压应力对小鼠单核细胞RAW264.7 DNAX活化蛋白12、抗酒石酸酸性磷酸酶表达的影响

目的探讨压应力对小鼠单核细胞RAW264.7 DNAX活化蛋白12(DAP12)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)表达的影响。方法以小鼠单核细胞RAW264.7为研究对象,采用四点弯曲体外细胞加载装置加载压应力0、3、6、12h,分别以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白免疫印迹法检测DAP12、TRAP mRNA和DAP12蛋白的表达情况。结果小鼠单核细胞RAW264.7经破骨细胞培养液培养后,体积变大,核数目增多,TRAP染色阳性。受压应力刺激后,DAP12、TRAP mRNA及DAP12蛋白表达随加力时间延长而增加(P<0.05)。结论小鼠单核细胞RAW264.7经破骨细胞培养液培养后成功向破骨细胞转化,转化细胞受压应力刺激活化过程中存在DAP12高表达。

胸腺肽α1-Spl DnaX内含肽融合蛋白的切割动力学研究

目的:研究胸腺肽α1(Tα1)与Spl DnaX内含肽融合蛋白AS的体外切割动力学。方法:构建Tα1和SplDnaX内含肽的融合表达载体pET-AS,转化大肠杆菌BL21(DE3),经乳糖诱导获得可溶性表达的融合蛋白AS,用镍亲和层析纯化该蛋白;综合评价温度、β-巯基乙醇(β-ME)浓度和诱导切割时间对Spl DnaX内含肽介导融合蛋白AS自切割释放Tα1的影响。结果:在大肠杆菌中诱导表达了融合蛋白AS,经镍柱纯化获得该蛋白;随着温度升高和β-ME浓度增加,诱导切割时间延长,Spl DnaX内含肽介导的切割率逐渐增大;最终采用300 mmol/Lβ-ME切割24 h,融合蛋白的硫解切割率大于90%。结论:通过对Spl DnaX内含肽的诱导切割条件进行摸索,确定了最适宜的切割条件,为利用该方法制备Tα1和其他小分子多肽提供了技术基础。

尾核中NMDA和非NMDA受体参与皮层SmI对丘脑束旁核伤害性反应的下行性调节

本文探讨尾核中ＮＭＤＡ和非ＮＭＤＡ受体是否参与皮层体感运动Ｉ区（ＳｍＩ）对丘脑束旁核（Ｐｆ）伤害性反应和针刺镇痛的下行性调节。结果发现，双侧尾核头部分别微量注射ＮＭＤＡ受体的拮抗剂Ｄ－ＡＰ５（ｎ＝１１）和非ＮＭＤＡ受体拮抗剂ＤＮＱＸ（ｎ＝９）后谷氨酸兴奋皮层ＳｍＩ对Ｐｆ神经元伤害性反应的抑制效应均被明显减弱，与盐水对照组（ｎ＝１３）的抑制效应相比，均有显著差别（ ＡＮＯＶＡ， Ｐ＜ ０． ０５）。尾核内微量注射 ＤＮＱＸ后，电针（ ｎ＝１１）抑制 Ｐｆ神经元伤害性反应的效应 显著减弱，与盐水对照组相比，差别显著（ＡＮＯＶＡ，Ｐ＜０．０５）。提示尾核中ＮＭＤＡ和非ＮＭＤＡ 受体均参与兴奋皮层 ＳｍＩ对 Ｐｆ神经元伤害性反应的下行调节，而非 ＮＭＤＡ受体还参与电针对 Ｐｆ 神经元伤害性反应的抑制作用。

呼吸道合胞病毒毛细支气管炎患儿中TREM-1/DAP12通路关键信号节点的表达

目的探讨呼吸道合胞病毒(RSV)毛细支气管炎患儿中TREM-1/DAP12蛋白的表达及该通路与炎症反应的潜在关联。方法选取2017年1月—2019年1月四川省广安市人民医院RSV毛细支气管炎患儿作为病例组(分为轻症组和重症组),选取同期体检的健康儿童作为对照组,对血清中炎症因子含量及外周血单个核细胞(PBMCs)中TREM-1、DAP12表达进行检测。构建RSV感染人支气管上皮(NHBE)细胞的体外细胞模型,将人支气管上皮细胞(NHBE)分为对照组、RSV感染组、RSV+siRNA-Control组和RSV+siRNA-TREM-1组,并对细胞中TREM-1、DAP12的表达及上清液中炎症因子含量进行检测。结果轻症组、重症组儿童血清中白细胞介素-1β(IL-1β)等炎症因子含量、PBMCs中TREM-1、DAP12表达量均高于对照组,且重症组高于轻症组(均P<0.05)。RSV感染组、RSV+siRNA-Control组TREM-1、DAP12表达量均高于对照组、RSV+siRNA-TREM-1组(均P<0.05)。RSV+siRNA-TREM-1组上清液中炎症因子含量均低于RSV感染组、RSV+siRNA-Control组(均P<0.05)。结论TREM-1/DAP12信号通路在RSV毛细支气管炎患儿中高表达。RSV诱导NHBE细胞高表达TREM-1,沉默TREM-1可以下调DAP12表达,抑制炎症因子分泌。

