DNA错配修复基因甲基化在H446细胞获得性耐药中的作用

目的探讨DNA错配修复基因MLH1(human MutL homolog1)、MSH2(human MutS homolog2)甲基化在人小细胞肺癌H446细胞获得性耐药中的作用。方法RT-PCR及Western blot法检测H446细胞及其多药耐药细胞H446/DDP中MLH1、MSH2基因的mRNA表达和蛋白表达,甲基化特异性PCR(MSP)法检测MLH1、MSH2基因启动子CpG岛甲基化状态。结果H446/DDP细胞中MLH1、MSH2基因的mRNA及蛋白水平均较H446细胞显著降低(P<0.01),且其启动子甲基化程度明显增强。结论DNA错配修复基因MLH1、MSH2启动子甲基化诱导其表达下调可能是人小细胞肺癌获得性耐药的重要机制之一。

DNA错配修复与癌症的发生及治疗

DNA错配修复是细胞复制后的一种修复机制,具有维持DNA复制保真度,控制基因变异的作用。DNA错配修复缺陷使整个基因组不稳定,最终会导致肿瘤和癌症的发生。DNA错配修复系统不仅通过矫正在DNA重组和复制过程中产生的碱基错配而保持基因组的稳定,而且通过诱导DNA损伤细胞的凋亡而消除由突变细胞生长形成的癌变。错配修复缺陷细胞的抗药性也引起了癌症化疗研究方面的关注。大多数情况下,错配修复健全型细胞对肿瘤化疗药物敏感,而错配修复缺陷细胞却有较高的抗性。DNA错配修复系统通过修复和诱导细胞凋亡维护基因组稳定的功能,显示了错配修复途径在癌症生物学和分子医学中的重要性。

DNA错配修复蛋白缺失与Ⅱ、Ⅲ期结肠癌根治术后复发转移及预后的关系

目的探讨DNA错配修复蛋白(MMR)缺失与Ⅱ、Ⅲ期结肠癌根治术后复发转移及预后的关系。方法采用免疫组织化学法检测294例结肠癌患者手术标本的MMR表达,回顾性分析其表达对结肠癌患者临床病理参数及生存率的影响。结果多因素分析结果显示,肿瘤部位、分化程度和分期是影响MMR表达状态的独立性危险因素(P<0.05);单因素结果显示,年龄、分化程度、T和N分期是影响患者复发转移率、总体生存率的危险因素;仅有N分期是影响患者复发转移率的独立性危险因素;仅有肿瘤分化程度、N分期和MMR缺失是影响患者总体生存率的独立性危险因素。220例DNA错配修复缺陷蛋白完整(pMMR)患者中,69例出现复发转移(31.4%),48例死亡(21.8%);74例DNA错配修复蛋白缺失(dMMR)患者中,13例出现复发转移(17.6%),9例死亡(12.2%)。两组患者的无病生存率(P=0.034)、总体生存率(P=0.047)差异均具有统计学意义。结论肿瘤部位、分化程度和分期与MMR表达状态密切相关;MMR表达缺失患者预后明显较差,可作为判断患者预后的一个潜在标志物。

DNA错配修复基因mutS的高效表达及表达产物活性鉴定

将DNA错配修复基因mutS(2 5 6kb)克隆于分泌型原核表达载体pET32a(+)上 ,以N端融合 6个组氨酸的形式在E .coliAD494(DE3)中进行了IPTG诱导表达。SDS PAGE分析证实有一与预期分子量相应的诱导表达条带 ,其表达量占全菌蛋白质的 35 %左右 ,且表达蛋白以可溶形式存在。利用固定化金属离子 (Ni2 +)配体亲和层析柱纯化目的蛋白 ,其纯度为 90 %以上。与含有错配碱基DNA双链的结合反应证明该蛋白具有特异性识别。

DNA错配修复基因与肿瘤研究新进展

DNA错配修复 (mismatchrepair,MMR)基因对维持基因组的稳定性有重要作用 ,MMR基因突变与肿瘤的发生、发展关系密切。近年来 ,MMR基因在肿瘤组织中的作用成为研究热点 ,本文就其新进展作一简要综述。

