中年男性精子DNA碎片率对体外受精-胚胎移植妊娠结局的影响

目的探讨中年男性精子DNA碎片率(DFI)与精液质量和体外受精-胚胎移植妊娠结局的关系。方法共收集180例接受常规体外受精-胚胎移植治疗且男性年龄>38岁的精液标本。根据DFI的阈值分成(<30%和≥30%)两组。主要测量指标包括:常规精液参数、激素水平、DFI、受精率、优质胚胎率、临床妊娠率等。结果通过比较分析发现,DFI与男性卵泡刺激素(FSH)、精子活力、精子形态密切相关,且精子活力随着DFI水平的升高而下降(P<0.05);当DFI≥30%时,优质胚胎率下降(P<0.05),但两组的临床妊娠率差异无显著性(P>0.05)。结论DFI可以作为中年男性精液常规分析的重要参考指标,虽然DFI影响优质胚胎率,但与辅助生殖治疗的临床妊娠结局无关。

精液优化处理后DNA碎片指数与IVF-ET胚胎质量及妊娠结局的关系

目的:评估经密度梯度离心联合上游法优化处理后的精子DNA碎片指数(DFI)与辅助生殖体外受精-胚胎移植(IVF-ET)胚胎质量及妊娠结局的关系。方法:回顾性分析2022年4月至12月在郑州大学第一附属医院生殖医学中心因单纯输卵管因素行IVF-ET的257个周期,比较男方精液优化前后精液参数和精子DFI;按优化后精子DFI将其分为高DFI组(DFI>5)与低DFI组(DFI≤5),比较两组的胚胎发育及妊娠结局;根据临床妊娠情况分为妊娠组与非妊娠组、持续妊娠组及早期流产组,比较精子DFI情况。结果:与处理前相比,精液优化处理后前向运动精子及正常形态精子百分比提高,精子DFI下降(P<0.001)。精子优化处理后高DFI组的早期流产率高于低DFI组(P<0.05)。105例临床妊娠周期中早期流产组精液优化处理前、后DFI均高于持续妊娠组(P<0.05)。结论:密度梯度离心联合上游优化处理是一种有效的精液制备方法,可提高精子前向运动能力和正常形态精子比例,降低精子DFI;优化后精子高DFI可能增加临床妊娠后早期流产的风险。

浮游板优化精液与密度梯度离心结合上游法的比较

目的应用浮游板和密度梯度离心结合上游法优化人类精液,明确优化效果并比较两种方法优化后精子参数的差异。方法收集正常精液样本85例和轻中度少弱精子症精液样本59例,每例样本分为原液组、密梯组和浮游组各1 ml进行后续处理。原液组在精液液化后未做任何处理;密梯组精液液化后用密度梯度离心法结合上游法进行处理,浮游组则在精液液化后应用精子浮游板进行处理。比较原液组、密梯组、浮游组3个亚组间的精子浓度、前向运动精子百分率、正常形态精子百分率;应用流式细胞仪检测精子线粒体膜电位和精子DNA碎片指数,使用单精子活性氧分析仪检测单精子活性氧水平,使用电子显微镜观察精子超微结构并进行组间比较。结果无论是正常精液还是轻中度少弱精子症精液,与原液组比较,密梯组与浮游组的前向运动精子百分率、正常形态精子百分率及精子线粒体膜电位均显著升高(P<0.05),精子DNA碎片指数显著降低(P<0.05);密梯组和浮游组各指标无显著性差异(P>0.05)。正常精液中,浮游组的精子浓度显著高于密梯组(P=0.029),单精子活性氧水平显著低于原液组(P=0.038)。轻中度少弱精子症精液中3亚组间的单精子活性氧水平均无显著性差异(P>0.05)。电子显微镜观察发现正常精液中3个亚组的精子均未见明显异常;轻中度少弱精子症精液中密梯组部分精子可观察到精子细胞膜断裂和线粒体肿胀等异常,而浮游组精子超微结构未见明显异常。结论密度梯度离心结合上游法和浮游板法用于精液的处理和优化,均可有效回收活力、形态和功能更好的精子。精子浮游板法的体外干预小,操作简便,可以获得活性氧更少、损伤更小的精子。

