何首乌饮通过DNA甲基转移酶1延缓大鼠睾丸间质细胞衰老

目的探讨何首乌饮能否通过DNA甲基转移酶1(DNMT1)延缓大鼠睾丸间质细胞衰老。方法40只Wistar雄性大鼠随机分为4组,每组10只。免疫组织化学检测各组大鼠睾丸组织中DNMT1表达水平。ELISA实验检测各组大鼠血清中的睾酮含量。通过自由基氧化损伤建立大鼠睾丸间质细胞衰老模型。在睾丸间质细胞中使用慢病毒敲低DNMT1,通过β-半乳糖苷酶(β-GAL)染色、免疫荧光染色和ELISA实验检测细胞衰老状态和细胞上清液中睾酮和睾酮合成关键酶3β羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)、细胞色素P450家族成员11A1(CYP11A1)的含量。结果与青年对照组相比,自然衰老组大鼠睾丸组织中P16蛋白表达和β-GAL阳性率明显升高,DNMT1表达和血清睾酮含量降低(P<0.05);何首乌饮干预能够降低衰老大鼠睾丸组织P16蛋白表达和β-GAL阳性率,提高DNMT1表达和血清中的睾酮含量(P<0.05)。衰老的睾丸间质细胞中呈现相同的趋势。在睾丸间质细胞中敲低DNMT1后,β-GAL阳性率和P16蛋白表达明显增加,睾丸间质细胞的睾酮分泌量和睾酮合成关键酶3β-HSD、CYP11A1含量明显减少,与正常组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。加入何首乌饮后,上述现象得到改善。结论何首乌饮可以通过DNMT1延缓大鼠睾丸间质细胞衰老。

急性脑出血患者血清E盒锌指结合蛋白1及DNA甲基化转移酶1与神经功能缺损和预后的相关性分析

目的探讨急性脑出血(ACH)患者血清E盒锌指结合蛋白1(ZEB1)、DNA甲基化转移酶1(DNMTl)与神经功能缺损、预后的关系。方法选取2019年7月—2022年7月本院收治的105例ACH患者为ACH组,依据ACH患者入院时美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分将其分为轻度组(n=34)、中度组(n=41)、重度组(n=30)。根据改良Rankin量表(mRS)评分将ACH患者分为预后良好组(n=65)和预后不良组(n=40)。另纳入同期105例体检健康者为对照组。选取2021年7月—2022年7月本院诊治的45例ACH患者对构建的ACH预后模型的受试者工作特征(ROC)曲线进行验证。采用酶联免疫吸附试验检测血清ZEB1、DNMT1水平;采用Spearman法分析ACH患者ZEB1、DNMT1水平与NIHSS评分的关系;采用多因素Logistic回归模型分析ACH患者预后的影响因素,采用ROC曲线评估血清ZEB1、DNMT1水平对ACH患者预后的预测价值。结果与对照组相比,ACH组血清ZEB1、DNMT1水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与轻度组相比,中度组和重度组ACH患者血清ZEB1、DNMT1、NIHSS评分均升高,差异有统计学意义(P<0.05);与中度组相比,重度组ACH患者血清ZEB1、DNMT1、NIHSS评分均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。Spearman分析结果显示,ACH患者血清ZEB1、DNMT1水平与NIHSS评分均呈正相关(r=0.569、0.763,P均<0.001)。单因素分析结果显示,与预后良好组比较,预后不良组患者NIHSS评分、血肿体积、ZEB1及DNMT1水平均升高或增大,差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,ZEB1、DNMT1、NIHSS评分、血肿体积增大是ACH患者预后不良的危险因素(P<0.05)。血清ZEB1、DNMT1预测ACH患者预后的曲线下面积(AUC)分别为0.834、0.854,ZEB1、DNMT1联合预测ACH患者预后的AUC为0.944,灵敏度为95.0%,特异度为86.2%。以验证组人群对预测预后的ROC曲线进行验证,结果显示AUC为0.903(95%CI:0.854~0.951),提示预后预测曲线具有较好的区分度。结论ACH患者血清ZEB1、DNMT1水平较高,二者均与ACH患者神经功能缺损、预后显著相关,且血清ZEB1、DNMT1联合可能更有利于临床评估ACH患者预后情况。

