DNA-多肽复合分子的设计、组装与应用

DNA-多肽复合分子作为一类新型的自组装分子受到研究人员的广泛关注。DNA分子具有可编程性、高特异性、功能多样等优点,多肽分子是一类重要的生物小分子,能够通过分子自组装形成具有不同结构的纳米材料,因此,将二者通过共价交联,可以获得具有多级自组装行为的DNA-多肽复合分子,能够实现两类重要生物分子功能的集成优化,合成具有不同结构与功能的超分子自组装材料。此外,通过酶催化、DNA杂化、DNA链置换反应等,还可实现对多肽-DNA复合分子自组装行为的动态调控,进而模拟生命系统中复杂动态的自组装结构,强化相关材料在生物、化学、材料等领域的应用。本文讨论了DNA-多肽复合分子的设计、组装与应用方面的最新进展,最后基于目前DNA-多肽复合分子存在的一些问题对DNA-多肽复合分子的研究做了展望。

复合酶法制备植物小分子肽的研究

以大豆蛋白、花生蛋白为原料进行合理配比后,采用动态超高压均质预处理,再采用复配酶(木瓜蛋白酶与胰蛋白酶)和复合风味蛋白酶进行两步复合酶解。结果显示,超高压均质后,酶解度可提高2%～3%。最优条件为:超高压均质压力为60MPa;木瓜蛋白酶和胰蛋白酶按1:1复配,复配酶水解温度60℃,pH6.5,酶用量250U/g,底物浓度5%;复合风味酶水解温度55℃,pH6.0,酶用量200U/g。高效液相凝胶色谱法测定纯化后的小分子肽,分析表明分子量主要集中在3000Da以下。

TCRαβ分子识别抗原肽-MHC复合物的争议问题探讨

T细胞抗原受体（TCR）是T细胞表面的特征性标志分子，其与CD3分子组成的TCR．CD3复合体，是进行抗原识别，发挥细胞免疫重要功能的基础。一般认为．TCR必须识别抗原肽一MHC分子复合物才能活化T细胞，

虾壳源多肽酶解条件的优化及其抗冻活性和作用机制的探究

目的优化从虾壳中提取多肽的酶解条件,并探究虾壳多肽的抗冻活性及作用机制。方法以小龙虾虾壳为原料,使用复合酶酶解提取多肽。在单因素实验的基础上,通过正交实验得到虾壳最佳酶解条件。以面包酵母菌为抗冻测试对象测试其抗冻能力。采用液相色谱-串联质谱法(liquid chromatography-mass spectrometry,LC-MS/MS)对虾壳多肽的组成进行鉴定,基于多肽的理化性质和序列,结合抗冻预测平台筛选抗冻肽(antifreeze peptides,AFPs)。使用分子动力学模拟探究了AFPs的作用机制。结果在酶解温度40℃,底物质量浓度20mg/mL,加酶量12000U,酶比0.33的最佳酶解条件下,多肽提取率达到了70%以上。虾壳多肽中含有1004种肽段,能明显提升酵母菌存活率。从具有抗冻活性且置信度靠前的20条多肽中进一步筛选出了潜在的抗冻肽AFP1、AFP2。AFP2和冰面之间形成的氢键数量为14,部分水分子同时与2个氨基酸残基形成氢键,充当水桥稳定多肽的构象,AFP2与冰之间的结合能为-105.08 kcal/mol,冰结合模拟效果理想。结论AFPs与冰结合并抑制冰晶生长可能归因于带电荷的亲水性氨基酸残基与水分子形成的氢键、范德华力等分子间作用力,可开发为有益的冷冻保护剂,用于冷冻食品加工,具备良好的应用前景。

小牛类表皮生长因子活性肽的高分子复合物质

小牛颌下腺通过中性抽提，硫酸按沉淀，ＣＭ５２和ＤＥ５２负吸附，ＳｏｐｈａｄｃＸＧ７５凝胶过滤得到一个具有类表皮生长因子活性的大分子多肽，该分子可在ＰＨ７．习，ＤＥ５２层析盐梯度洗脱分开成２７ＫＤ无活性的结合蛋白和６ＫＤ的具有表皮生长因子活性小肽。通过计算，该大分子为结合蛋白和类表皮生长因子活性肽１：１结合的三聚体，大分子复合物比类表皮生长因子小肽显示更高的生物活性。