死精子症不同诊断方法的探讨及其程度与DFI相关性分析

目的:探讨伊红-苯胺黑试验(E-N试验)和低渗膨胀试验(HOST)诊断死精子症的价值,并分析精子坏死程度与精子DNA碎片指数(DFI)、精子高可染性指数(HDS)的相关性。方法:采用CASA检测2023年5月至2024年7月在湖南省妇幼保健院就诊的7 333例男性精子活力,选择弱精子症男性行E-N试验、HOST评估精子存活率,再筛选死精子症男性行计算机辅助精子分析(CASA)测精子DFI、HDS。根据精子PR%(20%~<30%、10%~<20%、<10%)分组,探讨两种方案对死精子症的诊断价值及精子坏死程度与DFI、HDS的相关性。结果:7 333例男性中弱精子症1374例(18.74%)。轻度、中度、重度弱精子症患者死精子症发生率:E-N试验为0.55%(5/913)、3.80%(12/316)、35.86%(52/145)、总发生率0.94%(69/7 333);HOST试验为0.99%(9/913)、6.96%(22/316)、46.21%(67/145)、总发生率为1.34%(98/7 333)。两种诊断方案无统计学差异(χ^(2)=0.97,P>0.5)。两种方法确定的死精子症病例均显示精子DFI与精子存活率呈负相关(r=-0.366,r=-0.333,P<0.05),精子HDS与精子存活率亦呈负相关,但无统计学意义。结论:当男性精子PR%<30%时应进行精子存活率检测,优先推荐E-N试验诊断死精子症。精子坏死可能与精子核染色质损伤互为危险因素。

时差成像胚胎培养系统观察精子DNA碎片化指数对卵胞浆内单精子显微注射的胚胎发育及临床结局的影响

目的使用时差成像(time-lapse imagining,TLI)胚胎培养系统观察精子DNA碎片化指数(DNA fragmentation index,DFI)对卵胞浆内单精子显微注射(intracytoplasmic sperm injection,ICSI)的胚胎发育指标及临床结局的影响。方法选取2023年1月至6月在上海交通大学医学院附属国际和平妇幼保健院辅助生殖科接受ICSI技术助孕的392对夫妇为研究对象,分为常规培养组284周期和TLI组108周期,再根据DFI≤15%、>15%~<30%、≥30%进一步分为正常组、临界组、异常组。比较各组的临床资料以及临床妊娠结局。统计学方法采用t检验、单因素方差分析、χ^(2)检验或Fisher确切概率法。结果6组的女方年龄、基础促卵泡激素(follicle stimulating hormone,FSH)、身体质量指数(body mass index,BMI)及获卵数比较,差异均无统计学意义(P值均>0.05);男方精液常规指标中,浓度和正常形态率比较,差异均无统计学意义(P值均>0.05);常规正常组、常规临界组、常规异常组、TLI正常组、TLI临界组和TLI异常组的前向运动精子率分别为(46.5±16.5)%、(31.0±14.2)%、(14.8±8.4)%、(41.6±16.2)%、(32.5±14.4)%、(19.3±11.1)%,常规异常组和TLI异常组的前向运动精子率分别低于常规正常组、常规临界组、TLI正常组和TLI临界组(P值均<0.05)。6组的卵裂率和囊胚形成率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。常规正常组、常规临界组、常规异常组、TLI正常组、TIL临界组和TLI异常组的受精率分别为(77.3±18.6)%、(78.6±17.1)%、(68.3±22.7)%、(77.4±14.5)%、(74.5±13.1)%、(63.1±25.4)%;常规异常组的受精率低于常规正常组、常规临界组、TLI正常组(P值均<0.05);TLI异常组的受精率低于常规正常组、常规临界组、TLI正常组、TLI临界组(P值均<0.05)。常规正常组、常规临界组、常规异常组的妊娠率分别为57.4%(39/68)、54.5%(24/44)、27.3%(6/22),异常组低于正常组和临界组(P值均<0.05)。TLI正常组、TLI临界组和TLI异常组3组的妊娠率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。常规组3组之间以及TLI 3组之间的早期流产率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论精子DFI值的升高会影响精子前向运动率,还会影响胚胎的受精率,高DFI精子进行ICSI助孕时使用TLI胚胎培养系统可以获得稳定的妊娠率。