miR-214-5p通过DNMT1介导的AXIN2基因DNA甲基化修饰在皮肤基底细胞癌中的作用机制

目的探讨皮肤基底细胞癌中轴抑制蛋白2(Axis inhibition protein 2,AXIN2)基因启动子甲基化对基因转录的影响及miR-214-5p通过靶向DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase1,DNMT1)对AXIN2甲基化率的调控机制。方法收集2022年1月-2023年6月在广州市皮肤病防治所就诊治疗的102例皮肤基底细胞癌(Cutaneous basal cell carcinoma,BCC)患者作为研究对象,提取癌组织和癌旁正常组织标本及基线资料。焦磷酸测序法检测AXIN2基因启动子区甲基化率。实时荧光定量PCR检测AXIN2、DNMT1基因mRNA和miR-214-5p的表达水平。将miR-214-5p模拟物(mimic)、抑制物(inhibitor)及其阴性对照(mimic NC和inhibitor NC)分别对基底细胞癌A431细胞进行转染,48 h后检测DNMT1基因mRNA表达水平和AXIN2基因甲基化率。结果BCC癌组织的AXIN2基因甲基化率显著高于癌旁正常组织(t=5.128,P<0.001),AXIN2基因mRNA相对表达水平显著低于癌旁正常组织(t=7.826,P<0.001),DNMT1基因mRNA表达水平显著高于癌旁正常组织(t=4.838,P<0.001),miR-214-5p表达水平显著低于癌旁正常组织(t=5.426,P<0.001)。BCC癌组织的AXIN2基因甲基化率与其mRNA表达水平呈负相关(r=-0.793,P<0.001),DNMT1基因mRNA水平与AXIN2基因甲基化率呈正相关(r=0.814,P<0.001),miR-214-5p表达水平与DNMT1基因mRNA水平呈负相关(r=-0.747,P<0.001)。双荧光素酶报告基因实验结果证实,DNMT1是miR-214-5p的靶基因。细胞转染后,与mimic NC、inhibitor和inhibitor NC比较,mimic的DNMT1基因mRNA水平、AXIN2基因甲基化率显著降低(P<0.001);而inhibitor的DNMT1基因mRNA水平和AXIN2基因甲基化率相较于其他三组明显上升(P<0.001)。结论miR-214-5p可通过调控下游靶蛋白DNMT1表达,影响AXIN2基因的DNA甲基化率,调控AXIN2基因的表达水平,参与皮肤基底细胞癌的发生机制。

DNA甲基转移酶在结直肠癌发生发展中的作用研究

目的 探讨DNA甲基转移酶在结直肠癌发生发展过程中发挥的作用。方法 选取2021年9月至2022年6月包头医学院第二附属医院结直肠癌患者的结直肠癌组织及癌旁组织。通过Real-time PCR和Western Blot对癌组织及癌旁组织中DNMT1、DNMT3A及DNMT3B的m RNA和蛋白水平表达进行检测。结果 与癌旁组织相比,DNMT1、DNMT3A、DNMT3B在结直肠癌中m RNA表达水平及蛋白表达水平均显著上升,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 DNA甲基转移酶的过表达促进了结直肠癌发生发展。

宫颈癌组织中DNA甲基转移酶1mRNA的表达

目的:探讨DNA甲基转移酶1(DNMT1)在宫颈癌发生发展中的作用。方法:应用原位杂交技术检测52例宫颈癌、60例宫颈上皮内瘤变和20例正常宫颈组织DNMT1 mRNA的表达;分析DNMT1 mRNA的表达和宫颈癌患者临床病理指标的关系。结果:正常宫颈、宫颈上皮内瘤变和宫颈癌组织中DNMT1 mRNA的阳性率分别为10.0%(2/20)、63.3%(38/60)和78.8%(41/52),呈升高趋势(χ2=29.057,P<0.05),宫颈上皮内瘤变和宫颈癌组织DNMT1 mRNA的阳性率高于正常组织。不同宫颈癌的病理类型、临床分期、组织学分级及有无淋巴结转移组间DNMT1 mRNA阳性率差异无统计学意义。结论:DNMT1参与了宫颈癌的发生,并在宫颈上皮内瘤变时就已经起了重要作用。

