颅脑损伤术后颅脑感染血清NLRP3、SAA及NFκB的临床意义

目的探讨血清寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、淀粉样蛋白A(SAA)及核转录因子(NFκB)在颅脑损伤术后颅脑感染中的诊断价值。方法选择2020年6月至2022年6月江苏省如皋市人民医院接诊的70例颅脑损伤患者为研究对象,根据感染情况将感染者设为感染组(n=19),未感染者设为对照组(n=51),分析血清NLRP3、SAA及NFκB在颅脑损伤术后颅脑感染中的诊断价值。结果感染组患者血清NLRP3、SAA及NFκB水平显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);NLRP3、SAA及NFκB水平:轻度感染<中度感染<重度感染,差异有统计学意义(P<0.05);预后不良组患者血清NLRP3、SAA及NFκB水平显著高于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05);ROC结果显示,血清NLRP3预测颅脑损伤术后颅脑感染的AUC为0.634,灵敏度为63.43%,特异度为67.40%,截断值为114.02 pg/mL;血清SAA预测颅脑损伤术后颅脑感染的AUC为0.715,灵敏度73.50%,特异度为69.00%,截断值为30.99 mg/L;血清NFκB预测颅脑损伤术后颅脑感染的AUC为0.914,灵敏度为81.40%,特异度为70.00%,截断值为38.27μg/mL,联合检测较单独检测特异度、准确度更高(P<0.05)。结论血清NLRP3、SAA及NFκB在颅脑损伤术后颅脑感染患者中均异常高表达,且三指标联合检测颅脑损伤术后颅脑感染诊断效能更高,临床应用价值高。

附子理中汤联合骨髓间充质干细胞调控变应性鼻炎大鼠鼻黏膜T-bet和GATA3 mRNA表达的研究

目的研究附子理中汤联合骨髓间充质干细胞(MSCs)对变应性鼻炎大鼠鼻黏膜T盒转录因子(T-bet)、锌指蛋白3(GATA3)mRNA表达的影响。方法将40只雄性SD大鼠随机分为5组,每组8只。对照组大鼠不造模、不干预;模型组、MSCs组、附子理中汤组、附子理中汤+MSCs组大鼠均进行变应性鼻炎造模,其中模型组造模后不治疗,MSCs组造模后给予骨髓MSCs尾静脉注射1次,附子理中汤组造模后给予附子理中汤连续灌胃14 d,附子理中汤+MSCs组造模后给予骨髓MSCs尾静脉注射1次和附子理中汤连续灌胃14 d。比较各组大鼠干预前后的行为学积分;干预结束后ELISA法检测鼻腔灌洗液中白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-13(IL-13)、干扰素-γ(IFN-γ)水平,qRT-PCR法检测鼻黏膜组织中T-bet和GATA3 mRNA表达情况。结果MSCs组、附子理中汤组和附子理中汤+MSCs组大鼠干预后行为学积分均明显低于干预前及模型组(P均<0.05),且附子理中汤+MSCs组大鼠干预后行为学积分均明显低于MSCs组和附子理中汤组(P均<0.05)。与对照组比较,模型组大鼠鼻腔灌洗液中IL-4、IL-13水平和鼻黏膜组织中GATA3 mRNA相对表达量均明显升高(P均<0.05),鼻腔灌洗液中IFN-γ水平和鼻黏膜组织中T-bet mRNA相对表达量均明显降低(P均<0.05)。与模型组比较,MSCs组、附子理中汤组和附子理中汤+MSCs组大鼠鼻腔灌洗液中IL-4、IL-13水平和鼻黏膜组织中GATA3 mRNA相对表达量均明显降低(P均<0.05),附子理中汤组和附子理中汤+MSCs组大鼠鼻腔灌洗液中IFN-γ水平和鼻黏膜组织中T-bet mRNA相对表达量均明显升高(P均<0.05),MSCs组大鼠鼻腔灌洗液中IFN-γ水平和鼻黏膜组织中T-bet mRNA相对表达量均无明显变化(P均>0.05);且附子理中汤+MSCs组大鼠鼻腔灌洗液中IL-4、IL-13水平和鼻黏膜组织中GATA3 mRNA相对表达量均明显低于MSCs组(P均<0.05),鼻腔灌洗液中IFN-γ水平和鼻黏膜组织中T-bet mRNA相对表达量均明显高于MSCs组(P均<0.05)。结论附子理中汤联合骨髓MSCs能上调T-bet mRNA和下调GATA3 mRNA表达,进而调节Th1/Th2细胞的平衡,抑制炎症反应,改善变应性鼻炎症状。