生殖道解脲支原体感染及男性年龄对精子DNA碎片指数、精液常规参数的影响

目的探讨生殖道解脲支原体(Uu)感染及男性年龄对精子DNA碎片指数(DFI)及精液常规参数的影响。方法收集2019年1月至2023年7月于深圳市宝安区妇幼保健院体检科和生殖健康科进行婚前或孕前保健检查的男性7106例为研究对象,所有研究对象进行精液常规参数检查,并采用培养法和流式细胞术分别进行精液Uu检测与精子DFI分析。依据年龄截点将研究对象分成3组(<30岁、30~35岁、>35岁),分析Uu检出情况及Uu阳性男性中不同年龄组间精液常规参数和精子DFI差异。结果近5年男性生殖道Uu总体检出率为11.89%(845/7106),除2020年检出率略有下降外,整体呈逐年上升趋势;生殖道Uu检出率无明显的年龄和季节性差异。Uu阳性男性不同年龄组间比较发现,相比<30岁和30~35岁组,>35岁组的精子存活率、前向运动精子百分率、精子总数显著降低(P<0.05),精子DFI显著增高(P<0.05)。Uu阳性男性年龄与精子DFI呈正相关关系(r=0.26,P=0.0002)。Logistic回归分析结果显示,年龄[OR=1.393,95%CI(1.002,1.935),P=0.040]、精子存活率[OR=0.746,95%CI(0.608,0.916),P=0.005]和精子总数[OR=0.984,95%CI(0.968,0.999),P=0.040]是Uu阳性男性精子DFI的独立影响因素(P<0.05)。结论生殖道Uu阳性的高龄男性精液常规参数欠佳,且精子DFI显著增加。Uu检测可作为孕前男性精液质量筛查的候选指标,为全面客观评价男性生育力提供更多实验室证据。

新型超声快速处理活检标本保存不同年限对DNA质量的影响

背景:新型超声组织处理技术越来越多地被用来进行分子生物学分析,研究新型超声处理不同存储年限组织DNA的质量,对进一步分子检测的标本质控具有重要意义。目的:探讨新型超声处理活检标本存储不同年限对DNA质量的影响,以期为分子检测探索最佳的标本存储时间。方法:收集40例乳腺穿刺小活检组织,采用超声技术制作石蜡标本,按照存储年限分为4组:<1年组、1-3年组、>3-5年组及>5年组,每组10例,对石蜡标本进行切片,每张切片厚3μm,切片10-15张,提取DNA后通过Nanophotometer N60超微量分光光度计和Qubit 4.0荧光计检测DNA的质量浓度,记录A_(260)/A_(280)比值判定DNA的纯度,利用全自动毛细管电泳核酸分析仪(Qsep 100)检测DNA片段完整性,以评估DNA片段的质量。结果与结论:4组样本A_(260)/A_(280)均值在1.8-2.0之间,达到纯度要求,无明显差异。4组样本的DNA质量浓度(Qubit浓度)均值分别为30.39,14.33,2.52,1.95 ng/μL;DNA的平均N/Q比值分别为6.48,14.18,24.56,29.86;DNA质量数均值分别为5.64,1.76,1.24,0.80;大片段占比均值分别为56.08%,17.72%,12.68%,7.90%。PCR检测内控基因Ct均值分别为15.32,17.09,18.39,21.24。与<1年组相比,其余3组DNA浓度显著降低,N/Q比值显著增加,DNA质量数和大片段占比均值显著降低,Ct值升高,差异有显著性意义(P<0.05)。实验结果表明,对于新型超声处理活检标本,应优先选择存储<1年的样本进行日常分子检测,储存3年内的样本可满足二代测序等检测要求,5年内样本仅可尝试进行PCR等检测,存储超过5年的样本不建议进行后续分子检测。