结直肠癌DNA错配修复蛋白的表达及临床病理学意义

目的探讨错配修复蛋白在结直肠癌中的表达及临床病理学意义。方法采用免疫组织化学法,对55例结直肠癌组织标本进行MLH1、MSH2、MSH6、PMS2四种错配修复蛋白检测,同时观察其与临床病理学参数关系。采用real-time PCR法对其中10例进行鼠类肉瘤病毒癌基因(KRAS)第2号外显子和鼠类肉瘤滤过性毒菌致癌基因同源体B1(BRAF)基因第15号外显子突变检测。结果 55例患者中50例四种蛋白均阳性表达,为微卫星稳定(MSS),5例患者蛋白表达有缺失,提示为高频微卫星不稳定(MSI-H),缺失率为9.09%,其中4例MLH1、PMS2联合缺失,1例MSH2、MSH6联合缺失;MSI-H患者肿瘤多发生在右半结肠,与MSS患者相比差异显著(P=0.01),其中3例为黏液癌或伴黏液分化癌,均无淋巴结转移;10例行KRAS及BRAF突变检测的病例中,6例存在KRAS基因突变,1例存在BRAF基因突变且表现为MLH1、PMS2表达联合缺失。结论 MSI-H结直肠癌患者多发生在右半结肠,这类患者有以黏液癌或伴有黏液分化癌多见及淋巴结转移少见为特征的趋势;MSI-H与MSS患者相比,在年龄、性别、肿块大小、肿瘤分级及分期方面无显著差异;发现散发性结直肠癌中具有微卫星不稳定的病例,结合其他检测可进一步指导临床用药,为新的治疗方案提供理论依据。

DNA错配修复系统组成和功能的研究进展

DNA错配修复(Mismateh repair,MMR)系统广泛的存在于从原核到真核的生物体中,是进化上保守的生化通路。MMR系统由一系列特异性修复DNA碱基错配的酶分子(错配修复基因产物)组成。细胞由于此系统的存在使DNA复制保持忠实性,从而保持遗传物质的完整性和稳定性,避免遗传物质发生突变。MMR系统基因的失活会导致自发突变率的明显增加,从而导致微卫星不稳定(MSI),可能引发某些肿瘤发生。近年来,MMR系统的研究越来越受到学者的重视,对MMR作用机制及组成该系统的几种酶蛋白结构与功能方面的研究不断深入,加深了对MMR系统的理解。这些为MMR系统相关的应用研究,尤其是为肿瘤发生奠定了理论的基础。本文重点讨论了错配修复系统的蛋白组成、各蛋白的功能及它们如何相互协调发挥作用的最新研究进展。

前列腺癌中DNA错配修复基因PMS2与MSH6的表达及临床意义

目的观察前列腺癌中DNA错配修复基因(MMR)PMS2和MSH6的表达及意义。方法采用免疫组化SP法检测40例前列腺癌癌组织及癌旁组织中MMR蛋白的表达情况。结果 PMS2和MSH6在前列腺癌中的阳性率分别为77.5%和85%,在癌旁组织中的阳性率分别为47.5%和37.5%;两组比较PMS2和MSH6的表达差异显著(P<0.01)。前列腺癌组织中PMS2的表达与患者血清PSA,肿瘤临床分期和Gleason评分存在相关性(P<0.01)。结论 MSH6和PMS2的高表达可能与前列腺癌的发生有关,且PMS2可能与前列腺癌的侵袭、转移有密切关系。

人源DNA错配修复基因和微卫星不稳定与老年结肠癌的相关性

目的探讨老年结肠癌患者肿瘤组织的人源DNA错配修复基因(h MLH)1和微卫星不稳定性型情况。方法通过甲基化特异性聚合酶链反应(PCR)检测老年结肠癌样本中基因h MLH1启动子甲基化修饰的异常;研究结肠癌样本中微卫星标志物杂合型丢失频率;确定结肠癌患者中的变异与结肠癌的相关性。结果 18.0%的老年结肠癌样本中出现h MLH1启动子高甲基化;51.2%出现微卫星标记D22S280或D22S929的杂合型缺失,25.6%出现D22S280和D22S929的杂合型缺失,并且杂合型缺失与基因h MLH1启动子高甲基化状态相互独立。基因h MLH1启动子甲基化可作为独立的变量预测肿瘤的预后。结论根据h MLH1启动子甲基化状态对高甲基化状态结肠癌进行分类,基因h MLH1可作为微卫星不稳定型老年结肠癌潜在预后标志物之一。