冠心病患者血清环磷酸腺苷反应元件结合蛋白调节转录辅激活因子3及氧化应激指标与颈动脉粥样硬化的相关性

目的探讨冠心病患者血清环磷酸腺苷反应元件结合蛋白调节转录辅激活因子3(CRTC3)及氧化应激指标与颈动脉粥样硬化的相关性。方法选取2021年6月—2023年6月本院收治的154例冠心病患者为研究组,根据颈动脉粥样硬化程度分为轻度硬化组、中度硬化组和重度硬化组;另选取154例同期健康体检者为对照组。采用Pearson法分析血清CRTC3及氧化应激指标与颈动脉粥样硬化指标的相关性。结果研究组血清CRTC3、丙二醛(MDA)、颈动脉斑块面积和中层内膜厚度(IMT)高于或大于对照组,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。轻度硬化组、中度硬化组和重度硬化组血清CRTC3、MDA、颈动脉斑块面积和IMT依次升高或增大,SOD、GSH-Px水平依次降低,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,血清CRTC3、MDA水平与颈动脉斑块面积、IMT呈正相关(P<0.05),SOD、GSH-Px与颈动脉斑块面积、IMT呈负相关(P<0.05)。受试者工作特征(ROC)曲线显示,CRTC3、SOD、MDA和GSH-Px联合诊断重度颈动脉粥样硬化的曲线下面积(AUC)为0.990(95%CI:0.982~0.998),灵敏度为96.27%,特异度为76.28%。4项指标联合诊断的价值高于各指标单独诊断,差异有统计学意义(Z_(联合-CRTC3)=2.723,Z_(联合-SOD)=2.698,Z_(联合-MDA)=2.673,Z_(联合-GSH-Px)=2.803,P均<0.05)。结论冠心病患者血清CRTC3、MDA水平显著升高,SOD、GSH-Px水平显著降低;血清CRTC3、氧化应激水平均与颈动脉粥样硬化密切相关。

m6A甲基转移酶METTL3通过β‐arrestin 1/p65调控结肠癌细胞增殖

目的探讨m6A甲基转移酶METTL3通过β-arrestin 1/p65在结肠癌细胞中的作用机制。方法使用结肠癌细胞系HCT116,应用荧光定量PCR、Western blot测定结肠癌细胞中METTL3、β-arrestin 1及增值蛋白PCNA、Cyclin D1及Cyclin E的表达水平;利用细胞转染及细胞克隆实验,观察METTL3、β-arres-tin1和p65在结肠癌细胞增殖中的作用。结果METTL3和β-arrestin 1在结肠癌细胞中表达升高(以actin作为内参基因,与正常对照组比较,P<0.05)。结肠癌细胞转染METTL3-shRNA后,转染组灰度(0.36±0.046)较对照组(1.27±0.14)明显减少(P=0.0004);与对照组克隆数(465±42)比较,转染组细胞增殖(85±37)明显减少(P<0.05);细胞增殖蛋白PCNA、Cyclin D1及Cyclin E的表达也明显减少(分别为P<0.01、0.05、0.01);结肠癌细胞中METTL3、β-arrestin 1和p-p65蛋白表达均增高(均为P<0.05)。随后HCT116细胞沉默MET-TL3的表达,发现细胞中β-arrestin 1、p-p65蛋白的表达明显下降(均为P<0.05)。结论METTL3影响结肠癌细胞的增殖可能通过β-arrestin 1/p65调控参与肿瘤的发生发展。

LncRNA MALAT1通过靶向miR-146a调节PI3K/Akt信号通路影响胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的 探究长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)肺腺癌转移相关转录子1(metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript 1,MALAT1)通过调节miR-146a对胃癌(gastric cancer, GC)细胞的增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。方法 收集GC组织和配对正常胃上皮组织,将GC细胞MNK-45分为空白对照(blank control, BC)组(未转染)、MALAT1 siRNA-NC组(转染MALAT1 siRNA-NC)、MALAT1 siRNA组(转染MALAT1 siRNA)、miR-146a mimics-NC组(转染miR-146a mimics-NC)、miR-146a mimics组(转染miR-146a mimics)、MALAT1 siRNA+miR-146a inhibitor-NC组(共转染MALAT1 siRNA+miR-146a inhibitor-NC)、MALAT1 siRNA+miR-146a inhibitor组(共转染MALAT1 siRNA+miR-146a inhibitor)。定量荧光PCR(qRT-PCR)检测胃组织或细胞中MALAT1、miR-146a表达量;CCK-8法和克隆形成实验检测细胞增殖能力;Transwell法检测细胞侵袭和迁移能力;RNA pull down实验、双荧光素酶报告实验分析MALAT1和miR-146a的结合情况;Western blot检测磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase, PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)通路蛋白及c-Myc、基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP9)蛋白表达量。结果 转染MALAT1 siRNA可明显降低MNK-45细胞的MALAT1表达量,敲低MALAT1或过表达miR-146a可降低细胞活力、克隆能力、迁移和侵袭,增加miR-146a表达,降低PI3Kp85α、PI3Kp85β、c-Myc、MMP9蛋白表达量及p-Akt/Akt水平;MALAT1可结合并靶向下调miR-146a表达;低表达miR-146a可逆转敲低MALAT1对MNK-45细胞增殖、迁移和侵袭的抑制效应。结论 MALAT1可能作为ceRNA吸附并降解miR-146a,敲低MALAT1可上调miR-146a表达,并通过PI3K/Akt通路抑制GC细胞增殖、迁移和侵袭。