白细胞介素-10在器官移植中的作用研究进展

1989年美国DNAX研究所Fiorentino等发现小鼠Th2细胞株D10、G4．1产生一种新的细胞因子，能抑制Th1细胞株细胞因子mRNA的转录，称为白细胞介素10（interleukin10，IL-10）。IL-10是由多种细胞，包括淋巴细胞与淋巴细胞自发或在多种因素影响下产生的，机体能产生IL—10的细胞包括：T细胞、B细胞、单核细胞、上皮细胞、角化细胞、肿瘤细胞、骨髓瘤细胞等。小鼠和人IL-10基因都定位于第1号染色体，其基因组包括5个外显子和4个内含子，并可能有NF—kB和AP-1的结合位点。人和小鼠IL-10在DNA和氨基酸水平上分别有81％和73％的同源性。

瑞芬太尼诱发切口痛小鼠痛觉过敏时脊髓CCL21与TREM2/DAP12信号通路的关系

目的评价瑞芬太尼诱发切口痛小鼠痛觉过敏时脊髓CCL21与髓样细胞触发性受体2/连接物DNAX活化蛋白12 kDa(TREM2/DAP12)信号通路的关系。方法SPF级健康雄性C57BL/6J小鼠32只,体重18~22 g,8~10周龄,采用随机数字表法分为4组(n=8):对照组(C组)、CCL21中和抗体组(anti-CCL21组)、瑞芬太尼+切口痛组(R+I组)和CCL21中和抗体+瑞芬太尼+切口痛组(anti-CCL21+R+I组)。anti-CCL21组和anti-CCL21+R+I组鞘内注射CCL21中和抗体0.3μg(用生理盐水稀释至10μl),C组和R+I组鞘内注射生理盐水10μl,2次/d。鞘内注射完成15 min后,C组和anti-CCL21组尾静脉注射生理盐水0.1 ml;R+I组和anti-CCL21+R+I组尾静脉注射瑞芬太尼10μg/kg(用生理盐水稀释至0.1 ml),4组均连续注射4次,间隔15 min。于注射瑞芬太尼或生理盐水前24 h(T0)、停止注射后3、6、24和48 h时(T_(1~4))测定小鼠热甩尾潜伏期(TFL)和机械缩足反应阈(MWT)。最后一次测定痛阈后处死小鼠,取脊髓L4~6节段,采用荧光定量PCR法测定TREM2和DAP12的mRNA表达,采用Western blot法测定TREM2和DAP12的表达。结果与C组比较,R+I组和anti-CCL21+R+I组T_(1~4)时TFL缩短,MWT降低,脊髓TREM2和DAP12及其mRNA表达上调(P<0.05),anti-CCL21组上述各指标差异无统计学意义(P>0.05)。与R+I组比较,anti-CCL21+R+I组T_(1~4)时TFL延长,MWT升高,脊髓TREM2和DAP12及其mRNA表达下调(P<0.05)。结论脊髓CCL21可通过激活TREM2/DAP12信号通路,参与瑞芬太尼诱发切口痛小鼠痛觉过敏。

髓样细胞激活受体-2对术后认知功能障碍调控的研究进展

术后认知功能障碍(POCD)是一种急性精神功能紊乱状态,伴有认知以及注意力等的损害,与中枢神经系统炎症密切相关,但其机制仍未探索清楚。TREM2为髓样细胞2触发受体,在小胶质细胞、树突状细胞等多种细胞上表达。DAP12为重要的接头蛋白分子,介导TREM2等受体传递的信号。TREM2-DAP12是一种特异表达于小胶质细胞上的复合体,具有抗炎和促进小胶质细胞吞噬功能的作用。现对TREM2-DAP12的结构、生理功能以及对小胶质细胞在POCD的调控作用以及研究进展进行综述。