黑暗链霉菌DNA转移系统的建立

研究了黑暗链霉菌的基因转移系统 ,探索了通过PEG 介导的原生质体转化、接合转移向黑暗链霉菌中转入外源DNA的可能性。多次尝试用质粒pIJ70 2转化黑暗链霉菌 990 4原生质体均未成功。对原生质体进行“热处理”后转化、利用单链DNA转化等都不能将质粒导入黑暗链霉菌中 ,表明黑暗链霉菌对外源DNA有很强的限制修饰作用。利用接合转移将具有oriT的大肠杆菌 链霉菌穿梭质粒pHZ1 3 2转入大肠杆菌ET1 2 5 6 7(pUZ80 0 2 )中 ,获得供体菌ET1 2 5 6 7(pUZ80 0 2 ,pHZ1 3 2 )。将供体菌与预萌发的黑暗链霉菌 990 4的孢子进行接合转移 ,成功地将pHZ1 3 2转入黑暗链霉菌 990 4中。质粒pHZ1 3 2经黑暗链霉菌自身修饰后也可转入黑暗链霉菌 990 4菌株的原生质体中 ,转化率约为 1 0 3 μgDNA(pHZ1 3 2 )。