YTH结构域家族蛋白2和叉头蛋白转录因子3在肺腺癌中的表达关系研究

目的 分析YTH结构域家族蛋白2(YTHDF2)及叉头蛋白转录因子3(FOXO3)在肺腺癌病人中的表达及与预后的关系。方法 收集2020年1月至2021年5月在郑州大学第一附属医院行手术治疗的肺腺癌病人癌组织及对应的癌旁组织(距离癌组织5 cm以上)80对,收集病人临床病理资料;利用癌症基因组图谱(TCGA)数据库查询YTHDF2、FOXO3基因在肺腺癌中的表达水平;采用免疫组织化学法检测YTHDF2、FOXO3蛋白在肺腺癌组织中的表达情况;分析YTHDF2、FOXO3蛋白水平与肺腺癌病人临床病理资料的关系;分析肺腺癌中YTHDF2与FOXO3基因表达水平的相关性;对病人进行为期3年的随访,分析病人3年累积生存率。结果 YTHDF2、FOXO3蛋白在肺腺癌组织中的高表达率分别为34.00%、26.00%,明显低于癌旁正常组织中79.48%、61.54%(P<0.05)。YTHDF2蛋白表达情况与肺腺癌病人年龄、淋巴结转移和分化程度相关(P<0.05);与TNM分期、性别无关(P>0.05);FOXO3蛋白表达情况与肺腺癌病人性别和分化程度相关(P<0.05);肺腺癌组织中YTHDF2蛋白高表达组和低表达组病人3年累积生存率分别为53.30%、14.00%,经log-rank比较,差异有统计学意义(P<0.05);FOXO3蛋白高表达组和低表达组病人3年累积生存率分别为64.50%、12.20%,经Log-Rank比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 YTHDF2、FOXO3在肺腺癌组织中均低表达,与病人肿瘤分化程度及3年累积生存率有关,有望成为评估肺腺癌病人预后的生物标志物。

川崎病合并支原体感染病儿瓣膜炎性损伤与IL-6/STAT3信号通路表达变化的关系分析

目的探讨川崎病(KD)合并支原体感染病儿瓣膜炎性损伤与白细胞介素-6(IL-6)/信号转导及转录激活蛋白3(STAT3)信号通路表达变化的关系。方法前瞻性选取2018年1月至2022年12月安阳市妇幼保健院收治的50例KD合并肺炎支原体(MP)(KD-MP)感染病儿为感染组,另选取同期收治的106例单纯KD病儿为未感染组,比较感染组与未感染组病儿瓣膜炎性损伤情况。再根据KD病儿是否伴有冠状动脉损伤(CAL)损伤分为CAL组(n=84)、无CAL组(n=72),比较两组病儿IL-6和STAT3表达水平,通过多因素logistic回归分析KD病儿发生CAL的危险因素。比较KD并CAL不同预后病儿IL-6和STAT3表达变化,使用受试者操作特征曲线(ROC曲线)分析IL-6、STAT3水平对KD并CAL病儿预后的预测价值。结果感染组KD病儿发热时间、住院时间、初诊CAL发生率均高于未感染组(P<0.05);感染组KD病儿C反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)、红细胞沉降率(ESR)、IL-6 mRNA表达水平和STAT3 mRNA表达水平均高于未感染组[(51.32±12.62)mg/L比(36.58±10.98)mg/L,(1.33±0.35)μg/L比(1.21±0.31)μg/L,(84.69±15.66)mm/h比(49.62±16.43)mm/h,4.14±1.09比3.06±1.15,2.81±0.89比1.68±0.54,均P<0.05]。CAL组病儿IL-6、STAT3 mRNA表达水平高于无CAL组(4.13±1.22比2.56±0.87,2.46±0.71比1.55±0.44,均P<0.05);多因素回归分析结果显示,MP感染、IL-6 mRNA、STAT3 mRNA表达是KD病儿发生CAL的独立危险因素(均P<0.05)。KD并CAL预后良好组病儿IL-6、STAT3 mRNA表达水平低于预后不良组(3.57±1.06比4.57±1.13,1.94±0.58比2.87±0.87,均P<0.05),ROC曲线结果显示IL-6、STAT3及其联合预测KD并CAL预后的曲线下面积(AUC)分别为0.75、0.81、0.91,且联合检测的AUC高于IL-6、STAT3单独检测(均P<0.05)。结论KD合并MP病儿瓣膜炎性损伤更为严重,IL-6/STAT3信号通路活化是其危险因素,且该信号通路对KD并CAL病儿预后有较高的预测价值。

鸢尾素调节JAK2/STAT3信号通路对牙周炎大鼠牙周组织损伤的影响

目的:探讨鸢尾素调节Janus蛋白酪氨酸激酶2(Janus protein tyrosine kinase 2,JAK2)/信号转导和转录激活子3(Signal transduction and activator of transcription 3,STAT3)信号通路对牙周炎大鼠牙周组织损伤的影响。方法:通过结扎和接种牙龈卟啉单胞菌液建立牙周炎大鼠模型,将大鼠随机分为模型组、鸢尾素低(鸢尾素-L,50 mg/kg)、中(鸢尾素-M,100 mg/kg)、高剂量(鸢尾素-H,200 mg/kg)组、鸢尾素-H+激活剂(200 mg/kg鸢尾素+2 mg/kg香豆霉素)组,每组10只,并以注射等体积生理盐水的正常大鼠对照组。干预结束后,对大鼠牙龈出血指数、牙齿松动度评分;牙槽骨吸收、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素(Interleukin,IL)-6、IL-1β以及丙二醛(Malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)水平分别以Micro-CT试剂盒检测;HE检测牙周组织病理学变化;Western blot检测JAK2、STAT3、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达。结果:与对照组相比,模型组大鼠牙周组织被破坏,炎性浸润严重,牙龈出血指数、牙齿松动度评分、牙槽骨吸收、TNF-α、IL-6、IL-1β、MDA水平、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3表达显著增加,SOD水平显著降低(P<0.05);与模型组相比,不同剂量的鸢尾素组大鼠病理损伤得到改善,牙龈出血指数、牙齿松动度评分、牙槽骨吸收、TNF-α、IL-6、IL-1β、MDA水平、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3表达显著降低,SOD水平显著增加,具有剂量依赖性(P<0.05);与鸢尾素-H组相比,鸢尾素-H组+激活剂组大鼠病理损伤加重,大鼠牙龈出血指数、牙齿松动度评分、牙槽骨吸收、TNF-α、IL-6、IL-1β、MDA水平、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3表达显著增加,SOD水平显著降低(P<0.05)。结论:鸢尾素抑制牙周炎大鼠氧化应激、炎性反应,减轻大鼠牙周组织损伤,减少牙槽骨吸收,可能与抑制JAK2/STAT3信号通路有关。

