单细胞凝胶电泳法测定三种化合物对石棉DNA链断裂效应的抑制作用

为了探讨３种化合物对温石棉致人胚肺（ＨＥＬ）细胞ＤＮＡ链断裂的影响，用不同浓度的柠檬酸铝、混合稀土或亚硒酸钠溶液浸泡温石棉１ｈ后，再将其与ＨＥＬ细胞共同孵育，利用单细胞凝胶电泳技术，测定了ＨＥＬ细胞的ＤＮＡ链断裂程度．结果显示，温石棉可致ＨＥＬ细胞ＤＮＡ链断裂，并呈明显的剂量反应关系（ｒ＝０．９９２，Ｐ＜０．０１），其中８０μｇ／ｍＬ石棉所致ＤＮＡ链断裂为对照组的７倍．与未处理温石棉组相比，经３种化合物预处理的温石棉所致ＨＥＬ细胞ＤＮＡ链断裂均明显减少，其中用等量柠檬酸铝、混合稀土或亚硒酸钠处理过的石棉，其所致ＤＮＡ链断裂分别降低了３８．３％、６１．５％、３０．１％，这表明，用上述３种化合物预处理温石棉，有可能减轻温石棉对人类的致癌危害性．

金属有机配合物对DNA的断链作用

过渡金属配合物催化DNA、RNA的断链反应研究是近年来最为活跃的前沿研究领域之一,因某些金属配合物具有核酸酶特异性催化DNA、RNA断链的功能,因而该研究对新型抗肿瘤、抗艾滋病化学药物的定向设计及其基因治疗和分子生物学研究中DNA、RNA的高度专一性定点断裂、染色体图谱分析及DNA定位诱变、基因工程中足迹技术(footprinting)以及DNA构象识别等方面均具有重要意义和应用前景,文献已报道了一些具有断裂DNA、RNA功能的金属配合物,但其中很少有含金属-碳σ键的金属有机化合物,本文首次报道了二茂铁鎓离子三氯乙酸盐和二氯二茂钛对DNA的断链作用。 1 实验部分 二茂铁鎓离子三氯乙酸盐(FcT)和二氯二茂钛(TDC)的制备方法同前文,质粒pBR322DNA、琼脂糖凝胶(高强度DNA级,进口分装)、Tris(进口分装)均购自北京华美生物工程公司,溴化乙锭(EB)为Fluka产品,其余试剂为分析纯。 电泳系统为北京六一仪器厂产品,以TAE(0.04 mol/L Tris-乙酸,0.001 mol/L EDTA,pH=8.0)为电泳缓冲液,电泳后在0.5μg/mL EB中染色0.5h,然后在紫外检测仪(上海顾材光电仪器厂)下用带红色滤光片的照相机拍照。 2 结果与讨论 琼脂糖凝胶电泳是研究DNA分子构象及断链的重要手段。

老年大鼠细胞核内DNA断链的检测方法

本文报道一种血液淋巴细胞核内DNA主链断裂相对测定法的应用及其有关原理。基本过程是用碱性液对载片上的细胞核DNA进行解旋,然后用吖啶橙染色,用显微荧光分光光度法测定核内DNA主链断裂的相对量。本法原则上也适用于其他真核细胞。由于所用的材料极省,每次实验每组只需测定10～30个细胞,故对老年医学临床研究相当有利。在应用中我们对前人的方法作了部分修改。

53BP1与DNA双链断裂损伤修复

DNA的精确复制和遗传对维持基因组稳定性有重要作用。DNA双链断裂损伤可能诱导细胞凋亡和染色质重排,在肿瘤的发生发展过程中发挥作用。53BP1是DNA双链断裂修复中的重要调节蛋白质之一,对调控损伤修复平衡和维持基因组稳定性起着重要作用。本文主要对53BP1的结构、生物学功能、信号通路、分子机制和翻译后修饰做一浅显的总结和展望,希望能为53BP1的深入研究提供一些理论基础。

胸腺嘧啶碱基与羟基自由基反应的密度泛函理论

羟基自由基(·OH)进攻嘧啶碱基是破坏核酸造成DNA断链损伤的重要原因之一.采用密度泛函(DFT)理论中B3LYP方法在6—31G基组水平上对胸腺嘧啶(thymine,简写为"T")受羟基自由基进攻形成的各种可能产物自由基进行几何全优化.根据总能量、键长和自旋密度的计算结果,从理论上确认了C＿5位加成机制.得稳定产物自由基T5OH·,且T5OH·不易脱水与N＿3位H脱水得一个更稳定的产物自由基.该稳定自由基的形成造成DNA断链损.