杆状病毒介导的靶向DNA甲基转移酶1 siRNA表达载体的构建

目的:构建携带DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)RNAi基因的重组杆状病毒载体,以进一步研究DNMT1对胰腺癌相关基因的影响。方法:首先将带有BglⅡ和HindⅢ酶切黏性末端的60 bp正义和反义寡核苷酸退火,与用BglⅡ和HindⅢ双酶切后的线性化载体pSUPER连接构建成pSUPER si-DNMT1-D,然后将H1启动子和RNAi序列从上述重组载体切下,插入至同样双酶切的pFastBac1载体,经过转座重组,抽提重组BacmidDNA,转染草地贪夜蛾细胞Sf9,获得重组杆状病毒Bac-si-DNMT1-D。将上述重组杆状病毒感染胰腺癌PaTu8988细胞系,其中以重组杆状病毒r-Bac-CMV-EGFP作为阴性对照。然后运用荧光定量PCR检测DNMT1基因表达变化。结果:重组杆状病毒能够感染PaTu8988细胞,并且能显著干扰DNMT1基因表达。结论:杆状病毒表达系统可以作为RNAi载体,为以后的基因治疗开辟新的途径。

DNA甲基转移酶1蛋白在膀胱移行细胞癌中的表达及其临床意义

目的:研究DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase1,DNMT1)在膀胱移行细胞癌(transitional cell carcinoma of the bladder,TCCB)组织中的表达及其与肿瘤生物学行为的关系。方法:应用免疫组织化学SP法检测60例TCCB组织中DNMT1的表达,结合临床资料,分析其与肿瘤生物学行为的相关性。结果:TCCB组织中DNMT1阳性表达率为(86.7%,52/60),明显高于癌旁组织(43.3%,26/60)及正常膀胱组织(33.3%,5/15)(P<0.01);DNMT1蛋白的阳性表达率与肿瘤分化程度和性别呈一定的相关性(P<0.01),与TCCB患者的年龄和临床分期无明显相关性(P>0.05)。结论:DNMT1蛋白过表达在人TCCB的发生和发展中起一定作用。

DNA甲基转移酶1与CD11a基因在系统性红斑狼疮患者中mRNA水平的表达

目的检测系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者中DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)和CD11a基因的表达水平,探讨DNMT1的表达异常在SLE发病中的作用。方法用Real-time PCR方法测定SLE患者缓解期、活动期和正常人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中DNMT1和CD11a基因的表达水平。结果 SLE活动期患者PBMC中DNMT1的表达水平较对照组(P=0.014)和缓解期组(P=0.030)显著下降;缓解期的DNMT1表达水平与对照组(P=0.264)相比差异无统计学意义;SLE患者DNMT1的表达水平与SLE疾病活动指数(SLE disease activity index,SLEDAI)呈现负相关(P<0.05)。SLE活动期患者PBMC中CD11a的表达水平较对照组(P=0.003)显著升高(P<0.05);缓解期的CD11a表达水平与对照组(P=0.250)和缓解期组(P=0.069)相比差异无统计学意义(P>0.05);SLE患者CD11a的表达水平与SLEDAI呈正相关(P<0.05)。SLE患者DNMT1与CD11a的表达水平无显著相关性(P>0.05)。结论 SLE患者PBMC中DNMT1表达水平的降低可能是造成基因组DNA低甲基化的重要原因,使得CD11a等致病基因过度表达,进而导致SLE发病。

靶向DNA甲基转移酶1的siRNA表达载体的构建与筛选

目的:构建针对DNA甲基转移酶(dnmt1)基因的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)表达载体,以用于后续的RNA干扰研究。方法:针对人dnmt1的mRNA序列,设计并合成6条编码siRNA的寡核苷酸片段,经退火成互补双链,克隆至载体pSilencer3.1-H1中构建3个重组体,分别命名为pshRNA-dnmt1-A、pshRNA-dnmt1-B和pshRNA-dnmt1-C,并进行测序鉴定。再利用无内毒素的大提质粒试剂盒制备无内毒素的pshRNA-dnmt1-A、B和C,分别通过脂质体介导转染宫颈癌HeLa细胞,以未转染和转染空载体者为对照。采用RT-PCR和Western blot检测转染细胞dnmt1 mRNA及蛋白表达情况。结果:成功构建了表达靶向dnmt1的siRNA重组载体;转染pshRNA-dnmt1-C对HeLa细胞dnmt1基因的表达几乎无影响。pshRNA-dnmt1-A、B均能有效沉默HeLa细胞中dn-mt1基因的表达,其dnmt1mRNA表达的抑制率分别为21.8%和69.7%,蛋白表达的抑制率分别为27.9%和73.2%,以pshRNA-dnmt1-B的干扰效果最佳。结论:成功构建并筛选出了有效的dnmt1siRNA表达载体。