DNA错配修复基因hMLH1与肿瘤及化疗耐药相关性的研究进展

DNA是生命活动最重要的遗传物质。DNA复制产生的误差(碱基错配)是一种重要的损伤。若DNA损伤得不到修复,将会导致基因的突变,其中一部分突变有利于物种的进化,而另一部分将导致细胞恶化和死亡。DNA错配修复系统(mismatch repair system,MMR)是人体细胞中存在的一种能识别并修复DNA碱基错配的安全保障系统。到目前为止,已从人体细胞中共分离克隆到9种MMR基因。hMLH1基因是一系列DNA错配修复基因中最重要的一种,也是MMR系统的重要成分,其甲基化可导致MMR缺陷。近年来的研究发现,hMLH1的失活与肿瘤发生发展有关,并可能因此导致肿瘤对某些抗肿瘤药物耐药。

缺氧对人小细胞肺癌H446细胞DNA错配修复基因MLH1、MSH2表达的影响及其机制探讨

背景与目的:缺氧对DNA错配修复系统(mismatch repair,MMR)活性的调控是肿瘤细胞遗传不稳定的重要原因,但其机制尚不完全清楚。本研究拟观察缺氧状态下人小细胞肺癌H446细胞DNA错配修复基因MLH1、MSH2的表达变化,初步探讨DNA甲基化在其中的作用。方法:应用RT-PCR、Western blot等方法检测H446细胞在缺氧状态下以及甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)处理后MLH1、MSH2基因的表达水平,同时,采用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测MLH1、MSH2基因启动子CpG岛甲基化状态。结果:缺氧状态下,H446细胞MLH1、MSH2基因在转录和翻译水平均显著性降低。同时,随着缺氧时间延长,MLH1基因启动子逐渐由非甲基化状态、部分甲基化状态转变为完全甲基化状态,而MSH2基因启动子则直接由非甲基化状态转变为完全甲基化状态。甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR可使MLH1、MSH2基因表达水平有所恢复,但去除5-Aza-CdR后其表达再次下调。结论:启动子甲基化可能是缺氧诱导H446细胞显著性下调MLH1、MSH2基因表达的重要机制,甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR可恢复其表达。

子宫内膜癌DNA错配修复基因hMLH_1表达的研究

目的:探讨DNA错配修复基因hMLH1的表达与子宫内膜癌的关系。方法:选取1981年1月至2001年12月在天津医科大学总医院住院手术子宫内膜癌104例和正常子宫内膜35例(其中增生期17例,分泌期18例)及子宫内膜不典型增生8例,用免疫组化SABC法检测组织中hMLH1基因蛋白产物的表达,并对hMLH1蛋白表达与子宫内膜癌临床病理特征的关系进行了分析。结果:子宫内膜癌、子宫内膜不典型增生、正常子宫内膜增生期和分泌期hMLH1表达缺失率分别为64.4%、37.5%、11.8%和5.6%。子宫内膜癌组织中hMLH1的表达缺失率明显高于正常子宫内膜组织(P=0.0001);子宫内膜样腺癌、腺癌伴鳞状上皮分化、透明细胞癌和浆液性癌hMLH1表达缺失率分别为68.9%、50%、25%和0,在子宫内膜样腺癌中hMLH1基因表达缺失率明显高于其他组织学类型(P=0.02,P=0.003)。hMLH1基因表达缺失者5年生存率明显高于阳性表达者(P=0.012),遗传性子宫内膜癌、非特异肿瘤聚集性子宫内膜癌及散发性子宫内膜癌hMLH1蛋白表达缺失率分别为100%、94.1%及55%,遗传性及非特异肿瘤聚集性子宫内膜癌hMLH1基因表达缺失率明显高于散发性子宫内膜癌(P=0.02,P=0.003)。结论:hMLH1基因表达缺失与子宫内膜癌和子宫内膜不典型增生发生有关。hMLH1基因表达缺失与子宫内膜癌组织学类型中的子宫内膜样腺癌有关,hMLH1基因表达缺失者预后较好,且在遗传性子宫内膜癌患者中表达缺失率明显高于散发病例。