中医药靶向调控IL-6/JAK/STAT3通路的抗消化系统肿瘤研究进展

就近年来白细胞介素6/非受体酪氨酸蛋白激酶/信号转导和转录激活因子3(interleukin-6/janus activated kinase/signal transducer and activator of transcription 3,IL-6/JAK/STAT3)信号通路在多种消化系统肿瘤中发挥的效应、中药单体及其活性成分、中药复方对与IL-6/JAK/STAT3信号通路调控有关的消化系统肿瘤中的防治作用进行综述,探究中医药在延缓、阻抑甚至逆转炎-癌转化中发挥的作用,为防治肿瘤提供更有力的理论指导。

新风胶囊通过抑制lncRNA HOTAIR/PI3K/AKT通路减轻RA-FLS诱导的HUVEC血管新生反应

目的探讨新风胶囊(XFC)含药血清对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(RA-FLS)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)血管新生的影响及其作用机制。方法建立RA-FLS与HUVEC共培养体外模型;SD大鼠灌胃制备XFC含药血清;CCK-8法筛选最佳共培养比例和XFC含药血清浓度;构建lncRNA HOTAIR过表达质粒(pcDNA3.1-lncRNA HOTAIR)及阴性对照组,转染至RA-FLS中。实验分为HUVEC对照组、模型组(HUVEC和RA-FLS共培养)、XFC组(200 mL/L XFC处理共培养RA-FLS)、HOTAIR阴性对照组(pcDNA3.1-NC转染共培养RA-FLS)、HOTAIR过表达组(pcDNA3.1-lncRNA HOTAIR转染共培养RA-FLS)、XFC处理的HOTAIR过表达组(200 mL/L XFC处理pcDNA3.1-lncRNA HOTAIR转染的共培养RA-FLS)。采用CCK-8法检测HUVEC增殖能力;Transwell TM法检测HUVEC迁移能力;小管形成实验检测HUVEC成管能力;流式细胞术检测HUVEC中CD34及CD105的表达;实时定量PCR检测HUVEC中lncRNA HOTAIR、miR-126-3p、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、PI3K受体2(PIK3R2)、AKT、血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)mRNA的表达;Western blot法和免疫荧光技术检测HUVEC中PI3K、AKT、p-AKT、VEGF、bFGF蛋白表达。结果CCK-8法结果显示,RA-FLS与HUVEC最佳处理比例和时间分别为5∶1和48 h,XFC的最佳干预浓度和时间分别为200 mL/L和48 h。与对照组相比,模型组HUVEC增殖、迁移、成管能力及CD34和CD105水平显著提高,lncRNA HOTAIR、PIK3R2、VEGF、bFGF、PI3K、AKT、p-AKT的表达明显上调,miR-126-3p显著下调;与模型组相比,XFC组HUVEC增殖、迁移、成管能力及CD34和CD105水平显著下降,lncRNA HOTAIR、PIK3R2、VEGF、bFGF、PI3K、AKT、p-AKT的表达明显下调,miR-126-3p显著上调;与HOTAIR阴性对照组相比,HOTAIR过表达组,HUVEC增殖、迁移、成管能力及CD34和CD105水平显著提高,lncRNA HOTAIR、PIK3R2、VEGF、bFGF、PI3K、AKT、p-AKT的表达明显上调,miR-126-3p显著下调;与HOTAIR过表达组相比,XFC处理的HOTAIR过表达组HUVEC增殖、迁移、成管能力及CD34和CD105水平显著下降,lncRNA HOTAIR、PIK3R2、VEGF、bFGF、PI3K、AKT、p-AKT的表达明显下调,miR-126-3p显著上调。结论XFC含药血清可能通过抑制lncRNA HOTAIR/PI3K/AKT通路的表达,降低VEGF、bFGF的表达水平,减轻关节滑膜血管新生而发挥治疗作用。