DNA甲基转移酶1在子宫颈癌组织和细胞中的表达及意义

目的研究DNA甲基转移酶1(DNMT1)在宫颈癌组织和宫颈癌细胞系中的表达情况,分析其表达率与宫颈癌临床病理因素之间的关系,并探讨其在宫颈癌发生发展过程中的作用。方法采用免疫组化SP法检测DNMT1蛋白在3株宫颈癌细胞系(SiHa、Hela、C33A细胞系)及89例宫颈癌组织、20例宫颈上皮内瘤变(CIN)、20例正常宫颈上皮组织石蜡标本中的阳性细胞表达率,并分析其与宫颈癌临床病理因素之间的关系;用RT-PCR方法检测DNMT1 mRNA在3株宫颈癌细胞系及35例宫颈癌组织、24例CIN、20例正常宫颈组织新鲜标本中的表达情况。结果DNMT1蛋白在3株宫颈癌细胞中均有表达,而在对照组(人子宫内膜间质细胞)中无表达,在宫颈癌组织中的阳性表达率为71.9%,高于CIN组织(35.0%,P<0.05)和正常宫颈组织(10.0%,P<0.05);DNMT1蛋白的异常表达与宫颈癌组织的分化程度有关(P<0.05),与年龄、肿瘤病理型别、有无淋巴结转移和临床分期无明显关系。DNMT1 mRNA在3株宫颈癌细胞中均有表达,对照组细胞中无表达,在宫颈癌组织中的阳性表达率为85.7%,高于CIN组织(33.3%,P<0.05)和正常宫颈组织(5.0%,P<0.05)。结论DNMT1 mRNA和蛋白在宫颈癌组织和细胞中的阳性表达率均高于正常宫颈组织,有可能作为宫颈癌早期诊断的标志物。

DNA甲基转移酶1和组蛋白去乙酰化酶1在子宫内膜异位症在位内膜的表达

目的探讨DNA甲基转移酶1(DNMT1)和组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)在子宫内膜异位症患者子宫内膜中的表达及其两者在子宫内膜异位症发生、发展中的作用。方法选取子宫内膜异位症患者在位内膜18例,无子宫内膜异位症的对照子宫内膜20例,应用免疫组织化学法测定DNMT1的分布,应用免疫印迹法检测内膜组织中DNMT1和HDAC1蛋白的表达。结果免疫组织化学提示,DNMT1主要分布于子宫内膜腺上皮细胞和间质细胞的胞核;子宫内膜异位症在位内膜中DNMT1的表达强度显著高于对照组子宫内膜(P<0.01)。免疫印迹发现,子宫内膜异位症在位内膜DNMT1和HDAC1蛋白的表达高于对照组子宫内膜,差异有统计学意义(P<0.05);且两者的表达呈正相关(P<0.05)。结论 DNMT1和HDAC1在EMs患者的高表达可能在子宫内膜异位症的发生、发展中起着重要作用。