壳聚糖/羧甲基纤维素钠负载苦瓜小分子多肽复合物的制备及其复合效果的表征

以壳聚糖盐酸盐(CSC)和羧甲基纤维素钠(CMC)为壁材,采用离子凝胶法制备苦瓜小分子多肽复合物,并对其制备工艺和特性进行研究。结果显示,复合物的最佳制备工艺为CSC浓度5.35 mg·mL-1,CMC浓度1.60mg·mL-1,包埋时间33.10min,此时包埋率可达到69.98%。红外光谱和X-射线衍射分析结果表明,芯材和壁材产生了离子交联作用,苦瓜小分子多肽被成功包埋在CSC/CMC复合壁材中。扫描电镜显示复合物表面疏松多孔,呈不规则形状。所制得的复合物在胃肠液中具有较好缓释特性,在室温下贮藏30 d后仍具有较强的DPPH自由基清除能力。

基于“多肽-电化学探针”超分子复合物的蛋白质检测通用策略

作为输出新的型方蛋法白十质分靶有向限配体。南,多京肽大在学蛋李白根质喜检课测题中组已利获用得＂应多用肽,-电然化而学目探前针以＂多超肽分作子为复识合别物元,件设实计现了信一号种具有通用性的信号输出方法 （Anal.Chem.dx.doi.org/10.1021/ac302906c）,

复合酶制备鳕鱼皮梯级胶原肽的初步研究

利用酶工程技术,以鳕鱼皮作为研究对象,研究开发鳕鱼皮梯级胶原肽制品。选取胰蛋白酶和碱性蛋白酶作为试验用酶,通过正交试验方法确定最适水解条件,胰蛋白酶:加酶量2.5%、温度45℃、pH6.5、时间4h;碱性蛋白酶:加酶量4%、温度50℃、pH8.0、时间3h。复合酶解的最适条件为:胰蛋白酶和碱性蛋白酶混合水解,加酶量分别为2.5%和4%、温度50℃、pH8.0、时间4h,蛋白质水解度26.1%。分离得到两多肽组分UF-1和UF-2,分子量(Mr)范围分别为:UF-1:2000u<Mr<6000u;UF-2:Mr<2000u,其中UF-2的含量最高为83.32%。用高效液相色谱分析水解产物相对分子量分布,确定复合酶解产物为蛋白胶原肽和游离氨基酸,其相对分子质量集中分布在1350u和145u左右。

可溶性PD-1协同HSP70-肽复合物抑制荷瘤小鼠肝癌的研究

目的 :研究基因转染和表达的可溶性PD 1(solubleprogrammeddeath 1,sPD 1)对HSP70 肽疫苗抗肿瘤效果的影响及协同机制。方法 :以HSP70 肽疫苗免疫BALB/c小鼠后 ,用半定量RT PCR技术检测和分析HSP70 肽疫苗对小鼠脾细胞上PD 1及其配体基因表达的影响。体内转染表达sPD 1,用MTT比色法检测HSP70 肽疫苗免疫小鼠对肿瘤生长的抑制作用以及脾淋巴细胞的细胞毒活性。结果 :单独的sPD 1就有抗肿瘤效应。HSP70 肽疫苗不仅能预先在动物体内诱导肿瘤特异性的CTL ,而且可使脾细胞上抑制性共刺激受体PD 1及其配体的表达显著升高。用sPD 1与HSP70 肽疫苗联合治疗荷瘤小鼠 ,能提高脾CTL的杀伤效率并延长HSP70 肽疫苗的免疫效果。结论 :sPD 1可通过阻断PD 1与其配体的结合作用 ,及减弱PD 1的负反馈抑制作用 ,而增强HSP70