基于氧化应激效应探讨精索静脉曲张患者显微结扎术对精子DNA碎片及试管婴儿临床结局的影响指数

目的:探讨精索静脉显微结扎术对精索静脉曲张(VC)患者精子DNA碎片指数(DFI)及临床结局的影响。方法:选取VC伴有精子DNA碎片异常并行辅助生殖技术治疗的患者80例,按照随机数字表法分成观察组和对照组,每组40例。观察组行精索静脉显微结扎术,术后联合左卡尼汀口服溶液治疗;对照组单纯采用左卡尼汀口服溶液治疗。疗程3个月。治疗后,观察两组患者精子DNA碎片指数(DFI)、精子浓度、前向运动精子百分比(PR)及临床结局指标的变化。结果:治疗后,观察组总有效率高于对照组(P<0.05);观察组DNA碎片指数明显低于对照组(P<0.05),观察组精子浓度、PR明显高于对照组(P<0.01)。观察组受精率、卵裂率、优质胚胎率、养囊成功率及妊娠率均高于对照组(P<0.05)。结论:精索静脉曲张结扎术后联合左卡尼汀口服溶液能明显改善精索静脉曲张患者的精子质量,同时能修复患者精子DNA的完整结构,对体外受精(IVF)的临床结局有促进作用,疗效优于单纯运用左卡尼汀口服溶液治疗。

IVF助孕中男方精子不同DFI水平对胚胎发育和妊娠结局的影响

目的探讨体外受精(IVF)助孕中男方精子不同DNA碎片率(DFI)对胚胎发育和妊娠结局的影响。方法选取2020年7月至2022年1月于临汾市人民医院行IVF助孕且随访至2023年6月的80对不孕夫妇作为研究对象,根据男方精子DFI水平分为DFI<25%组(n=44)和DFI≥25%组(n=36)。对比两组囊胚形成率、可利用囊胚率、优势囊胚率、精子总数、精子浓度、前向运动精子百分率、前向运动精子浓度、前向运动精子总数、不动精子总数、囊胚种植率、临床妊娠率、流产率;采用Logistic回归模型分析DFI对胚胎发育和妊娠结局的影响。结果DFI<25%组的囊胚形成率、可利用囊胚率、优势囊胚率均高于DFI≥25%组(P<0.05)。DFI<25%组的精子总数、精子浓度、不动精子总数均低于DFI≥25%组,而前向运动精子百分率、前向运动精子浓度、前向运动精子总数高于DFI≥25%组(P<0.05)。DFI<25%组的囊胚种植率、临床妊娠率均高于DFI≥25%组(P<0.05);两组流产率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Logistic回归分析显示,DFI是囊胚形成率、可利用囊胚率、优势囊胚率、囊胚种植率、临床妊娠率的影响因素(P<0.05)。结论男方不同精子DFI水平会对行IVF助孕患者的胚胎发育和妊娠结局产生影响。

