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聚合物介导质粒DNA转运系统在骨组织工程中的应用
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作者 夏伦果 蒋欣泉 张志愿 《中国口腔颌面外科杂志》 CAS 2009年第4期370-373,共4页
基因治疗技术应用于骨组织工程,可以进一步促进成骨。聚合物介导的质粒DNA转运系统通过保护DNA免受降解并维持DNA在效应浓度,延长其内吞的机会,从而提高基因转染效率。目前用于骨组织工程研究的聚合物介导的质粒DNA转运系统主要有质粒DN... 基因治疗技术应用于骨组织工程,可以进一步促进成骨。聚合物介导的质粒DNA转运系统通过保护DNA免受降解并维持DNA在效应浓度,延长其内吞的机会,从而提高基因转染效率。目前用于骨组织工程研究的聚合物介导的质粒DNA转运系统主要有质粒DNA与胶原蛋白复合转运系统、质粒DNA与聚乙二醇-透明质酸水凝胶复合转运系统、质粒DNA与脂质体复合转运系统、质粒DNA与阳离子聚合物复合转运系统等。本文对近年来聚合物介导的质粒DNA复合转运系统在骨组织工程中的应用进展做一综述。 展开更多
关键词 聚合物 质粒dna转运系统 骨组织工程 基因治疗
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应用PAMAM dendrimers作为DNA运送载体的体外研究 被引量:5
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作者 郭晨莹 王恒 +1 位作者 蔺亚晖 蔡启良 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第9期804-811,共8页
StarburstTMPAMAMdendrimers分子是一类新型的高分枝、辐射状对称的树状高分子,在生理条件下其表面具有高密度的正电荷,可以通过静电相互作用与核酸形成复合物后,介导遗传物质进入细胞.研究了G3,G3 5,G5,G7,G7 5,G9各代dendrimers分子与... StarburstTMPAMAMdendrimers分子是一类新型的高分枝、辐射状对称的树状高分子,在生理条件下其表面具有高密度的正电荷,可以通过静电相互作用与核酸形成复合物后,介导遗传物质进入细胞.研究了G3,G3 5,G5,G7,G7 5,G9各代dendrimers分子与DNA结合后介导其转染细胞的能力,并初步评价这种复合物转染对细胞活力的影响.实验证实,全代的PAMAMdendrmers皆可与DNA结合,并可在体外培养的细胞中介导高效的DNA转染.PAMAMdendrimer/DNA复合物很稳定,在较大的pH值变化范围内(pH 2~ 10 )不解离.PAMAMdendrimers可保护与之复合的DNA分子免受限制性内切酶的降解.在一定的电荷比范围内,高代数的dendrimers分子与DNA形成的复合物对培养细胞的转染效率高于低代数dendrimer分子,复合物所介导的转染效率在不同的细胞系之间也有差异.在有效作用浓度范围内(≤ 1 3× 10 -1g/L),PAMAMdendrimers/DNA复合物对被转染细胞无毒性.但是,未与DNA复合的dendrimers分子在较低浓度时则表现出毒性,表明StarburstTM PAMAMdendrimers分子可作为新型的低毒非病毒DNA载体,用于介导DNA对体外培养细胞的转染.这些前期观察。 展开更多
关键词 dna转运 Starburst^TM PAMAM DENDRIMERS 转染 非病毒载体
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穿膜肽介导的新型基因转运载体的功能研究
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作者 张宏达 绳纪坡 +2 位作者 于芳 黄君健 胡宝成 《生物技术通讯》 CAS 2013年第6期782-786,共5页
目的:借助穿膜肽TAT高效跨膜的特性和LacI前头肽突变体(LacI HPM)高亲和力结合DNA的特性,建立一种安全高效、无基因插入片段大小限制的基因转导系统。方法:在TAT-LacI HPM片段C端和N端分别添加GST标签,构建pET-28a(+)-TAT-LacI HPM-GST... 目的:借助穿膜肽TAT高效跨膜的特性和LacI前头肽突变体(LacI HPM)高亲和力结合DNA的特性,建立一种安全高效、无基因插入片段大小限制的基因转导系统。方法:在TAT-LacI HPM片段C端和N端分别添加GST标签,构建pET-28a(+)-TAT-LacI HPM-GST和pGEX-GST-TAT-LacI HPM重组表达载体,可溶性表达TAT-LacI HPM-GST及GST-TAT-LacI HPM融合蛋白并纯化,获得TAT-LacI HPM二聚体,免疫荧光检测TAT-LacI HPM融合蛋白穿过HeLa细胞膜的情况,观察EGFP的表达,用免疫印迹检测TAT-LacI HPM融合蛋白介导质粒DNA进入细胞的能力。结果:表达、纯化并获得二聚体融合蛋白,体内实验表明其具有跨膜能力,能介导带有LacI结合序列的DNA质粒进入细胞,并在转染细胞里检测到了目的蛋白。结论:初步证实TAT-LacI HPM融合蛋白作为一种新型通用性非病毒DNA转运载体的可行性,为评价这种新型DNA疫苗载体在提高免疫效果方面的可行性奠定了前期实验基础。 展开更多
关键词 穿膜肽 LacI前头肽突变体 二聚体 dna转运
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Starburst^(TM) Polyamidoamine Dendrimers介导的绿色荧光蛋白基因在小鼠体内的表达分布及对恶性疟DNA疫苗ES312免疫原性的影响
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作者 丁俊军 郭晨莹 +2 位作者 蔡启良 蔺亚晖 王恒 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期499-503,i0003,共6页