B7-1B7-H1相对比例变化对Hsp70-肽复合物抗肿瘤免疫效应的影响

目的 :探讨Hsp70-肽复合物对B7-1 B7-H1相对比例的影响及真核表达可溶性PD-1(sPD-1)对Hsp70-肽复合物抗肿瘤作用的影响。方法 :通过RT-PCR和半定量PCR技术检测Hsp70 肽复合物体外刺激和体内免疫对小鼠脾细胞正调控共刺激分子B7-1和抑制性共刺激分子B7-H1及其受体PD-1表达的影响 ;体内转染表达sPD-1后 ,观察Hsp70-肽复合物免疫小鼠的肿瘤生长以及脾淋巴细胞毒性的变化。结果 :基因表达检测表明 ,Hsp70- 肽复合物体外刺激的小鼠脾细胞B7-1mRNA和B7-H1mRNA的水平随时间而变化 ,B7-1/B7-H1比值随刺激时间而增高 ;Hsp70-肽复合物体内免疫小鼠后期脾细胞B7-1表达下降 ,B7-H1及其受体PD-1表达上调 ,B7-1/B7 H1比值逆转 ;体内表达sPD-1可显著增强和延长Hsp70 肽复合物的抑瘤效果 ;体内表达sPD-1可提高Hsp70-肽复合物免疫的荷瘤小鼠脾细胞的杀伤率。结论 :Hsp70-肽复合物的刺激引起共刺激分子B7-1和B7-H1表达的变化 ,B7-1/B7-H1的比例与激活效应相关 ,sPD-1通过阻抑B7-H1/PD-1途径、上调B7-1/B7-H1比例 ,可增强免疫应答 ,提高Hsp70

识别免疫复合物的纳米肽研究进展

小分子危害物在食品中残留是重要的食品安全问题之一,现有的方法主要采用竞争免疫分析的模式检测食品中的小分子危害物。与竞争免疫分析技术相比,非竞争免疫分析技术具有灵敏度高的优势。但小分子危害物由于分子量小,只有一个抗原结合位点,无法直接构建非竞争免疫分析模式。纳米肽是近年来兴起的可识别免疫复合物的识别分子,可用于构建识别小分子危害物的非竞争检测模式。就识别免疫复合物的纳米肽制备技术及基于纳米肽的检测技术研究进展进行综述。

榄香烯复合瘤苗冲激的树突状细胞的功能研究

大多数树突状细胞(Dendritic cell,DC)来源于骨髓.在小鼠、大鼠及人的骨髓中均含有许多DC前体细胞,经体外培养能生成具有典型形态、表型及功能的非成熟的DC,抗原能使非成熟的DC转变为成熟的DC,成熟DC能表达高水平多肽-MHC复合物及共刺激分子CD86(B7-2)及CD40等,能分泌TH1型细胞因子(IL-12),能有效地将抗原提呈给初始型T细胞并使之激活.

vIL-10对鼻咽癌细胞株MHC-1类分子抗原加工提呈“操纵子”表达的影响

目的研究病毒白介素-10(vIL-10)对鼻咽癌细胞株MHC-1类分子抗原加工提呈"操纵子"表达的影响。方法收集不同时间段vIL-10处理的鼻咽癌细胞(CNE-1和CNE-2),采用RT-PCR、Western blot方法检测vIL-10处理的鼻咽癌细胞中MHC-1类分子抗原加工提呈"操纵子"(TAP-1、2,LMP-2、7及HLA-I)表达的变化。结果1mRNA水平:CNE-1和CNE-2的TAP-1水平在不同时间点均未表现出显著差异;vIL-10作用1、4、6、12h时,CNE-1和CNE-2的TAP-2、LMP-2均未出现变化,24h时,两者均出现显著下降甚至消失;CNE-1在vIL-10作用后4h即出现LMP-7下降,而CNE-2在vIL-10作用后6h出现下降;在vIL-10作用24h时CNE-1和CNE-2的HLA-I出现显著下降。2蛋白水平:vIL-10作用后24h时,两种细胞的TAP-1均出现显著下降,TAP-2则在vIL-10作用后1、6、12、24h出现逐渐下降;CNE-2的LMP-2、LMP-7在vIL-10作用后随时间逐渐下降,而CNE-1的两种蛋白仅在作用后12h出现显著下降;HLA-I在vIL-10作用后出现下降趋势,但在CNE-1中各时间段变化无统计学差异,CNE-2在24h显著下降。结论 vIL-10可明显抑制鼻咽癌MHC-I类分子抗原加工和提呈的"操纵子"的表达,并且呈一定的时间依赖性。

MHCⅠ类分子在内质网中的组装研究进展

MHCI类分子在内质网中组装形成肽 MHC复合体。抗原肽主要来自于胞内蛋白 ,在蛋白酶体作用下形成的 8～ 10个氨基酸小肽。内质网中的多个伴侣分子与I类分子相互作用形成肽组装复合体。这些伴侣分子对于Ⅰ类分子的有效组装以及配体的选择均有重要作用。