精子DNA碎片对体外受精-胚胎移植妊娠结局及胚胎发育的影响

目的:分析精子DNA碎片指数(DFI)对体外受精-新鲜胚胎移植(IVF-ET)助孕及活产结局的影响。方法:选取2015年6月至2020年12月因女方因素首次行IVF并进行新鲜胚胎移植的患者共947例,根据DFI分为低、中、高3组:DFI<15%、15≤DFI≤30%和30%<DFI,比较3组双方基础数据,女方包括年龄、体质量指数(BMI)、基础生殖激素、AMH等;男方包括年龄、BMI、精液参数;超促排卵参数;处理前和处理后IVF精液参数;促排卵结局、胚胎质量及妊娠结局。结果:不同DFI水平间相比,双方年龄在3组间均有显著性差异,15≤DFI≤30%和30%<DFI组双方年龄显著大于DFI<15%组;基础状态精液参数中前向运动精子百分率、非前向运动精子百分率、不活动精子百分率,以及IVF处理前精子总活率、前向运动精子百分率在3组间也均有显著差异(P<0.01);中和高DFI组中基础精子正常形态率、IVF处理前精子浓度、精子总数和处理后精子浓度均显著低于低DFI组;30%<DFI组无论是精液处理前还是精液处理后精子总数均显著低于其他两组(P<0.01)。此外,中和高DFI组受精率显著低于低DFI组,其他临床数据包括促排卵参数、胚胎质量、妊娠结局组间均无显著差异。结论:高DFI水平对精子活率产生显著影响,IVF精液处理后DFI水平与精子浓度、精子总数、受精率均呈显著负相关,对胚胎质量及妊娠结局无影响。

精子DNA碎片率与年龄、精液参数和生活习惯相关性分析

目的分析男性精子DNA碎片率(DFI)与年龄、精液参数和生活习惯相关性。方法选择405例患者进行一般描述性分析、回归分析,观察有无统计学意义。结果主要体现在年龄与精子DFI呈正向相关、雌二醇和精子DFI负相关(P<0.05)。不抽烟不喝酒与精子DFI负相关(P<0.05)。结论男性年龄、生殖激素水平、生活习惯与精子DFI有相关性。生活习惯或许是造成男性生育力下降的因素之一,但是其分子机理以及损伤机制仍然需要通过进一步的体内外实验进行证实。此外,考虑到当前实验在选择研究对象时可能存在未有效鉴别和剔除其他可变因素的情况,本研究尚需进行进一步大样本量对实验进行验证。

基于硅基过滤片的精子优选芯片设计与优化

利用半导体工艺技术构建了一种基于硅基过滤片的精子优选微流控芯片,具有高活力的精子会克服重力,在微孔的引导下游向精子收集池。分别在7,15,30,60 min对收集池中的精子取样,采用计算机辅助精子分析(CASA)系统进行精液常规检测、精子形态学和DNA碎片分析;对硅基过滤片的孔间距和筛选时间进行了优化。结果表明:6μm孔间距和15 min筛选时间为最佳的精子优选方案。所构建的基于硅基过滤片的精子优选芯片,可以有效优选出具有高活力且DNA完整性和形态正常率较高的精子。芯片精液吞吐量大,活动精子回收率较高,有一定的临床价值,同时提供了一种简单易操作的标准化精子优选流程。

精子相关参数与体外受精受精率的相关性研究

目的探讨精子参数与体外受精(IVF)受精率的相关性。方法回顾性分析2020年4月至2023年4月在郴州市第一人民医院生殖医学中心进行IVF助孕的符合纳入、排除标准的327例病例。依据我中心胚胎实验室质控数据考核标准分为低受精组(受精率<30%,n=19)和正常受精组(受精率≥30%,n=308)。收集男方的基本信息与精子相关参数以及胚胎信息。用Pearson相关性分析各参数与精子受精率的相关性,Logistic回归分析精子受精率的影响因素,采用ROC曲线分析预测价值。结果精子顶体酶活性、正常形态精子百分率、精子DNA碎片指数(DFI)是影响受精率的相关因素,相关系数(r)分别为0.168、0.306、-0.243(P均<0.05)。Logistic回归分析确定三者均是影响IVF受精率的独立因素,并得出多因素回归方程式:受精率预估值=-2.561+0.035×精子顶体酶活性+2.066×正常形态精子百分率-1.51×精子DFI。精子顶体酶活性、正常形态精子百分率、精子DFI及三因素联合预测低受精率的ROC曲线下面积(AUC^(ROC))分别为0.806、0.889、0.827、0.899,其Yuden指数对应的cut-off值分别为61.2μIU/10^(6)精子、2.98%、27.50%、-21.32,敏感性分别为95.70%、76.90%、68.40%、64.30%,特异性分别为43.50%、94.70%、87.70%、100.00%,表明3个指标联合预测受精率的效能较好。结论精子顶体酶活性、正常形态精子百分率、精子DFI是预测IVF受精率的独立影响因素;可以用多因素回归方程式预测IVF的受精率。