目的研究StarburstTMPolyamidoamine(PAMAM)dendrimers介导绿色荧光蛋白基因在小鼠体内的表达分布及对恶性疟DNA疫苗ES312免疫原性的影响。方法经股四头肌给小鼠注射StarburstTMPAMAMdendrimers与绿色荧光蛋白基因或恶性疟DNA疫苗ES312... 目的研究StarburstTMPolyamidoamine(PAMAM)dendrimers介导绿色荧光蛋白基因在小鼠体内的表达分布及对恶性疟DNA疫苗ES312免疫原性的影响。方法经股四头肌给小鼠注射StarburstTMPAMAMdendrimers与绿色荧光蛋白基因或恶性疟DNA疫苗ES312的复合物。通过流式细胞术、Westernblot和间接免疫荧光方法检测绿色荧光蛋白的表达分布和表达量。用ELISA方法检测恶性疟DNA疫苗ES312的免疫原性。结果在注射StarburstTMPAMAMdendrimers/DNA复合物后2h~7d内,StarburstTMPAMAMdendrimers携带的绿色荧光蛋白基因的表达在小鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑、肌肉中均能被检测到,在肾总蛋白中所占百分比最高,且各器官管腔内皮细胞中的绿色荧光蛋白表达量较高。小鼠的脑和肾中,在StarburstTMPAMAMdendrimers的存在下,绿色荧光蛋白基因的表达量明显高于裸DNA的表达量。经StarburstTMPAMAMdendrimers携带的恶性疟DNA疫苗ES312诱导的抗体反应水平明显高于单纯裸DNA疫苗所诱导的抗体水平。结论StarburstTMPAMAMdendrimers作为一种低抗原性、非病毒的新型DNA载体,能够明显提高裸DNA在体内的表达水平,诱导产生很强的体液免疫反应。但是,StarburstTMPAMAMdendrimers/DNA复合物在各组织器官中的广泛分布,尤其是透过血脑屏障的能力,已超出疫苗载体的适用范围。作为DNA疫苗载体,要对现有StarburstTMPAMAMdendrimers分子的结构做进一步的修饰。 展开更多
关键词 dna转运 STARBURST POLYAMIDOAMINE DENDRIMERS 体内表达 免疫原性
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Cloning and sequencing of mouse GABA transportercomplementary DNA 被引量:1
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作者 TAMANTHONYC.W. LIHEGUO 《Cell Research》 SCIE CAS CSCD 1994年第1期109-116,共8页
A cDNA encoding the mouse GABA transporter has been isolated and sequenced. The results show that the mouse GABA transporter cDNA differs from that of the rat by 60 base pairs at the open reading frame region but the ... A cDNA encoding the mouse GABA transporter has been isolated and sequenced. The results show that the mouse GABA transporter cDNA differs from that of the rat by 60 base pairs at the open reading frame region but the deduced amino acid sequences of the two cDNAs are identical and both composed of 599 amino acids. However,the amino acid sequence is different from the sequence deduced from a recently published mouse GABA transporter cDNA. 展开更多
关键词 GABA transporter coloning SEQUENCING MOUSE
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pRNA的结构、功能及其研究近况 被引量:1
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作者 周辉 卢向阳 +1 位作者 田云 黄成江 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期1180-1184,共5页
在噬菌体phi29中,基因组DNA的包装需要由病毒基因组编码的pRNA参与,6个pRNA分子通过由pRNA分子间相互作用形成的六聚体来启动DNA转运马达,这个过程由ATP提供能量。RNA纳米技术将pRNA与siRNA、核酶、反义RNA等分子稳定结合,pRNA作为一种... 在噬菌体phi29中,基因组DNA的包装需要由病毒基因组编码的pRNA参与,6个pRNA分子通过由pRNA分子间相互作用形成的六聚体来启动DNA转运马达,这个过程由ATP提供能量。RNA纳米技术将pRNA与siRNA、核酶、反义RNA等分子稳定结合,pRNA作为一种载体把它们准确运输到癌细胞和病毒感染细胞的作用靶点,从而发挥它们各自的功能。作为一种非编码RNA,对pRNA的深入研究将有助于我们了解生命起源问题,并有着广阔的应用前景。 展开更多
关键词 PRNA 六聚体 dna转运 纳米粒子