DNA错配修复蛋白hMLH1在大肠癌组织中的表达及其与大肠癌分化的关系

目的:了解错配修复蛋白hMLH1在大肠癌组织中的表达及其与大肠癌分化的关系。方法:应用SP免疫组织化学法对65例大肠癌组织病理切片进行免疫组化分析。结果:大肠癌旁正常组织hMLH1的表达阳性率为80%,明显高于癌组织hMLH1的表达阳性率46.2%(P<0.01);高分化、中分化和低分化大肠癌组织中hMLH1的表达率分别为68.2%、44.1%和22.2%,高分化大肠癌与低分化大肠癌之间hMLH1的表达存在显著性差异(0.01<P<0.05),但高分化大肠癌与中分化大肠癌、中分化大肠癌与低分化大肠癌之间hMLH1的表达无显著性差异(P>0.05)。结论:hMLH1表达水平与大肠癌的发生及分化相关,大肠癌分化程度越低,hMLH1表达水平越低。

DNA错配修复系统缺陷在结肠癌中的研究进展

结肠癌在其多阶段演变过程中涉及多种基因。约85％的结肠癌由染色体不稳定（chromosomalinsta-bility，CIN）引起，另有约15％的结肠癌则由DNA错配修复（mismatchrepair，MMR）基因缺陷所致，其中遗传性非息肉性结直肠癌（hereditarynonpolypo—siscolorectalcancer，HNPCC）占3％～5％，而散发性结肠癌占10％～15％。

LncRNA C2-AS1通过DNA错配修复相关通路抑制卵巢癌研究

目的检测卵巢癌组织中长链非编码RNA(lncRNA)C2-AS1的表达水平,探究其临床意义。方法收集2015年1月至2017年12月在宝鸡市妇幼保健院手术切除的卵巢癌标本,共23例。使用二代测序技术RNA-seq,检测23对肿瘤与癌旁配对样本,寻找肿瘤与癌旁组织差异表达基因,从中分离lncRNA,分析其与卵巢癌的关系,通过检索TCGA数据库进行验证。结果 lncRNA C2-AS1是肿瘤组织内前50位差异表达基因中唯一一个lncRNA,呈低表达水平(signal to noise>0.3,P<0.001)。LncRNA C2-AS1相关基因富集于DNA错配修复通路。低表达lncRNA C2-AS1导致较差的卵巢癌预后(Log rank P<0.05)。结论 lncRNA C2-AS1可能通过影响卵巢癌DNA错配修复过程影响卵巢癌预后,有望成为临床治疗和评估预后的新靶点。

DNA错配修复和临床肿瘤新进展

DNA复制是一个严谨有序的过程,细胞分裂时,碱基错配的概率约为1/1010～1/109。错配修复系统(MMR)是一个从细菌到真核细胞皆保守的DNA修复途径,它负责修复DNA中错配的碱基,或者DNA聚合酶的校对功能失调而引起的复制错误,插入,遗失碱基,使DNA整体复制的保真度增加50～1 000倍。MMR系统失控会导致DNA序列中微卫星序列的不稳定性(MSI)或编码功能蛋白的基因突变,改变正常细胞功能,从而引发肿瘤。

DNA错配修复基因MSH2和MLH1单核苷酸多态性与食管癌发生风险相关性研究

目的:探讨DNA错配修复基因MSH2和MLH1单核苷酸多态性对于食管癌易感性的潜在作用。方法:采用医院为基础的病例-对照研究方法,应用PCR-RFLP检测包括正常对照132例,食管癌患者169例MSH2c.2063T>G和MLH1IVS14-19A>G两个基因多态性位点的基因型。通过Logistic回归分析计算出比值比(OR)和95%置信区间(95%CI),估计不同基因型频率分布与食管癌发生风险的关系。结果:MSH2c.2063T>G携带突变等位基因个体发生食管癌的风险是非携带者的3.24倍。MLH1IVS14-19A>G突变等位基因携带者发生食管癌风险是非携带者的1.58倍。对MSH2和MLH1基因交互作用分析发现两突变基因型携带者发生食管癌风险大大增加并具有显著的统计学意义。结论:DNA错配修复基因MSH2c.2063G突变等位基因和MLH1IVS14-19G突变等位基因可能在促成食管癌发生过程起到一定作用。

