藏药三味檀香汤散对全脑缺血/再灌注大鼠海马CA1区神经元DND和凋亡的影响

目的探讨藏药三味檀香汤散对大鼠全脑缺血/再灌注损伤(I/R)海马CA1区神经元迟发性死亡(DND)、TUNEL凋亡阳性细胞数及相关凋亡蛋白caspase-3表达的影响。方法 48只成年雄性Wistar大鼠随机分为4组:假手术组、全脑缺血/再灌注模型组、藏药三味檀香汤散低、高剂量预处理组(藏药低、高剂量组)。硫堇染色下观察海马CAl区锥体神经元组织学分级(Histological grade,HG)和神经元密度(neuronal density,ND),反映DND程度;分别用TUNEL原位标记法和免疫组织化学法检测各组大鼠海马CA1区神经细胞凋亡阳性个数和caspase-3表达的变化,反映凋亡程度。结果藏药低、高剂量组HG级别降低、ND数增高、TUNEL凋亡阳性细胞数、caspase-3表达下降,与全脑缺血/再灌注组比较,均有统计学意义(P<0.05);藏药低、高剂量组间比较,后者作用强于前者,其中ND数、TUNEL凋亡阳性细胞数差异有统计学意义(P<0.05)。结论藏药三味檀香汤散预防给药可能有减轻全脑缺血/灌注损伤后海马CA1区DND、抑制caspse-3表达,进而起到神经保护作用。

Dnd1的蛋白亚细胞定位及其对HeLa细胞增殖的抑制作用

小鼠睾丸生殖细胞瘤易感基因Dnd1编码的蛋白是一个在进化中保守的RNA结合蛋白.为探讨小鼠Dnd1的蛋白亚细胞定位和对细胞增殖的影响及其机制,利用生物信息学技术,采用组合的亚细胞定位分析软件对Dnd1进行真核生物亚细胞定位预测;利用融合绿色荧光蛋白(greenfluorescent protein,GFP)定位的方法,通过构建pEGFP-Dnd1重组质粒,将重组质粒pEGFP-Dnd1转染HeLa细胞和GC-1细胞,在荧光显微镜下观察Dnd1的蛋白亚细胞定位;用MTT法和流式细胞技术测定Dnd1过表达对HeLa细胞的增殖能力的影响和细胞周期的改变;在HeLa细胞系中检测Dnd1对AP-1转录活性的影响.结果表明:①生物信息学预测Dnd1主要在细胞核表达,在细胞质中也有少量表达;荧光显微镜下观察发现,Dnd1蛋白主要定位在细胞核,在细胞质中也有少量分布;②Dnd1基因在HeLa细胞系中的过表达抑制细胞增殖和诱导细胞周期G1期阻滞;③Dnd1抑制AP-1的转录活性,从而抑制AP-1介导的转录是Dnd1抑制细胞增殖的可能机制.本研究初步明确了Dnd1的蛋白亚细胞定位及其对HeLa细胞的生长抑制作用,这为进一步研究Dnd1基因的功能建立基础.

Oligo基因芯片分析黄芪多糖对脑缺血再灌注大鼠DND的保护作用

目的:用基因芯片分析黄芪多糖(APs)对脑缺血再灌注损伤大鼠海马组织迟发性神经元死亡(DND)相关基因表达的影响,探讨其保护作用机制。方法:以博奥公司定制的包含5 705条大鼠的Oligo基因表达谱芯片,研究脑缺血再灌注4 d的大鼠海马组织基因表达谱,观察黄芪多糖对大鼠脑缺血再灌注损伤基因表达的影响。结果:脑缺血再灌注4 d的大鼠海马组织共筛选出差异表达基因9条,而这9条基因全部表达下调。结论:黄芪多糖可引起9条基因下调,其中cyp21、Ifi27、S100a9、Hipk3是参与自由基、钙超载、免疫炎症反应和凋亡的基因。Slc2a13参与葡萄糖代谢,Irp94、Fgf21、Akap5、Admr的功能还不明确。黄芪多糖通过减轻免疫介导炎症反应,来保护CA1区锥体细胞的迟发性死亡。

睾丸生殖细胞瘤易感基因Dnd1互作蛋白质的筛选与鉴定

小鼠睾丸生殖细胞瘤(testicular germ cell tumour,TGCT)易感基因Dnd1属于RNA结合蛋白基因家族成员.Dnd1在进化中具有保守性,Dnd1缺乏导致小鼠原始生殖细胞(primordialgerm cell,PGC)的丧失、TGCT的发生和部分胚胎死亡,但Dnd1作用机制还未明了.利用酵母双杂交系统,构建小鼠Dnd1基因诱饵载体pDBLeu-Dnd1,筛选10.5 d的小鼠胚胎cDNA文库,成功筛选到4个与Dnd1相互作用蛋白,其中之一为原癌基因Jun蛋白;进一步的酵母双杂交实验和GST pull down实验再次确认Dnd1与Jun蛋白之间的相互作用.研究发现Dnd1新的相互作用蛋白,这为探明其信号传导通路及Dnd1致病机制研究建立了基础.

