气态甲醛致小白鼠肝脏DNA-DNA交联的研究

为了探讨气态甲醛致生物体内DNADNA交联效应,进一步评价甲醛的遗传毒性作用,以昆明纯系小鼠为实验材料,进行了72h动态吸入式连续染毒,采用荧光检测法检测甲醛染毒后小鼠肝细胞DNADNA交联形成的效应.实验结果表明,0.5mg·m-3的气态甲醛能引起明显的DNADNA交联(p<0.05),较高浓度的甲醛(1.0mg·m-3、3.0mg·m-3,p<0.01)可以产生极为明显的DNADNA交联作用.以上实验结果显示了0.5mg·m-3的气态甲醛就能致生物体内DNADNA交联效应,且随着浓度的升高DNADNA交联率越高.

《整形手术用交联透明质酸钠凝胶》行业标准中交联剂含量的检测方法研究

目的改进和优化YY/T 0962—2014《整形手术用交联透明质酸钠凝胶》行业标准中交联剂1,4-丁二醇二缩水甘油醚(1,4-butanediol diglycidyl ether,BDDE)含量的标准检测方法,为该标准的修订提供技术依据。方法在气相色谱法中,为使BDDE更好地从凝胶内部释放出来,在测定之前增加样品的酶解处理步骤,并用乙酸乙酯对BDDE进行萃取。此外,在酶标仪检测法中研究透明质酸酶的影响,将透明质酸酶添加到标准溶液中,从而去除透明质酸酶对测定结果的影响。最后委托M、Q、X三家实验室对该方法进行验证,对同一批次样品进行BDDE含量测定,对数据结果进行双因子方差分析,以检验该方法是否具有可行性。结果气相法专属性、精密度以及重复性良好,平均回收率为105.02%,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为9.15%(n=6)。酶标仪检测法精密度、重复性良好,BDDE浓度0.5~8μg/mL范围内,BDDE浓度和荧光强度有良好的线性关系,线性方程为y=36.89x+2.135(r=0.9989),检出限为0.106μg/mL,平均回收率为97.43%,RSD为8.22%;采用双因子方差分析,对M、Q和本课题组(Z)三家实验室的验证结果进行统计(P>0.05),认为不同实验室采用同一方法对同批次样品的交联剂含量测定结果不存在显著性差异。结论对于整形手术用交联透明质酸钠凝胶中交联剂BDDE含量的测定,气相法操作简单快捷,可作为BDDE的日常测定方法;酶标仪检测法特异性更高,数据更为真实精确,可作为整形手术用交联透明质酸钠凝胶产品中交联剂含量的仲裁方法。

苯并芘对褐菖鲉肝细胞DNA交联的影响

以褐菖鲉(Sebastiscus marmoratus)为实验材料,设定苯并芘[B(a)P]的注射剂量梯度分别为0.00、0.05、0.50、5.00 mg/kg,分别于实验的第0、3、6天对每一条鱼进行腹腔注射,于第1、4、7天取样,测定胆汁中的B(a)P及其代谢物含量.采用荧光检测法检测B(a)P染毒后褐菖鲉肝细胞DNA-DNA交联(DDC)交联系数的变化,并用KC l-SDS沉淀法检测DNA蛋-白质交联(DPC)交联系数的变化.结果表明:(1)经注射染毒后鱼体胆汁中的B(a)P及其代谢物含量蓄积程度存在着明显的剂量效应和时间效应;(2)B(a)P的注射剂量分别为0.05、0.50 mg/kg时各时间点褐菖鲉肝细胞DDC交联系数均无显著增大(p>0.05),在5.00 mg/kg剂量组,随着时间延长DDC交联系数逐渐增大,第4天即有显著差异(p<0.05),第7天差异极显著(p<0.01);(3)B(a)P诱导DPC的趋势与DDC类似,但0.5 mg/kg剂量组在第7天DPC交联系数即出现显著增大(p<0.05).这表明B(a)P对DPC的诱导高于DDC.这为进一步研究B(a)P的遗传毒性提供了依据,并为探讨B(a)P致癌的作用机理提供了新的信息.

比较碱性彗星试验与γ-H2AX法评价甲醛诱导的DNA交联

DNA交联是环境诱变剂和化学致癌物诱发的遗传物质损伤之一,主要包括DNA-蛋白质交联(DNA-protein crosslink,DPC)和DNA-DNA交联(DNA-DNA crosslink,DDC)两类^[1]。DNA交联的形成可导致DNA复制过程中重要基因的丢失,从而造成染色体缺失、重排、转位、倒置等染色体结构和数目的畸变,对子代细胞的遗传物质产生影响,严重时可导致肿瘤或子代畸形^[2]。DNA交联与断裂相比难于修复或易于形成错误修复,且在细胞周期中可维持较长一段时间。故世界卫生组织(WHO)提出DNA交联可作为DNA损伤的生物标志物,用于对化合物或环境因素的潜在遗传毒性进行筛查^[3]。常见的可导致DNA交联的药物或因素包括甲醛、顺铂、环磷酰胺、丝裂霉素、油烟、氧化型染发剂、电离辐射等。

不同浓度甲醛致小鼠肾细胞DNA损伤效应研究

为了探讨甲醛导致生物机体内的DNA损伤效应及其剂量-效应关系,通过不同浓度的液态甲醛对小鼠肾细胞进行染毒,并分别运用了单细胞凝胶电泳实验、荧光检测法实验和KCl-SDS沉淀法实验进行研究.结果显示,甲醛在低浓度(5μmo·lL-1)时,具有致DNA断裂的作用;在中等浓度(25μmo·lL-1)时,对DNA的损伤作用以DNA-DNA交联为主;在高浓度(125、625μmo·lL-1)时,对DNA的损伤作用以DNA-蛋白质交联为主.

甲苯二异氰酸酯致中国仓鼠肺细胞DNA交联作用

目的研究甲苯二异氰酸酯(TDI)诱导中国仓鼠肺细胞(CHL)DNA的交联作用,探讨TDI的遗传毒性。方法在培养的CHL细胞中分别加入浓度为0.64,1.28,2.56μmol/mL的TDI进行染毒,用荧光分光光度法检测细胞内的DNA-DNA交联水平,用氯化钾-十二烷基硫酸钠(KCl-SDS)沉淀法检测细胞内的DNA-蛋白质交联水平。结果低浓度的TDI不能致DNA-DNA交联(DDC)和DNA-蛋白质交联(DPC)(P>0.05);随着染毒浓度的增加,其DDC率和DPC率也随之升高,高剂量组的DDC为54.97%(P<0.01),DPC为29.06%(P<0.0)。结论一定剂量的TDI能诱导细胞内DNA交联作用。