血清DNA甲基转移酶1、DNA甲基转移酶3a在宫颈癌及癌前病变中的表达及与人乳头瘤病毒感染的相关性

目的检测宫颈癌及癌前病变病人血清中DNA甲基转移酶1(DNMT1)、DNA甲基转移酶3a(DNMT3a)表达水平,探讨二者与人乳头瘤病毒(HPV)感染的相关性。方法选取2017年9月至2019年9月于焦煤集团中央医院收治住院的宫颈癌病人58例及癌前病变病人70例作为观察组。选取同期入院体检的正常女性志愿者50例作为对照组。采用酶联免疫吸附(ELI⁃SA)法检测血清中DNMT1、DNMT3a表达水平,检测各组HPV感染情况,将观察组根据是否感染HPV分为HPV感染组和HPV未感染组,比较两组间血清DNMT1、DNMT3a表达水平。分析血清DNMT1、DNMT3a水平与宫颈癌及癌前病变组病人病情严重程度及HPV感染类型的关系。结果宫颈癌及癌前病变病人血清DNMT1[(44.72±9.36)μg/L、(26.78±5.84)μg/L比(13.03±2.65)μg/L]、DNMT3a[(607.48±125.19)μg/L、(415.03±82.56)μg/L比(346.12±67.34)μg/L]表达显著高于对照组(P<0.05),宫颈癌病人血清DNMT1、DNMT3a表达显著高于癌前病变组(P<0.05)。血清DNMT1、DNMT3a水平与宫颈癌病人FIGO分期、CIN分级、HPV危险程度均相关(P<0.05)。血清DNMT1、DNMT3a诊断宫颈癌的AUC分别为0.918、0.875,截断值分别为36.049μg/L、563.431μg/L,特异性分别为92.9%、94.3%,敏感度分别为82.8%、70.7%;二者联合诊断宫颈癌的AUC为0.960,特异性为94.3%,敏感度为91.4%。各组HPV感染情况结果显示,宫颈癌组病人HPV阳性率最高为100.00%,宫颈癌前病变组HPV阳性率为61.43%,对照组HPV阳性率为6.00%,三组HPV感染情况差异有统计学意义(P<0.05)。HPV感染组病人及健康女性血清DNMT1、DNMT3a表达水平高于HPV未感染组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论宫颈癌及癌前病变病人血清DNMT1、DN⁃MT3a呈高表达,宫颈癌病人HPV感染率显著高于癌前病变病人,HPV感染病人血清DNMT1、DNMT3a表达水平升高,且高表达DNMT1、DNMT3a水平与宫颈癌及癌前病变病人病情严重、HPV感染高危相关。

DNA甲基转移酶1在乳腺癌患者中的表达及意义

目的:分析乳腺癌患者外周血中DNA甲基转移酶1(DNA Methyltransferase 1,DNMT1)的表达及其临床意义。方法:本院2018-04-01—2018-11-30期间收治的60例乳腺癌患者(实验组)及同期50例体检健康女性(对照组),采用实时定量PCR(RT-PCR)检测外周血中DNMT1 mRNA的表达情况,Western blot检测两组间DNMT1蛋白表达,比较两组间各指标的差异并分析其与患者临床特征的关系。结果:实验组DNMT1 mRNA在外周血中的表达较对照组显著升高(10.31±3.39 vs 4.74±3.10,P<0.01),DNMT1蛋白表达较对照组亦显著升高(38.48±3.80 vs 23.78±2.95,P<0.01);不同临床特征乳腺癌患者外周血中DNMT1 mRNA和蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:DNMT1在乳腺癌患者外周血中高表达,与乳腺癌发生密切相关,但与其发展转移无关。

宫颈癌组织中DNA甲基转移酶1、3A和3B mRNA的表达

目的探讨DNA甲基转移酶1、3A和3B在宫颈癌发生发展中的作用。方法应用real-time PCR技术检测10例宫颈癌、10例宫颈上皮内瘤变和10例正常宫颈组织DNMT1、3A和3BmRNA的表达。结果宫颈癌组织、宫颈上皮内瘤变和正常宫颈中DNMT 1mRNA对GAPDH mRNA的相对丰度值分别是0.30±0.1、0.26±0.12和0.10±0.04,宫颈癌组织组织中与正常宫颈中DNMT 1表达有显著差异(P<0.05);宫颈癌组织、宫颈上皮内瘤变和正常宫颈中DNMT3A mRNA对GAPDH mRNA的相对丰度值分别是0.94±0.27、0.51±0.24和0.13±0.04,三组相比较有显著性差异(P<0.05);宫颈癌组织、宫颈上皮内瘤变和正常宫颈中DNMT 3B mRNA对GAPDH mR-NA的相对丰度值分别是0.30±0.09、0.28±0.11和0.11±0.04,宫颈癌组织组织中与正常宫颈中DNMT 3B表达有显著差异(P<0.05)。结论 DNMT1、3A和3B参与了宫颈癌的发生,并在宫颈上皮内瘤变时就已经起了一定作用。