绞股蓝总皂甙对沙土鼠短暂性脑缺血后海马DND的影响

本实验通过结扎沙土鼠双侧颈总动脉10分钟再灌流7天,造成海马迟发性神经元死亡(Delayed Neuronal Death,DND)模型,用海马CA_1区神经元密度作为指标,观察绞股蓝总皂甙(GPM)对海马DND的影响。NS组、GPM-I组和GPM-Ⅱ组的CA_1区神经元密度分别是107.50±6.63、146.18±19.75和165.30±9.24。GPM-I组、GPM—Ⅱ组与NS组比较P<0.01,P<0.0001。均有高度显著性差异。结果表明绞股蓝总皂甙对短暂性脑缺血后海马DND有明显保护作用。

提高DND气田储层预测精度和井位部署成功率的对策

DND气田上古生界储层具有厚度薄、横向非均质性强和煤层强反射干扰的特点,精确的地震储层预测十分困难,导致依据地震储层预测结果部署井位存在极大的风险。通过对DND气田储层发育地质特征和地震储层预测结果的综合分析,提出了提高DND气田储层预测精度和井位部署成功率的对策:充分发挥地质指路作用,以地质认识指导和约束地震储层预测;重视正演模拟和井点解剖寻找储层的地震反射结构;注重敏感属性的应用;充分认识反演储层预测中井约束的局限性,注意反演横向分辨率低的陷阱．力口强钻井跟踪研究及时调整储层预测结果和井位部署。

基于免疫DND的IPS触发机制研究

基于免疫DND理论,研究网络入侵防御系统的触发机制及其构建问题,提出从受害方受到的危险进行攻击的可进化分级检测与分级触发响应防御的方法。该方法为解决攻击检测中的度量问题提供了一个新的思路,且便于建立轻量级的、自适应的、分布的入侵防御系统。

强啡肽、γ-氨基丁酸及缩胆囊肽在脑缺血后的变化及其与DND的关系

在116只成功建立的大鼠脑缺血模型中，于缺血及再灌流各期对海马结构中DynA（1-13）、GABA及CCK的动态变化、缺血／再灌流神经损害的病理进行研究，发现脑缺血和再灌流期这三种物质的释放增多，且大剂量纳洛酮有防治DND的作用。

银杏叶制剂对沙土鼠短暂性脑缺血后海马DND的影响

实验在沙土鼠短暂性脑缺血模型上应用含有PAF受体拮抗剂的FGP，以观察其对沙土鼠短暂性脑缺血后海马CA1区DND的影响。结果表明：沙土鼠双侧颈总动脉结扎10分钟再灌4天模型，与对照组相比，银杏叶制剂明显增加海马CA1区存活神经元数，分别为38．50±16．31／mm和133．13±20．99／mm（P＜0．01），与Nimodipine组（182±67／mm）结呆相近（P＞0．05）。提示：银杏叶制剂能明显对沙土鼠短暂性脑缺血后海马CA1区DND有保护作用。

基于dnd基因标记的大黄鱼原始生殖细胞发生发育的初步研究

在鱼类的早期胚胎发育中生殖细胞便与体细胞分离,形成所谓的原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)。母源性基因Dead end(dnd)在胚胎发育中特异地表达于原始生殖细胞,编码一种进化上保守的RNA结合蛋白,对生殖细胞发育具有重要作用。本研究通过PCR获得大黄鱼dnd基因(Lcdnd)的部分c DNA序列,结合实时定量PCR、整胚原位杂交等技术,研究Lcdnd在各组织和胚胎发育中的表达。实时定量PCR结果显示:dnd在性腺中特异表达,且其在卵巢中的表达量高于精巢;检测的各期胚胎中都有dnd的表达,随着胚胎发育其表达量呈下降趋势。整胚原位杂交结果显示:Lcdnd在早期卵裂阶段主要分布于分裂沟,到囊胚期至原肠早期则开始定位于细胞内,原肠早期时定位在胚环中的中内胚层,且阳性信号增多,暗示此时原始生殖细胞的形成。接着原始生殖细胞沿胚环向胚体形成处(胚盾)迁移;随着胚胎的发育,发现胚体两侧的阳性信号增多;到体节发生期,阳性信号细胞分布于胚体两侧的侧板中胚层,随着体节的发生这些细胞沿背腹轴向腹部运动;发育到孵出期时,到达了发育中的原始生殖嵴。本研究首次使用dnd作为较为可靠的大黄鱼生殖细胞标记,揭示了大黄鱼原始生殖细胞的起源与迁移,为大黄鱼生殖细胞发生发育及养殖大黄鱼的育性控制研究奠定一定的基础。