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Influence of elution conditions on DNA transport behavior in free solution by hydrodynamic chromatography 被引量:1
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作者 Lei Liu Vijaykumar Veerappan +2 位作者 Yuzhi Bian Guangsheng Guo Xiayan Wang 《Science China Chemistry》 SCIE EI CAS CSCD 2015年第10期1605-1611,共7页
We have previously developed bare narrow-bore capillary chromatography. In this work, high-performance DNA separation was realized for a size range of 10–800 base pairs(bp) utilizing bare narrow-bore capillary chroma... We have previously developed bare narrow-bore capillary chromatography. In this work, high-performance DNA separation was realized for a size range of 10–800 base pairs(bp) utilizing bare narrow-bore capillary chromatography with 750 nm- radius capillaries. Separation behavior of double-stranded DNA(ds DNA) fragments was investigated over a range of eluent concentrations and elution pressures. DNA molecules were hydrodynamically separated in a size-dependent manner in free solution without any sieving matrices, with the longer fragments being eluted out from the capillary earlier. It was found that the eluent concentration variously influenced the transport behavior for different-sized DNA fragments depending upon the configuration of DNA molecules and the association of counterions. Ionic strength of the solutions strongly impacted DNA persistence length. Enhanced elution pressure could shorten analysis time with a slight loss in resolution. Excellent efficiency of two million theoretical plates per meter was achieved, which indicates the enormous potential of bare narrow-bore capillary chromatography for the analysis of DNA fragments. These findings would be useful in understanding the transport behavior of DNA fragments in confined dimensions for chromatography in free solution. 展开更多
关键词 dna separation transport behavior CHROMATOGRAPHY
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细菌自然转化的分子机制及生物学功能研究进展 被引量:4
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作者 田琇 张利 刘马峰 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期1723-1730,共8页
基因的水平转移在细菌的进化中起着非常重要的作用。自然界中的细菌之间主要通过3种机制进行基因水平转移:由噬菌体介导的转导、接合转移和自然转化。自然转化是指自然感受态的细菌能够自发地从外界环境中摄取DNA分子并整合到自身基因... 基因的水平转移在细菌的进化中起着非常重要的作用。自然界中的细菌之间主要通过3种机制进行基因水平转移:由噬菌体介导的转导、接合转移和自然转化。自然转化是指自然感受态的细菌能够自发地从外界环境中摄取DNA分子并整合到自身基因组上的过程。该现象首先发现于肺炎链球菌,目前至少有83种细菌被发现具有发生自然转化的能力,其中革兰氏阳性菌以肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pneumoniae)为代表,革兰氏阴性菌以奈瑟氏菌(Neisseria)为代表,对其自然转化机制的研究和认识较为清楚,但不同细菌之间自然转化的机制有所差异。自然转化的生物学功能一直以来有以下几种推测:获取营养、修复DNA损伤、生物进化,而近年来对此认识争论不休。本文将详细描述细菌自然转化的分子机制,并对其主要的生物学功能争论焦点进行评述,以期对细菌自然转化有更深入的理解和认识。 展开更多
关键词 自然转化 dna转运 感受态 生物学功能
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