优化精液处理中的密度梯度离心法以提高受精结局的探讨

【目的】本研究旨在改进生殖男科领域现有的精液处理方法,特别是针对双层密度梯度法中的300×g 20 min处理条件,以提高受精结局。【方法】收集2020年7月和9月以及2022年3月和5月在中山大学附属第六医院生殖医学中心进行辅助生殖助孕的1623例患者的精液标本进行实验。预实验中,比较四种不同的双层密度梯度方法(200×g 10 min、200×g 20 min、300×g 10 min和300×g 20 min)处理后标本的精子DNA碎片率和回收率。然后,筛选出一种最优的方法作为新方法,并与目前在用的旧方法(300×g 20 min双层梯度法)进行对比,检验受精率是否有统计学差异。在新方法的基础上,进一步优化为单层密度梯度法,并与双层密度梯度法进行对比,检验是否存在统计学差异。实验过程中严格控制温度、离心速度和离心时间,同时记录每组样本的数量和处理条件。【结果】在保证足够的精子回收率的基础上,发现四种双层密度梯度法中300×g 10 min的精子DNA碎片率低于300×g 20 min。因此,选择300×g 10 min作为新方法进行试验。结果表明,新方法300×g 10 min的总受精率、二核体(2pn)受精率均高于300×g 20 min,且差异有统计学意义(P<0.05);300×g 10 min的卵裂率也略高于300×g 20 min,但差异没有统计学意义(P>0.05)。单层密度梯度法的总受精率、2pn受精率均高于双层密度梯度法,但差异没有统计学意义(P>0.05);单层密度梯度法的卵裂率高于双层密度梯度法,囊胚形成率低于双层密度梯度法,且差异均有统计学意义(P<0.05)。【结论】相对于现有的300×g 20 min双层梯度法,300×g 10 min双层梯度法成功提高了总受精率、2pn受精率、卵裂率,缩短了精液优化处理的时间;而单层密度梯度法虽提高了卵裂率、节约了试剂成本和操作时间,但其囊胚形成率却出现了下降的情况。这些发现为生殖男科领域的精液处理方法提供了有益的指导和启示。

基于中医证候与精液质量相关参数构建精子DNA碎片预测模型与验证

背景:中医证候与精液质量相关参数相结合,共同预测精子DNA碎片指数(DNA fragmentation index,DFI)异常增高的发生并绘制列线图,能显著提高临床的实操性与应用效能,为临床全面评估精液质量,采取积极干预措施以改善临床结局及制定个体化医疗方案提供依据。目的:探讨基于中医证候与精液质量相关参数构建精子DNA碎片的预测模型与验证。方法:回顾性分析2019年7月至2021年7月在广西壮族自治区南溪山医院中医男科接受中医证候诊断及精子DNA碎片率检查的不育患者共420例,据《人类精液检查与处理实验室手册》(第6版),将其中137例精子DFI>30%患者纳入精子DFI异常增高组,将283例精子DFI≤30%作为对照组;首先采用单因素分析筛选精子DFI异常增高的影响因素,然后采用套索算法(LASSO)校正因子共线性问题并筛选出最佳匹配因子后,将其纳入多因素向前逐步Logistic回归找出其独立影响因素并绘制列线图,最后采用受试者工作曲线、校准曲线、临床决策曲线、临床影响曲线对该预测模型进行区分度与准确度及临床应用效能验证。结果与结论:①单因素分析结果显示,年龄、体质量指数、前向运动率、精子总活率、精子浓度、精子形态学、肾阳虚衰证、湿热下注证、肾精不足证为引发精子DFI异常增高的影响因子(P<0.05);②通过LASSO回归进一步筛选出的最佳匹配因素为年龄、体质量指数、精子总活率、精子浓度、精子形态学、肾阳虚衰证、湿热下注证、肾精不足证(P<0.05);③多因素向前逐步Logistic回归结果显示年龄、体质量指数、精子浓度、精子总活率、湿热下注证、肾阳虚衰证共6项为引发精子DFI异常增高的独立影响因素;④受试者工作曲线显示,模型组曲线下面积为0.760(0.713,0.806),验证组曲线下面积为0.745(0.714,0.776),说明该预测模型具有较好的区分度;⑤校准曲线平均绝对误差0.040,Hosmer-Lemeshow检验P>0.05,表明该模型预测发生精子DFI异常增高的概率与实际发生精子DFI异常增高的概率无显著统计学差异,证实该模型具有较好的准确度;⑥临床决策曲线与临床影响曲线显示,模型组与验证组分别在阈概率值为0.08-0.84与0.09-0.78时具有临床最大净获益,且在该阈概率范围内具有较好的临床应用效能;⑦结果表明,年龄、体质量指数、精子浓度、精子总活率、湿热下注证、肾阳虚衰证为引发精子DFI异常增高的独立影响因素,通过其构建的临床预测模型列线图具有较好的临床预测价值与临床应用效能,可为临床全面评估精液质量、预后与干预及个体化医疗服务提供依据。