肝细胞癌患者血清PTPN3、VEGF、IRX5、HOTAIR的表达水平及其与病理特征和预后的相关性

目的检测血清蛋白质酪氨酸磷酸酶3(PTPN3)、血管内皮生长因子(VEGF)、易洛魁族同源盒基因5(IRX5)、长链非编码RNA HOX转录反义RNA(HOTAIR)在肝细胞癌(HCC)中的表达水平,并分析其与患者的病理特征和预后的相关性,为临床工作提供血清学参考。方法选取2020年6月至2022年10月南阳市中心医院收治的117例HCC患者作为观察组,另选取同期117例良性肝内结节患者作为对照组,比较两组患者的血清PTPN3、VEGF、IRX5、HOTAIR水平,分析HCC患者血清PTPN3、VEGF、IRX5、HOTAIR水平与病理特征的关系。随访6个月,依据患者预后情况分为预后良好组72例和预后不良组45例,比较不同预后患者的血清PTPN3、VEGF、IRX5、HOTAIR水平,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清PTPN3、VEGF、IRX5、HOTAIR单独及联合预测HCC预后的效能,采用相对危险度(RR)分析血清PTPN3、VEGF、IRX5、HOTAIR水平与HCC预后的关系。结果观察组患者的血清PTPN3、VEGF、IRX5、HOTAIR水平分别为(181.42±10.19)ng/mL、(154.66±11.82)μmol/L、(82.42±8.23)ng/mL、1.20±0.28,明显高于对照组的(86.64±13.28)ng/m L、(83.64±9.50)μmol/L、(34.80±6.63)ng/m L、1.07±0.25,差异均有统计学意义(P<0.05);不同TNM分期、分化程度、肿瘤直径、伴肝硬化、区域淋巴结转移、Ki-67指数、脉管内瘤栓、包膜侵犯HCC患者血清PTPN3、VEGF、IRX5、HOTAIR水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05);肿瘤多发患者的血清VEGF水平为(154.10±10.26)μmol/L,明显高于肿瘤单发患者的(191.62±9.45)μmol/L,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后2个月,预后良好患者的血清PTPN3、VEGF、IRX5、HOTAIR水平分别为(153.69±22.24)ng/m L、(113.27±25.64)μmol/L、(70.53±10.24)ng/m L、1.15±0.23,明显低于预后不良患者的(217.58±27.06)ng/m L、(215.33±38.19)μmol/L、(96.35±14.88)ng/m L、1.36±0.28,差异均有统计学意义(P<0.05);绘制血清PTPN3、VEGF、IRX5、HOTAIR单独及联合预测HCC预后的ROC,结果显示各血清联合预测的AUC最大,为0.924(95%CI:0.860~0.965);HCC预后不良的危险度分析结果显示,血清PTPN3、VEGF、IRX5、HOTAIR所致RR值分别为4.604(95%CI:2.602~8.145)、7.139(95%CI:3.660~13.924)、4.733(95%CI:2.749~8.149)、4.690(95%CI:2.575~8.544)(P<0.05)。结论血清PTPN3、VEGF、IRX5、HOTAIR在HCC中的表达异常升高,且与病理特征联系密切,对患者预后有一定评估作用。

盘状结构域受体1通过调控NF-κB/NLRP3信号通路介导的细胞焦亡对高糖诱导血管内皮功能障碍的影响

目的 探究盘状结构域受体1 (discoidin domain receptor 1,DDR1)对高糖诱导血管内皮细胞功能障碍的作用机制。方法 体外培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HU VECs),首先分为对照组(Control)、高糖诱导组(high glucose,HG),采用33 mmol·L^(-1) D-glucose处理48 h构建HUVECs功能障碍。碘化丙啶染色(PI)检测细胞焦亡情况;酶联免疫吸附法(ELISA)测定乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、IL-1β、IL-18水平;Western blot检测DDR1、NF-κB/NLRP3信号通路蛋白及细胞焦亡相关蛋白表达;随后,实验分为C ontrol组、HG组、HG+DDR1 NC组、HG+DDR1 siRNA组。转染DDR1 siRNA 24 h后观察HG对HUVECs增殖和迁移能力的影响;ELISA检测内皮型一氧化氮合成酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)、血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)、细胞间黏附分子-1 (intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)及LDH、IL-1β、IL-18水平;PI检测细胞焦亡情况;Western blot检测DDR1、NF-κB/NLRP3信号通路蛋白及细胞焦亡相关蛋白表达。结果 与Control组相比,HG组细胞eNOS含量降低,VCAM-1、ICAM-1含量升高,细胞活力及迁移能力降低,DDR1、p-NF-κB、NLRP3及细胞焦亡相关蛋白表达均明显升高,且LDH、IL-1β、IL-18水平及细胞焦亡率均增加(P<0.05)。与HG组相比,DDR1siRNA能够促进eNOS分泌,降低VCAM-1、ICAM-1、LDH、IL-1β、IL-18水平,增加细胞活力和迁移能力,降低p-NF-κB、NLRP3及细胞焦亡相关蛋白表达,抑制高糖诱导的HU VECs焦亡(P<0.05)。结论基因沉默DDR1能够改善高糖诱导的血管内皮细胞功能障碍,其机制与抑制NF-κB/NLRP3信号通路介导的细胞焦亡相关。

LAIR-1通过阻断JAK2 V617F突变的人HEL细胞JAK/STAT和PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制其增殖并促进其凋亡

目的研究人白细胞相关免疫球蛋白样受体1(LAIR-1)对Janus激酶2(JAK2)V617F突变的人急性髓系白血病HEL细胞JAK/信号转导子与转录激活子(STAT)和磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/AKT/mTOR)信号通路的调节作用,以及对细胞增殖和凋亡的影响。方法采用反转录PCR和基因测序鉴定JAK2 V617F突变;应用免疫共沉淀和Western blot法鉴定LAIR-1募集的蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP)种类;采用CCK-8法检测HEL细胞的增殖;采用异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双标记结合流式细胞术检测HEL细胞的凋亡率;采用Western blot法检测JAK/STAT和PI3K/AKT/mTOR通路蛋白酪氨酸磷酸化水平及细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、Bcl2相关X蛋白(BAX)和B细胞淋巴瘤因子2(Bcl2)的蛋白表达。结果在JAK2 V617F突变的HEL细胞中,LAIR-1与其配体胶原蛋白结合后可募集含Src同源域2磷酸酶2(SHP-2);LAIR-1可以下调HEL细胞JAK2、STAT1、STAT3、STAT5、AKT和mTOR的蛋白酪氨酸磷酸化水平,并能够显著抑制cyclin D1和Bcl2的表达,而对BAX的表达水平未见显著影响;LAIR-1能够明显抑制HEL细胞的增殖,促进HEL细胞凋亡。结论在JAK2 V617F突变的人白血病HEL细胞中,LAIR-1可通过募集SHP-2抑制JAK/STAT和PI3K/AKT/mTOR信号通路的活化,进而抑制HEL细胞的增殖,促进细胞凋亡。