DND气田17井区障壁砂坝沉积演化

DND气田太2段障壁砂坝是水平井开发效果最好的层位。文中以该气田17井区为例,基于砂坝内部岩相及测井相差异,结合海平面升降情况,研究障壁砂坝的沉积演化。研究认为,17井区障壁砂坝沉积演化分为海平面上升、下降、上升3个阶段。海平面上升,沉积物开始聚集并形成障壁砂坝雏形;海平面缓慢下降,障壁砂坝持续生长;海平面再次快速上升,砂坝被淹没。根据岩性组合特征及沉积演化,将17井区障壁砂坝按Ⅳ级层序垂向上分为3期砂体:Ⅰ期砂体在海平面上升过程中形成;Ⅱ期砂体在海平面下降过程中形成,发育程度高,是17井区障壁砂坝的主要储层;Ⅲ期砂体在海平面再次上升过程中形成。3期砂体由下至上呈现出砂坝的形成—生长—消亡的变化趋势。

军曹鱼dnd基因cDNA克隆及其在性腺周年发育过程中的表达

本研究通过cDNA末端快速扩增技术(RACE)克隆了军曹鱼(Rachycentron canadum)dnd基因(Rcdnd)的c DNA序列,全长1339 bp,其中,5′非编码区59 bp,3′非编码区173 bp,开放阅读框(ORF)1107bp,共编码368个氨基酸。Rcdnd氨基酸序列含有1段RNA识别保守基序(RRM)以及4个C端保守结构域(CR1~4),与高体(鱼师)(Seriola dumerili)dnd的一致性最高(72.3%)。系统进化分析表明,Rcdnd与高体(鱼师)的同源蛋白亲缘关系最接近。基于半定量RT-PCR的组织表达分布分析结果显示,Rcdnd在性腺中特异表达,在其他组织中均无表达。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)结果显示,在精巢发育过程(Ⅱ~Ⅴ期),Rcdnd的表达水平呈逐渐上升趋势;在卵巢发育过程(Ⅰ~Ⅲ期),Rcdnd的表达水平先显著升高后趋于稳定,在150 dph(Ⅱ期)时的表达量最高。原位杂交结果显示,不同发育时期性腺组织中,Rcdnd mRNA主要在生殖细胞中表达。在精巢中,Rcdnd mRNA集中表达于精原细胞和初级精母细胞的周缘,次级精母细胞中的杂交信号明显减弱,而精细胞和成熟精子中几乎检测不到杂交信号。在卵巢中,Rcdnd mRNA在卵原细胞中的表达最强,在初级卵母细胞中的表达较弱,其中,Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ时相卵母细胞检测到的杂交信号强度无显著差异,且杂交信号均匀分布于细胞质中。研究结果表明,Rcdnd基因可能参与军曹鱼性腺发育过程,上述结果可为揭示军曹鱼两性生殖细胞发生发育的调控机理提供理论依据。

间歇性低压低氧预处理对大鼠全脑缺血/再灌注后海马CA1区神经元DND及HSP70表达的影响

目的探讨间歇性低压低氧预处理(Hypobaric Hypoxia Preconditionin,HHP)对大鼠全脑缺血/再灌注(Global cerebral ischemia and reperfusion,GCIR)后海马CA1区神经元迟发性死亡(Delayed Neuron Death,DND)及热休克蛋白70(HSP70)表达的影响。方法将Wistar大鼠48只随机分为四组:假手术组(Sham组)、低压低氧对照组(HHP组)、全脑缺血/再灌注组(GCIR组)、低压低氧预处理+全脑缺血/再灌注组(HHP+GCIR组)。采用吴穹改良的复制间歇性低压低氧环境模型,选用四血管闭塞法复制大鼠GCIR模型。硫堇染色下观察海马CAl区锥体神经元组织学分级(Histological grade,HG)和神经元密度(neuronal density,ND),反映锥体细胞DND程度;免疫组织化学方法观察神经细胞HSP70阳性细胞表达变化,将四组结果进行统计学比较。结果 Wistar大鼠HHP+GCIR组海马CA1区较GCIR组HG分级降低、ND明显增加(P<0.05),HSP70阳性表达明显增高(P<0.05)。结论推测间歇性HHP是通过上调神经细胞HSP70的表达,减少神经元DND,发挥对脑组织的保护作用。

