4种有机磷农药DNA适体的筛选及结构分析

利用SELEX技术从一个固定的随机ssDNA库中同时筛选甲拌磷、丙溴磷、水胺硫磷、氧化乐果4种有机磷农药的DNA适体。随着筛选轮数的增加,4种有机磷农药从固定的随机库中洗脱的ssDNA逐渐富集,经过12轮的筛选,筛选效率达到40.8%。对第12轮洗脱的ssDNA进行克隆、测序,挑选的15个阳性克隆均测序成功,由于部分克隆具有完全一致的序列,最终筛选到5条ssDNA序列。一级结构序列分析表明5条ssDNA具有一定的同源性,二级结构预测表明5条ssDNA的二级结构主要以茎环结构为主,表明茎环结构可能是适体结合4种有机磷农药的基础。

胃癌特异性DNA适体的筛选和鉴定

核酸适体是在疾病诊断和治疗领域出现的新一类分子探针.本实验采用全活体细胞SELEX技术富集胃癌细胞特异性适体,人胃癌AGS细胞、人正常胃表皮GES-1细胞分别作为正向选择的靶细胞和反向选择的阴性细胞,筛选过程为凝胶电泳和流式细胞分析所监测.通过连续的体外进化、克隆、测序,最终对胃癌细胞特异的DNA适体cy-apt20从ssDNA池中筛选出来,流式细胞分析结果提示其对AGS细胞有高于70%的结合率,对于非胃癌细胞的结合率则低于30%.少量的FITC-cy-apt20即可有效识别AGS细胞,并且稳定持续一段时间.荧光成像的结果表明多数AGS细胞可被FITC-cy-apt20染色,AGS细胞的荧光强度强度约为非AGS细胞的六倍.本研究表明全活体细胞SELEX技术是富集胃癌细胞特异性适体简便、有效的方法,cy-apt20适体在胃癌的诊断和研究中具有广阔的应用前景.

凝血酶适体DNA四螺旋构象去折叠机制的NMR研究

凝血酶适体DNA[thrombin binding DNA aptamer d(G1G2T3T4G5G6T7G8T9G10G11T12T13G14G15),TBA]是对凝血酶有极高亲和性、并能有效抑制凝血酶凝血功能的单链DNA适体.凝血酶适体DNA在K+等离子存在时呈现出椅式构象,其中2个堆积的四碱基体(G-quartet)构成椅子的主体部分,而1个TGT loop环和2个TT loop环分别构成椅子的靠背和椅脚.我们测定了在K+存在时凝血酶适体DNA中亚氨基质子的交换速率,发现位于TGTloop环和TT loop环内的亚氨基质子G6、G5和G14由于受TGT loop环和TT loop环的保护有比较小的交换速率,而位于环之外的亚氨基质子G2、G11和G15有较大的交换速率;TGTloop环稳定性同TT loop环相似;碱基T4、T13和T9在稳定凝血酶适体DNA结构中起着很大的作用.这些证据进一步支持了凝血酶适体DNA的去折叠机制:位于TGT loop环和TTloop环之外的碱基对G1-G15、G2-G14和G5-G11首先断裂其Hoogsteen氢键,而TGT loop环、TT loop环和其内的Hoogsteen氢键保持完好;当温度进一步升高时,TGT loop环和两个TT loop环打开环状结构,凝血酶适体DNA的椅式构象彻底解体,转变为自由单链.

一种肿瘤标志物的高灵敏电化学检测方法研究

以肿瘤标志物IgG蛋白,构建了一种利用新型电化学探针采用夹心捕获和探针标记的方法对肿瘤标志物IgG蛋白进行检测。通过池底部修饰的抗体将肿瘤标志物IgG蛋白捕获并固定到检测池中,利用DNA适体修饰的DNA纳米网络探针对IgG蛋白进行识别和标记,再将DNA纳米网络探针上负载的大量CdTe量子点酸溶并利用阳极溶出伏安法检测溶解的Cd离子浓度,以此间接检测肿瘤标志物IgG蛋白。DNA适体起到特异性识别肿瘤标志物IgG蛋白的作用,而DNA纳米网络起到负载大量信号物质CdTe量子点的信号放大作用。肿瘤标志物的高灵敏的电化学检测方法的构建对于肿瘤疾病的早期诊断有着重要的意义,可以为临床医疗争取极为宝贵的时间。

小分子直接凝血酶抑制剂研究进展

小分子直接凝血酶抑制剂是一种重要的抗凝防栓药物,一般通过化学合成的方法制备,相对分子质量在100~1 000之间。这类药物可选择性的与凝血酶活性位点结合,抑制凝血酶活性,作用强,特异性高,在临床治疗血栓类疾病中具有重要意义。近年来,已成功开发了多种小分子直接凝血酶抑制剂用于临床,其主要的给药方式为静脉注射和口服,治疗效果优于传统抗凝药物。文章就小分子直接凝血酶抑制剂的现状进行综述,并展望其今后发展方向。