、TNF- α以及 TU NEL 阳性细胞数逐渐上升 ,分别至 1～ 2 d、2～ 3d、3d和 3～ 5 d达到峰值。血肿周围组织细胞周期检测均可见 G1峰前形成 Ap亚峰 ,Ap亚峰细胞数逐渐增加 ,在 5 d形成高峰。2～ 7d组可见断裂 DNA片段形成的梯形条带。Caspase- 3m RNA的相对表达量逐渐增加 ,2 d达到峰值。结论 实验性脑出血后血肿周围组织中存在细胞凋亡 ,并有凋亡相关基因的表达 ,凋亡细胞数逐渐增加 ,5 d达峰值。

代谢酶基因、DNA修复基因多态性与食管癌关系的研究进展

食管癌的发病机制尚未完全阐明,值得关注的是遗传因素在食管癌发生中所起的作用。本文介绍了相关的一些基因的研究进展,包括参与致癌物代谢的相关基因(CYP、GST、NAT、ALDH2 )和参与DNA损伤修复的相关基因(XR CC1、MGMT、hOGG1) ,探讨它们的多态性与食管癌易感性的关系。

DNA切除修复与转录偶联

细胞ＤＮＡ受到某些环境理化因子损伤后，其中活性转录基因和ＤＮＡ转录链上的损伤被优先切除修复，这种ＤＮＡ选择性修复直接与基因转录过程偶联．在大肠杆菌中已分离到实现此功能的转录修复偶联因子（ＴＲＣＦ），是由ｍｄｆ基因编码的一种具有ＡＴＰａｓｅ活性的ＤＮＡ结合蛋白．在真核细胞中，发现某些ＤＮＡ修复蛋白也在ＤＮＡ转录中起作用，如人ＤＮＡ切除修复基因ＥＲＣＧ－３编码产物，是转录因子ＴＦⅡＨ中最大亚基ｐ８９，酵母切除修复基因ＲＡＤ３就是编码因子ｂ的最大亚基ｐ８５．

CRLP与DNA修复相关性的初步研究

目的探讨细胞经紫外处理后CRLP与DNA修复的相关性。方法将插入反义CRLP的pcDNA3.1/V5-His质粒用脂质体介导法转染BEL7402肝癌细胞,G418筛选获得的细胞用15J/m2的紫外作用,4h后用Annexin V—EGFP试剂处理细胞,荧光激活细胞分选法测定细胞凋亡比例。另外用RT-PCR和Northern杂交的方法检测了肿瘤细胞株和多组织中的CRLP的表达。结果转染反义CRLP质粒的细胞株经紫外处理后,统计学处理表明凋亡比率显著高于对照;该基因在所检测的肿瘤细胞株和各类组织中均有表达。结论CRLP基因的表达受到抑制以后可能通过影响细胞DNA修复能力降低细胞抗紫外杀伤的能力。

宿主细胞DNA损伤反应与重组腺相关病毒载体基因表达

文中主要讨论细胞DNA修复机制与重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)载体的相互关系,探讨通过调节宿主细胞DNA修复机制,提高rAAV载体表达及基因打靶效率的方法,进而提高rAAV载体基因表达的可能性.