隐丹参酮调节TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路对高糖诱导的心肌细胞焦亡的影响

目的:探讨隐丹参酮调节Toll样受体4/核转录因子κB/NOD样受体蛋白3(TLR4/NF-κB/NLRP3)信号通路对高糖诱导的心肌细胞焦亡的影响。方法:将H9c2细胞分为对照组(正常葡萄糖5.5 mmol/L)、高糖组(葡萄糖33 mmol/L)、2.5μmol/L隐丹参酮组(葡萄糖33 mmol/L+2.5μmol/L隐丹参酮)、5μmol/L隐丹参酮组(葡萄糖33 mmol/L+5μmol/L隐丹参酮)和脂多糖(LPS)组(葡萄糖33 mmol/L+5μmol/L隐丹参酮+1μg/mL TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路激活剂LPS),各组细胞培养在相应的培养基中48 h。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞存活率;2′,7′-二乙酰二氯荧光素(DCFH-DA)法检测细胞活性氧(ROS)水平;半胱氨酸天冬氨酸酶-1抑制剂(FLICA)-半胱氨酸天冬氨酸酶-1(Caspase-1)/碘化丙啶(PI)双染法检测细胞焦亡情况;酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-1β(IL-1β)水平;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测细胞GSDMD蛋白N端片段(GSDMD-N)、TLR4、NLRP3、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)、NF-κB p65、Cleaved Caspase-1、Caspase-1蛋白表达。结果:与对照组比较,高糖组H9c2细胞存活率下降(P<0.05),细胞ROS水平、焦亡细胞比例、细胞上清IL-1β和IL-18水平及细胞TLR4、NLRP3、p-NF-κB p65/NF-κB p65、GSDMD-N、Cleaved Caspase-1/Caspase-1蛋白表达升高(P<0.05);与高糖组比较,2.5μmol/L隐丹参酮组、5μmol/L隐丹参酮组H9c2细胞存活率升高(P<0.05),细胞ROS水平、焦亡细胞比例、细胞上清IL-1β和IL-18水平及细胞TLR4、NLRP3、p-NF-κB p65/NF-κB p65、GSDMD-N、Cleaved Caspase-1/Caspase-1蛋白表达降低(P<0.05)。TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路激活剂LPS可逆转隐丹参酮对高糖诱导细胞增殖和焦亡的抑制作用。结论:隐丹参酮可抑制TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路减轻高糖诱导的心肌细胞焦亡。

山姜素调控PI3K/Akt/NF-κB信号通路对冠心病大鼠心肌损伤的影响

目的:探讨山姜素调控磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路对冠心病(CHD)大鼠心肌损伤的影响。方法:选取健康成年SPF级SD雄性大鼠60只,随机分为空白组、模型组、山姜素小剂量组、山姜素中剂量组、山姜素高剂量组各12只,采用Western blot法检测大鼠PI3K/Akt/NF-κB信号通路蛋白表达,采用ELISA法检测大鼠炎症因子指标[肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-18(IL-18)]和氧化应激指标[活性氧(ROS)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)],观察并记录大鼠心肌损伤情况。结果:与空白组比较,模型组的心肌缺血和心肌梗死面积更大(P<0.05),与模型组比较,山姜素小、中、高剂量组的心肌缺血和心肌梗死面积均缩小(P<0.05),且高剂量组的心肌缺血和心肌梗死面积小于山姜素中、小剂量组,中剂量组心肌缺血和心肌梗死面积小于山姜素小剂量组(P<0.05)。与空白组比较,模型组的PI3K、Akt、NF-κB更高(P<0.05),与模型组比较,山姜素小、中、高剂量组的PI3K、Akt、NF-κB均升高(P<0.05),且高剂量组的PI3K、Akt、NF-κB高于山姜素中、小剂量组,中剂量组PI3K、Akt、NF-κB高于山姜素小剂量组(P<0.05)。与空白组比较,模型组的TNF-α、IL-1β、IL-18更高(P<0.05),与模型组比较,山姜素小、中、高剂量组的TNF-α、IL-1β、IL-18均降低(P<0.05),且山姜素高剂量组的TNF-α、IL-1β、IL-18低于中、小剂量组,山姜素中剂量组的TNF-α、IL-1β、IL-18低于山姜素小剂量组(P<0.05)。与空白组比较,模型组的ROS、GSH-Px、MDA更高(P<0.05),与模型组比较,山姜素小、中、高剂量组的ROS、GSH-Px、MDA均降低(P<0.05),且山姜素高剂量组ROS、GSH-Px、MDA低于山姜素中、小剂量组,山姜素中剂量组的ROS、GSH-Px、MDA低于山姜素小剂量组(P<0.05)。结论:山姜素可通过调控PI3K/Akt/NF-κB信号通路改善CHD大鼠心肌炎症和氧化应激状况,进而发挥心肌保护作用。