基于TALE技术的哈萨克族食管上皮DNA甲基转移酶1高表达细胞株模型的构建

目的:构建哈萨克族食管上皮细胞DNA甲基转移酶1(DNMT1)高表达细胞株模型。方法:将构建的WV0133、WV0132和WV072质粒转染至哈萨克族食管上皮细胞,利用嘌呤霉素对DNMT1高表达细胞进行筛选,并通过荧光显微镜、实时荧光定量PCR(q PCR)和Western blot法检测细胞转染情况和目的基因DNMT1的表达情况。结果:WV0133和WV0132质粒转染组细胞DNMT1m RNA表达水平是正常细胞组的1.786倍和2.721倍,DNMT1蛋白表达水平是正常细胞组的2.734倍和3.100倍,均显著高于正常细胞组(P<0.01)。其中,WV0132质粒转染组细胞DNMT1 m RNA和蛋白表达水平较高。结论:成功构建了哈萨克族食管上皮DNMT1高表达细胞株模型,为深入研究食管癌的发生机制提供了研究工具。

DNA甲基转移酶1在胃癌组织中的表达及意义

目的探讨DNA甲基转移酶1(DNMTl)在胃癌中的表达及其与胃癌临床分期、分化程度及淋巴结转移等的关系。方法采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测34例原发性胃癌患者癌组织及癌旁正常组织中DNMT1 mRNA的表达,采用免疫组级化学方法检测DNMT1蛋白的表达情况。结果正常组织和胃癌组织中均表达DNMT1 mRNA,胃癌组织中的相对含量为0.76±0.11,显著高于正常组织的0.45±0.14(P<0.05)。高、中分化胃癌组织中的DNMT1 mRNA相对含量为0.58±0.14,显著低于低、未分化胃癌组织的0.94±0.16(P<0.05)。不同性别、有无淋巴结转移、不同临床分期、不同肿瘤大小的胃癌组织间DNMT1 mRNA相对含量的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。胃癌组织的DNMT1蛋白的表达程度显著高于正常组织(x^2= 7.760,P<0.01)。细胞分化程度低的癌组织DNMT1蛋白表达程度显著高于分化程度高的癌组织(x^2=4.500,P<0.05)。不同性别、有无淋巴结转移、不同临床分期、不同肿瘤大小的胃癌组织间DNMT1蛋白表达程度的差异均无统计学意义(x^2=0.09、1.270、1.830、0.30,P值均>0.05)。结论DNMT1的高表达是胃癌发生过程中的早期分子事件,是胃癌早期诊断及治疗的重要靶点。

结直肠癌组织中DNA甲基转移酶-1和钠氢交换子调节因子1的表达、临床意义及相关性

目的探讨结直肠癌组织中DNA甲基转移酶-1(DNMT1)和钠氢交换子调节因子1(NHERF1)的表达、临床意义及相关性。方法选取2017年2月~2018年2月河北北方学院附属第一医院手术切除的结直肠癌(癌组)和癌旁正常组织(正常组)各50例,应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测两组DNMT1 mRNA和NHERF1 mRNA的表达,应用免疫组化(IHC)法检测两组DNMT1和NHERF1蛋白的表达,同时收集患者的临床资料,分析二者的表达与临床病理特征间的关系,应用Spearman检验分析两种蛋白间的相关性。结果qRT-PCR法结果显示:癌组中DNMT1 mRNA的表达水平明显高于正常组,而癌组中NHERF1 mRNA的表达水平则明显低于正常组,差异均有高度统计学意义(均P<0.01);IHC法结果显示:癌组中DNMT1蛋白阳性表达率明显高于正常组,而癌组中NHERF1蛋白阳性表达率明显低于正常组,差异均有高度统计学意义(均P<0.01);癌组中DNMT1和NHERF1蛋白的表达水平均与病变浸润程度、TNM分期、淋巴结转移及肝转移有关(均P<0.05),而与性别、年龄、肿瘤大小和分化程度无关(均P>0.05);Spearman相关分析显示:癌组织中DNMT1与NHERF1呈负相关(r=-0.491,P<0.01)。结论DNMT1高表达和NHERF1低表达在结直肠癌的发生、发展中发挥重要作用,二者均可作为结直肠癌早期诊断和治疗监测的潜在分子生物学指标。