流行性出血热病毒抗原及其免疫复合物在发病机理中的作用

流行性出血热(EHF)是一种严重危害我国劳动人民身体健康的急性传染病,但至今其发病机理尚未完全阐明。

长鳍金枪鱼鱼皮胶原蛋白肽制备工艺的研究

以长鳍金枪鱼鱼皮为原料,采用碱热复合酶三步水解法制备胶原蛋白多肽。以水解度、氮回收率和水解产物分子量为指标,通过单因素和多因素正交设计试验,确定最佳酶解条件。结果表明：碱处理为第一步,鱼皮经过0.1 mol/L Ca（OH）2反复清洗数次,最后清水冲洗干净;热处理为第二步,鱼皮于水浴锅中90℃处理30 min;酶解为第三步,梯度加入碱性蛋白酶、中性蛋白酶和风味酶,酶解的最佳工艺条件为：复合酶料比1∶200（g/g）,料水比1∶2.5（g/m L）,酶解温度55℃,p H为9.0～6.5,酶解总时间为4 h,水解度平均能达到30%,酶解液脱色的最佳条件为,活性炭添加量2%,自然pH,温度70℃,时间30 min,经过浓缩喷雾干燥后的胶原蛋白粉末经过HPLC分析,得到分子量在3 kD以下的多肽占到85%以上。

混料设计优化花生粕制备呈味基料复合酶配比

为花生饼粕制备花生呈味基料提供一种高效复合酶,以蛋白回收率、水解度和滋味稀释倍数为评价指标,运用最优混料试验设计优化风味蛋白酶、碱性蛋白酶和复合蛋白酶的组合,经构建回归模型确定最佳复合酶组成。结果表明:复配酶最佳组合为风味蛋白酶:碱性蛋白酶:复合蛋白酶=0.721:0.149:0.129,该组合能明显提高呈味基料的生产效率 蛋白回收率为(81.95%±2.69%)、水解度为(52.79%±2.04%)、滋味稀释倍数为(53.80±1.67)。验证实验证实,模型预测值与实验值相符,模型成立。经凝胶渗透色谱法测定,分子量小于1000 Da的水解产物占(96.84%±0.83%),且小于180 Da的含量为(63.63%±2.85%),这表明该呈味基料为短肽与氨基酸的混合物。最佳酶配比制备的酶解液作为一种呈味基料,具有良好的食品工业应用前景。

胸腺五肽对黑色素瘤细胞诱导的肿瘤浸润树突状细胞激活作用观察

目的观察胸腺五肽(TP5)对黑色素瘤细胞诱导的肿瘤浸润树突状细胞(TIDCs)的激活作用。方法将对数生长期的黑色素瘤细胞株B16在无血清培养基中培养24 h,收集上清即B16细胞条件培养基;从BALB/c小鼠股骨中收集细胞悬液,加入IL-4、重组鼠粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和50%B16细胞条件培养基诱导培养,倒置相差显微镜拍照鉴定TIDCs。分别将0、10、20、40μmol/L的TP5加入TIDCs中,记为0μmol/L组、10μmol/L组、20μmol/L组、40μmol/L组,37℃共同孵育48 h,分离出TIDCs细胞和上清液。取收集到的TIDCs细胞,加入荧光标记的CD11c、CD86及MHCⅡ抗体,用流式细胞仪检测TIDCs表面成熟标记分子CD11c、CD86、MHCⅡ。取TIDCs细胞上清液,按ELISA试剂盒说明书测定IL-2和IL-10。向TIDCs细胞培养皿中加入FITC标记的1μg/m L的TP5溶液200μL,激光共聚焦显微镜下观察TP5与TIDCs的结合情况。结果倒置相差显微镜低倍镜下可见细胞聚集成集落的细胞群,呈半贴壁状态;高倍镜下可见细胞已经呈现典型的树突状形态,有的细胞出现短的出芽状突起,有的细胞已经出现长长的突起,提示TIDCs诱导培养成功。与0μmol/L组相比,40μmol/L组TIDCs中CD11c、CD86、MHCⅡ、IL-12的表达量升高(P均<0. 05),IL-10的表达量降低(P <0. 05);与10μmol/L组和20μmol/L组相比,40μmol/L组TIDCs中CD86、IL-12的表达量升高(P均<0. 05)。激光共聚焦显微镜下可见,TIDCs的细胞核呈椭圆形,FITC标记的TP5分布在细胞核周围,提示TP5结合在TIDCs的细胞膜上及胞浆中。结论 TP5可促进TIDCs表面成熟标志分子CD11c、CD86及MHCⅡ的表达,促进TIDCs分泌IL-12及抑制IL-10的分泌,表明TP5能够激活免疫活性受抑制的TIDCs的抗原递呈功能。