鼻咽癌组织中JAK2、STAT3表达及与其临床病理特征的相关性分析

目的分析Janus激酶2(JAK2)、信号传导和转录激活因子3(STAT3)在鼻咽癌组织内的表达及与其临床病理特征的关系。方法选取59例鼻咽癌患者,采集其癌组织与癌旁正常组织(距肿瘤组织边缘≥3 cm)分别纳入观察组与对照组,采用免疫组化法测定两组的JAK2、STAT3表达;另收集患者的年龄、性别等资料,分析JAK2、STAT3表达与其临床病理特征的关系。结果观察组JAK2、STAT3阳性表达率高于对照组,有统计学差异(P<0.05);JAK2、STAT3表达与鼻咽癌患者年龄、性别、吸烟史无关(P>0.05);与鼻咽癌临床分期、分化程度、淋巴结转移有关(P<0.05);JAK2、STAT3阳性表达患者的生存率低于JAK2、STAT3阴性表达患者,有统计学差异(P<0.05)。结论JAK2、STAT3在鼻咽癌组织内呈异常的高表达,两者与患者的临床分期、分化程度、淋巴结转移存在紧密联系,且其表达越高,患者生存率越低。

肾纤康通过调节Smad3介导的铁死亡缓解CKD小鼠肾纤维化

目的:观察肾纤康对单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)引起的小鼠肾间质纤维化的缓解效果,并探讨其作用机制。方法:将小鼠随机分为假手术组、模型组、低剂量(150 mg·kg^(−1)·d^(−1))肾纤康组和高剂量(450 mg·kg^(−1)·d^(−1))肾纤康组,每组8只。除假手术组外,其余各组均通过单侧输尿管结扎法建立慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)模型。造模后,分别给予相应剂量的肾纤康,假手术组和模型组则灌胃等体积生理盐水,每天1次,连续7 d。实验结束后,收集小鼠肾脏组织进行苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色和Masson染色,观察肾脏组织损伤和纤维化程度;利用免疫组化和Western blot技术检测肾脏中纤维化、氧化应激及铁死亡相关蛋白水平的变化;蛋白质免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)评估肾纤康对转录激活因子3(activating transcription factor 3,ATF3)与Smad3相互作用的影响。结果:在未经治疗的UUO模型组中,小鼠肾脏出现了如肾小管明显扩张和胶原沉积等典型的病理变化,肾纤康干预组病理改变程度和纤维化明显减轻(P<0.05)。在分子层面,肾纤康显著降低了UUO模型组小鼠中Smad3磷酸化水平,以及ATF3、4-羟基壬烯醛(4-hydroxynonenal,4-HNE)和NADPH氧化酶4(NADPH oxidase 4,NOX4)的异常表达,同时增加了谷胱甘肽过氧化酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)和溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11)表达。Co-IP实验结果表明,肾纤康显著影响了ATF3与Smad3的相互作用。结论:肾纤康有效缓解了UUO引起的小鼠肾间质纤维化,其潜在机制可能涉及对ATF3/Smad3相互作用的调节,进而减轻氧化应激和铁死亡,从而缓解肾脏纤维化。这些发现为肾纤康的进一步研究和临床应用提供了重要的科学依据。

核糖体蛋白L34和STAT3表达与宫颈癌临床病理特征及预后的关系

目的探讨核糖体蛋白L34(RPL34)和信号转导和转录激活因子3(STAT3)表达与宫颈癌临床病理特征及预后的关系。方法回顾性收集2019年1月至2022年6月台州市中心医院(台州学院附属医院)手术切除的30例宫颈癌和30例正常宫颈(对照)新鲜组织,以及2017年1月至2022年6月手术切除的76例宫颈癌和40例正常宫颈(对照)组织石蜡标本。采用qRT-PCR法检测新鲜组织中RPL34和STAT3 mRNA相对表达量,采用免疫组化法检测石蜡标本中RPL34和STAT3蛋白表达水平,分析RPL34和STAT3在不同临床病理特征宫颈癌患者中的表达差异,采用Spearman秩相关分析RPL34和STAT3表达的相关性,绘制Kaplan-Meier生存曲线分析RPL34和STAT3表达的预后意义。结果宫颈癌组织中RPL34 mRNA相对表达量和蛋白表达水平均显著低于对照组织(均P<0.01),STAT3 mRNA相对表达量和蛋白表达水平均显著高于对照组织(均P<0.01)。不同国际妇产科学联盟(FIGO)分期、浸润深度及淋巴结转移患者宫颈癌组织中RPL34表达水平比较,差异均有统计学意义(均P<0.01),不同FIGO分期、浸润深度、淋巴结转移及分化程度患者宫颈癌组织中STAT3表达水平比较,差异均有统计学意义(均P<0.01)。宫颈癌组织中RPL34表达和STAT3表达呈显著负相关(P<0.05)。与阴性组患者相比,RPL34阳性组患者术后3年总生存率显著升高(P<0.05),STAT3阳性组患者术后3年总生存率显著降低(P<0.05)。结论宫颈癌组织中RPL34 mRNA和蛋白呈低表达,STAT3 mRNA和蛋白呈高表达,RPL34和STAT3表达与宫颈癌的浸润深度、淋巴结转移等临床病理特征有关,并影响患者3年总生存率。RPL34和STAT3有望成为宫颈癌预后判断的标志物。