子宫内膜癌组织中DNA错配修复基因表达及意义

目的:探究在子宫内膜癌组织中DNA错配修复基因(MMR)的表达情况及其意义。方法:选取2017年1月—2018年12月本院收治的子宫内膜癌患者50例作为内膜癌组,其中包括疑似Lynch内膜癌患者8例,以同期20例内膜癌非典型增生患者作为增生组和子宫内膜正常患者20例作为正常组,比较MMR蛋白在各组中的不同表达情况。结果:三组MMR蛋白表达缺失率分别为36.00%、30.00%和0%,内膜癌组和增生组表达缺失率显著高于正常组(P<0.05);疑似Lynch内膜癌与其他内膜癌患者相比、≤45岁与≥60岁的患者相比,其MMR蛋白表达的缺失率显著较高(P<0.05),内膜癌患者的病理分级则与MMR蛋白的表达无明显相关性(P>0.05);50例内膜癌患者的hMLH1、hMSH2、hPMS2以及hMSH6的表达缺失率分别为24.00%(12/50)、10.00%(5/50)、20.00%(10/50)和8.00%(4/50)。结论:MMR蛋白表达的缺失会导致子宫内膜非典型增生以及内膜癌,特别是低龄内膜癌的出现和进一步发展。

Ⅱ～Ⅲ期结肠癌患者DNA错配修复状态与其临床特征及预后的关系

目的分析Ⅱ~Ⅲ期结肠癌患者DNA错配修复(MMR)的状态与患者临床特征及预后的相关性。方法选取2007年1月至2010年6月我院肿瘤内科收治的308例行肿瘤根治术Ⅱ~Ⅲ期结肠癌患者的组织标本,以免疫组织化学法检测MLH1、MSH2、MSH6、PMS2的表达,将其结果分为MMR缺失(d MMR)组及MMR完整(p MMR)组,比较两组患者的临床特征及预后,并采用Cox比例风险模型分析MMR状态与结肠癌预后的相关性。结果本组结肠癌d MMR的发生率为20.8%(64/308),p MMR为79.2%(244/308)。d MMR组患者中,年龄≤60岁、Ⅱ期、低分化癌、近端结肠癌及含黏液分泌癌患者的比例较p MMR组显著增高,差异均有统计学意义(P<0.05)。d MMR组患者的复发转移率及病死率分别为18.8%(12/64)、12.5%(8/64),明显低于p MMR组的31.6%(77/244)、23.0%(56/244),差异均有统计学意义(P<0.05);d MMR组患者的5年无病生存率及5年总生存率分别为82.8%(53/64)、87.5%(56/64),明显高于p MMR组的69.3%(169/244)、77.0%(188/244),差异均有统计学意义(P<0.05)。经Cox比例风险模型分析结果提示,结肠癌MMR状态是影响患者无病生存时间及总生存时间的一个独立因素(P<0.05)。结论结肠癌不同MMR状态有着不同的临床特征,dMMR更多发生在年龄≤60岁、Ⅱ期、低分化癌、近端结肠癌及含黏液分泌癌的患者中,其可作为预测结肠癌预后较好的一个标志物。

DNA错配修复酶hMSH2缺陷细胞株的建立

目的 建立并鉴定DNA错配修复酶hMSH2缺陷细胞株 ,用于研究hMSH2基因的作用机制及其缺陷与肿瘤发生的关系。方法 运用基因工程的方法获得hMSH2cDNA片段 ,并反向克隆到绿色荧光蛋白真核表达载体pEGFP-C1上 ,随后将构建好的hMSH2反义RNA绿色荧光蛋白真核表达载体转染入人胚肺成纤维细胞 (HLF) ,使之在HLF中表达 ,用蛋白免疫印迹法鉴定转染细胞中hMSH2基因的表达水平。结果 构建了hMSH2反义RNA绿色荧光蛋白真核表达载体 ,并在真核细胞成功表达 ;hMSH2酶缺陷细胞株hMSH2基因的蛋白表达水平下降了 4 4 %。结论 hMSH2缺陷细胞株的成功建立和鉴定为hMSH2基因功能研究提供了一种有效手段。