假日的DND狂欢

《龙与地下城》、《指环王》、《地海传说》．《星球大战》……如果你曾经为这些影片激动或者幻想过，希望成为哪个奇幻故事中的英雄，你就应该继续往下看——噢．我不是叫你扛把笨剑去哪个动漫展Cosplay一把．如果你碰巧有一个闲适的下午．不妨在网上找几个志同道合的朋友玩一把DND游戏，让自己做个地下城主。

DND16系列单相逆变器有关问题的分析

洲际集团武汉通信电源厂为给04交换机配套,自1991年12月推出第一台DND16-5kVA(当时叫DNDFO2)单相逆变器以来,现已完善成为DND16系列逆变器(包括1、2、3、5kVA)。该系列逆变器得到不少用户的支持,并且根据用户的不同要求,在原来基础上稍加改动可以有不同的应用方式。

从“博德之门”谈战棋桌游DND

最近著名游戏系列《博德之门》"老树开新花",即将再度推出新作,毫不意外地引来了一波深度玩家的叫好。但也正如预料中的一样,对那些不了解游戏背景,只是想浅尝辄止的"萌新"而言,这款游戏可就有些"不友好"了——纵然游戏制作者花费大量笔墨尽可能地解释剧情和背景.

Salmonella enteric硫修饰蛋白DptC半胱氨酸定点突变对Dnd表型的影响

【目的】Salmonella enterica serovar Cerro 87是具有硫修饰现象即Dnd表型的细菌之一,其硫修饰受dptBCDE基因簇控制,将dptBCDE克隆、转化Escherichia coli DH10B后,可赋予后者Dnd表型,而当其中dptC缺失后,Dnd表型随之丧失。本文探索S.enterica serovar Cerro 87硫修饰基因dptC在硫修饰发生过程中的作用。【方法】将DptC中6个半胱氨酸(Cys)在DNA水平上逐个定点突变,转化携带dptBCDE及其衍生系列的质粒至E.coli DH10B,检测相应受体菌Dnd表型。【结果】在DptC的6个Cys中,除C39外,其余5个突变均可导致Dnd表型丧失,说明DptC中C146、C262、C273、C280和C283均与硫修饰有关。生物信息学分析表明,这5个Cys在硫修饰细菌科属间高度保守,佐证了S.enteric DptC中这5个Cys与硫修饰有关的结论。【结论】S.enteric DptC中C146、C262、C273、C280和C283任何一个的突变,都会导致受体菌Dnd表型丧失。该结果为进一步探索DNA硫修饰的发生机制提供了线索。

小鼠Dnd1酵母双杂交系统诱饵载体的构建及自身激活检测

目的:构建用于酵母双杂交系统的诱饵载体pDBLeu-Dnd1,并检测其是否有自身激活作用。方法:设计引物引入SalⅠ、NotⅠ酶切位点,使用PCR方法从质粒pcDNA3.1-Dnd1中扩增小鼠Dnd1基因的编码区序列,连至pMD18-T载体。酶切验证及测序正确后,用SalⅠ,NotⅠ内切酶分别消化pMD-T-Dnd1及pDBLeu载体而后构建诱饵载体pDBLeu-Dnd1,并检测其在G IBCO/BRL公司的酵母双杂交系统中的自身激活作用。结果:成功构建诱饵载体pDBLeu-Dnd1,并证明其在该系统中无自身激活作用。结论:pDBLeu-Dnd1可应用该酵母双杂交系统筛选与之相互作用的蛋白。

用酵母双杂交技术筛选DND1相互作用蛋白(英文)

目的:小鼠睾丸生殖细胞瘤易感蛋白DND1是在进化中保守的RNA结合蛋白。为了进一步了解DND1的功能,我们筛选了与DND1相互作用的蛋白。方法:采用酵母双杂交系统,用Dnd1基因编码序列构建诱饵载体筛选小鼠10.5天的胚胎文库。结果:筛选小鼠胚胎cDNA文库得到4个与DND1相互作用蛋白,分别为Jun蛋白、辅肌动蛋白α、核受体结合蛋白和氯离子通道2。结论:DND1可能参与调节细胞増殖、迁移及细胞转化等过程。