IL-6/JAK2/STAT3信号通路在电针调控胰岛素抵抗模型大鼠骨代谢中的作用

目的研究电针对胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)大鼠骨代谢及炎症状态的影响。方法8只大鼠按照随机数字表单列为空白组,另外32只大鼠给予高脂饲料喂养8周以建立IR大鼠模型,选取造模成功的24只大鼠,随机分为模型组、假电针组、电针组,每组8只,空白组、假电针组不做干预,电针组选取“中脘”“关元”、“足三里”、“丰隆”4穴进行电针治疗,假电针组选取上述4穴旁边的皮下后不进行电针治疗,各组均治疗8周。在治疗前后,测量各组大鼠的体质量(body mass,BM)、空腹血糖(fasting blood-glucose,FBG)及餐后血糖水平(postprandial blood-glucoser,PBG)、葡萄糖输注速率(glucose infusion rate,GIR);各组大鼠血清中Ⅰ型胶原氨基端前肽(N-terminal propeptide of typeⅠcollagen,P1NP)、β-Ⅰ型胶原C末端肽(C-terminal telopeptides of typeⅠcollagen,β-CTX)含量用酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测;大鼠骨组织的骨密度(bone mineral density,BMD)、骨体积分数(BV/TV)、骨小梁数量(trabecularNumber,Tb.N)和骨小梁分离度(trabecularSeparation/Spacing,Tb.Sp)采用微计算机断层扫描技术(micro CT)检测;骨组织中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、Janus蛋白酪氨酸激酶2(Janus Protein Tyrosine Kinase2,JAK2)、信号转导与转录活化因子3(Signal Transducers and Activators of Transcription 3,STAT3)mRNA及蛋白的表达分别采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)与蛋白免疫印迹法(Western blot)检测。结果治疗前与空白组相比,模型组、假电针组、电针组大鼠BMD、PBG值明显升高(P<0.01或P<0.05),GIR明显降低(P<0.01);治疗结束后,与空白组相比,电针组大鼠BM、FBG、PBG、β-CTX、IL-6、JAK2、STAT3 mRNA及蛋白浓度明显升高(P<0.01),GIR、P1NP、BMD、BV/TV、Tb.N和Tb.Sp明显降低(P<0.01);与模型组比较,电针组大鼠的BM、PBG、β-CTX、IL-6、JAK2、STAT3 mRNA及蛋白浓度均明显降低,BMD、BV/TV、Tb.N、Tb.Sp、GIR均明显升高(P<0.05或P<0.01);假电针组大鼠BM、PBG、JAK2 mRNA、STAT3蛋白表达明显降低(P<0.05),而P1NP、β-CTX、BMD、BV/TV、Tb.N、Tb.Sp、IL-6、STAT3 mRNA、IL-6、JAK2蛋白表达均无统计学差异(P>0.05)。结论电针能够通过调控IL-6/JAK2/STAT3信号通路降低机体炎症反应改善胰岛素抵抗,并能一定程度的降低机体破骨细胞活性,减少骨吸收。

人脐带间充质干细胞通过STAT3和AMPK信号通路调节白介素-6诱导的HeLa细胞的生物活性

宫颈癌是全球第4大常见的女性癌症,目前,手术和放疗仍然是治疗非转移性宫颈癌的主要方法,然而,复发性和转移性宫颈癌尚无有效治疗手段。寻找新的更加有效的宫颈癌治疗靶点就显得尤为重要。已知白介素-6(interleukine-6,IL-6)作为肿瘤促进因子在宫颈癌的发展和转移过程中发挥着十分重要的作用。已有报道显示,间充质干细胞在多种肿瘤中发挥抑癌作用,但对于其内在机制的报道较少;且在宫颈癌的发展过程通常伴随着IL-6表达的增加。在IL-6存在的炎症病理条件下,MSCs对于宫颈癌细胞的增殖和迁移是否仍具有抑制作用仍未可知。本研究通过检测人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUC-MSCs)对IL-6诱导的HeLa细胞增殖、迁移、侵袭以及STAT3/Bcl-2、AMPK/mTOR信号通路的调节作用,探讨其对宫颈癌Hela细胞生物活性的影响及其分子机制。集落形成实验、细胞划痕实验以及Transwell侵袭结果证明,炎症因子IL-6显著促进HeLa细胞增殖、迁移和侵袭(P<0.05)。而20%和50%MSCs条件培养基显著抑制IL-6诱导的HeLa增殖(P<0.0001)、迁移(P<0.01)和侵袭能力(P<0.0001)。进一步的机制研究结果显示,炎症因子IL-6显著上调抗凋亡信号通路中STAT 3和Bcl-2的mRNA(P<0.0001)和蛋白质(P<0.01)含量;同时下调AMPK、TSC 1和TSC 2等基因的表达(P<0.001),最终上调细胞代谢相关基因mTOR的表达(P<0.01)和蛋白质磷酸化水平(P<0.05)。20%MSCs条件培养基显著抑制HeLa细胞中STAT3/Bcl-2信号通路(P<0.05)。50%MSCs条件培养基显著抑制HeLa细胞中STAT3/Bcl-2信号通路(P<0.01)同时激活AMPK/mTOR信号通路(P<0.05),诱导细胞周期阻滞(P<0.0001)。综上所述,MSCs条件培养基通过下调STAT3信号通路和上调AMPK信号通路抑制白介素-6诱导的HeLa细胞的增殖、迁移与侵袭。本研究结果有助于进一步阐释IL-6在宫颈癌中发生发展的作用和机制,为寻找宫颈癌治疗的新研究方向提供实验依据。