引导编辑系统的优化及在DNA大片段编辑中的应用

基因编辑技术是指利用人工核酸酶对细胞和个体中特定的基因序列进行插入、替换或删除等编辑修饰。CRISPR/Cas9核酸酶的发现是基因编辑技术发展的一个里程碑,但其编辑产物的精确性和脱靶效应依然是限制其应用的关键因素。近年来以引导编辑技术为代表的衍生性编辑工具因高效且精准而受到广泛关注。该系统能够以不可逆的方式在基因组中靶向引入多种类型的遗传变化,包括12种可能类型的点突变,以及片段的插入和缺失及其组合,而无需DNA双链断裂(DSB)或者供体DNA模板。引导编辑技术结合了CRISPR/Cas9的靶向性和逆转录酶的精准编辑能力,使得编辑产物更加精准。本综述将深入探讨引导编辑技术的发展、优化以及在DNA大片段编辑中的应用。

坏死精子症诊疗进展

坏死精子症是弱精子症的一类特殊类型,其精子通常大量死亡,发病率为0.2%~0.4%。有关坏死精子症的报道尚十分稀少,其病因冗杂,诊断与治疗也相当棘手。本文将综述坏死精子症的主要病因、病理生理机制、诊断方法及治疗策略,以期能为男科医师及辅助生殖医师提供参考,为坏死精子症患者行辅助生殖技术治疗提供理论指导。

吸烟、饮酒、熬夜对精子DFI的影响

目的探讨吸烟、饮酒、熬夜对男性精子DNA碎片率(DFI)的影响。方法选取2020年6月至2022年6月男性不育症患者405例。调查并分析其饮酒抽烟熬夜情况及其关联性。结果长期吸烟可损害精子的生物活性,并降低其活力。频繁饮酒是影响精子活力的因素。结论吸烟、饮酒、熬夜可对精子DNA碎片化造成负面影响。