DNA甲基转移酶1在卵巢癌中的表达意义及其作用机制

目的探讨DNA甲基转移酶1在卵巢癌中的表达意义及其作用机制。方法收集手术切除的31例卵巢癌患者新鲜手术标本,采用免疫组化方法检测15例正常卵巢组织及31例卵巢癌组织中DNMT1的表达水平。结果DNMTl在卵巢癌组织中的表达明显高于正常卵巢组织。临床期别越高、病理级别越高以及伴随远处转移的卵巢癌组织中DNMT1的阳性率越高。在SKOV3细胞中,转染DNMT1 siRNA敲低DNMT1后,表明DNMT1蛋白水平明显下降,CCK8实验结果证实敲低DNMT1后SKOV3的增殖能力下降,Transwell小室实验结果提示敲低DNMT1后SKOV3迁移能力下降。结论DNA甲基转移酶1在卵巢癌组织中的表达阳性率增高,且与卵巢癌临床期别、病理级别以及伴随远处转移有一定的相关性,可促进卵巢癌细胞增殖,影响癌症进展。

乳腺癌组织中TIMP-3及DNMT1的表达与患者预后的相关性

目的:分析研究乳腺癌患者中基质金属蛋白酶组织抑制因子3(TIMP-3)及DNA甲基转移酶1(DNMT1)的表达水平与患者临床预后的相关性。方法:收集58例临床资料完整的乳腺癌手术切除标本,采用免疫组化SP法检测癌组织及相应癌旁组织中TIMP-3、DNMT1、ER、PR、HER-2、p53、Ki-67的表达,将TIMP-3、DNMT1表达水平与临床病理参数及随访生存状况进行相关性分析,所有入组患者均进行随访5年以上。结果:我们发现,在乳腺癌组织中,TIMP-3呈低表达,DNMT1呈高表达,TIMP-3及DNMT1的表达呈负相关;TIMP-3表达水平与Ki-67呈负相关,DNMT1表达水平与Ki-67呈正相关,与其他临床病理参数未见相关性。Cox风险比例模型分析显示只有临床分期和DNMT1表达水平是影响总生存期(OS)和无病生存期(DFS)的独立风险因素。TIMP-3低表达组的5年OS和DFS均显著低于高表达组,DNMT1高表达组的5年OS和DFS均显著低于低表达组。结论:研究表明乳腺癌中TIMP-3及DNMT1表达水平与肿瘤细胞恶性表型及患者生存时间有关,可能成为判断乳腺癌预后的一项重要指标,并作为治疗计划制定的依据。

DNA甲基转移酶1的表达对小鼠精原干细胞分化的影响

目的:探讨DNA甲基转移酶1(DNMT1)的表达对小鼠精原干细胞(SSC)分化的影响。方法:采用两步酶消化法从1周龄BALB/c雄性小鼠睾丸组织中分离获取SSC,将DNMT1-siRNA、siRNA阴性对照(NC-siRNA)转染入分离纯化后第三代SSC,分别命名为DNMT1-Si组、DNMT1-NC组,另取未转染细胞命名为对照组;采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western印迹检测转染24 h后各组DNMT1 mRNA和蛋白表达水平,并检测转染后细胞基因组甲基化水平。干细胞生长因子诱导SSC向精母细胞方向分化,采用RT-qPCR法和Western印迹检测诱导分化48 h生殖细胞增殖相关蛋白(Nanos2)、早幼粒细胞白血病锌指蛋白(PLZF)、维甲酸刺激蛋白(Stra8)mRNA和蛋白表达水平。结果:转染24 h后,DNMT1-Si组DNMT1 mRNA(0.13±0.03)和蛋白相对表达量(0.44±0.08)、DNA甲基化水平[(14.16±2.62)%]均低于对照组[0.94±0.08、1.21±0.11、(27.15±3.54)%]和DNMT1-NC组[0.93±0.09、1.19±0.10、(26.85±3.55)%,P<0.05],对照组与DNMT1-NC组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。分化48 h后,与对照组和DNMT1-NC组比较,DNMT1-Si组Nanos2、PLZF mRNA和蛋白相对表达量降低,Stra8 mRNA和蛋白相对表达量升高(P<0.05);对照组与DNMT1-NC组Nanos2、PLZF、Stra8 mRNA和蛋白相对表达量比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:敲低DNMT1可促进小鼠SSC向精母细胞方向分化,其机制可能与降低基因组甲基化水平,抑制Nanos2、PLZF表达,促进Stra8表达有关。