基于活产建立体外受精-胚胎移植精子DNA碎片指数的参考阈值及子代短期安全性

背景:精子DNA碎片指数与受精、胚胎发育潜能、胚胎植入、流产及子代安全性等存在显著的相关性。然而,其临床参考值受多种因素的影响,导致临床意义极其有限,该研究以活产为结局,通过倾向评分匹配校正其他混杂因素后,构建精子DNA碎片指数与活产的最佳临床截断值,并对其进行内外部验证,具有较好的预测价值及临床应用效能。目的:探讨基于活产建立体外受精-胚胎移植精子DNA碎片指数的参考阈值及子代短期安全性。方法:选取2019年5月至2021年5月于常州市妇幼保健院接受体外受精-胚胎移植患者1921例,以倾向匹配容差0.02为标准,1∶1进行倾向评分匹配,结果活产组与非活产组各成功匹配540例,以此建立模型组;通过选取同时期广西壮族自治区南溪山医院接受体外受精-胚胎移植患者135例作为外部验证组;采用受试者工作曲线探求精子DNA碎片指数对活产的临床最佳截断值,分别采用限制性立方样条曲线、标准曲线、临床决策曲线、临床影响曲线及内外部验证等方法,对该截断值的准确性及临床应用效能进行评估。结果与结论:(1)非活产组精子DNA碎片指数显著高于活产组且与活产存在显著的负相关性(r=-0.444,P<0.001);(2)受试者工作曲线结果显示,DNA碎片指数对活产的最佳截断值为24.33%,曲线下面积为0.775(0.746,0.804),特异度为72.60%,敏感度为78.90%,准确度为75.70%;(3)限制性立方样条曲线拟合Logistic回归结果显示,当精子DNA碎片指数大于24.57%时,临床非活产的风险呈趋势性增涨;(4)Logistic回归概率分析结果显示,精子DNA碎片指数为活产的危险因素[OR(95%CI)=0.916(0.904,0.928),P<0.001],且当精子DNA碎片指数大于27.78%时,临床活产发生的概率将小于50%,随着精子DNA碎片指数每增高1个单位,活产的概率下降8.4%;(5)内外部对该临床截断值的验证均显示,该截点具有一定的临床预测价值及准确性;(6)临床决策曲线与临床影响曲线显示,以该临床截断值建立的预测模型在阈概率为0.22-0.73时具有临床最大净获益值,且在该阈概率范围内损失与获益的比值始终小于1,证实该预测模型具有较好的临床应用效能;(7)精子DNA碎片指数与子代短期安全性分析结果显示,精子DNA碎片指数与出生儿早产、体质量、畸形、性别差异无显著性;(8)结果表明,精子DNA碎片指数对体外受精-胚胎移植活产的最佳临床截断值为24.33%,以此建立的临床预测模型具有较好的区分度、准确度与临床应用效能,精子DNA碎片指数对子代短期安全性影响并不显著,但仍需大样本及长期的追踪评估。

精子核DNA完整性测定方案的优化及其在辅助生殖技术中的应用价值

目的:对现有精子核DNA完整性测定方案进行优化,并探讨其在辅助生殖技术(ART)中的应用价值。方法:选择2021年1月1日至2022年12月8日于江西中医药大学附属生殖医院就诊的拟接受体外受精-胚胎移植(IVF-ET)助孕的194对夫妇作为研究对象。采集男方的精液作为对照组(n=194),同一精液经双层密度梯度离心法优化处理后精子混合液作为观察组(n=194)。根据精子核DNA碎片率(DFI)测定结果将对照组及观察组各分为3个亚组,对照A组和观察A组:DFI<15%,对照B组和观察B组:DFI 15%~30%,对照C组和观察C组:DFI≥30%。对观察组与对照组的DFI值及各亚组间的助孕及妊娠情况进行比较。结果:(1)观察组DFI明显低于对照组,差异有统计学意义[(13.55±10.17)%vs.(18.56±11.54)%,P<0.05]。(2)6个亚组间的受精率、卵裂率及优胚率两两比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(3)6个亚组的妊娠率和着床率比较,差异有统计学意义(P<0.05);其中,对照A组、对照B组、观察A组、观察B组4组的临床妊娠率(均在65.00%以上)及着床率(均在50.00%)两两比较,差异均无统计学意义(P>0.05),但均高于对照C组(43.24%、31.67%)及观察C组(13.64%、8.82%),差异有统计学意义(P<0.05);对照C组的临床妊娠率及着床率明显高于观察C组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:精液经优化处理后精子核DNA完整性可明显改善。两种不同检测方案在ART中均有较好的应用价值,当精液经优化处理后DFI≥30%时,对ART的不良妊娠结局具有更好的预测价值。