AML和ALL患者骨髓DNMT1,SFRP1基因甲基化及其与临床病理特征和预后相关性研究

目的检测急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)和急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)患者骨髓中DNA甲基化转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)、分泌型卷曲相关蛋白1(secreted frizzled related protein 1,SFRP1)基因甲基化及mRNA表达水平,探讨其与临床病理特征和预后的关系。方法根据FBA(French-American-British classification systems;法-美-英分型系统)标准选取2019年11月~2020年11月于邯郸市中心医院新诊断的急性白血病患者70例,其中AML 50例和ALL 20例;另选取65例非恶性血液病患者作为正常对照组。用甲基化特异性聚合酶链式反应(methylation-specific PCR,MSP)检测所有研究对象骨髓标本中DNMT1和SFRP1基因甲基化状态,并分析两基因甲基化与AML和ALL患者临床参数之间的关系;用实时定量PCR检测所有研究对象化疗前和化疗缓解后骨髓标本中DNMT1,SFRP1和β-catenin mRNA表达;Pearson相关分析明确DNMT1,SFRP1和β-catenin mRNA水平之间的相关性;对所有患者进行随访,比较DNMT1和SFRP1基因甲基化与预后的关系。结果AML和ALL患者中DNMT1基因甲基化发生率分别为26.0%和25.0%,较对照组(73.8%)显著下降(χ^(2)=47.683,P<0.001);SFRP1基因甲基化发生率分别为78.0%和85.0%,较正常对照组(18.5%)显著增加(χ^(2)=55.265,P<0.001),差异均有统计学意义。AML组DNMT1基因甲基化与WBC水平、遗传学预后分组有明显相关性(χ^(2)=6.524,5.732,均P<0.001);SFRP1基因甲基化与WBC水平、BM水平和遗传学预后分组有明显相关性(χ^(2)=8.115,5.395,5.060,均P<0.05)。ALL组DNMT1基因甲基化只与遗传学预后分组有关(χ^(2)=4.802,P<0.05);SFRP1基因甲基化与WBC水平、遗传学预后分组有明显相关性(χ^(2)=4.920,5.115,均P<0.05)。与对照组相比,AML和ALL患者化疗前DNMT1和β-catenin mRNA表达均显著升高(t=4.807~10.456,均P<0.05),SFRP1表达显著下降(t=24.791,12.069,均P<0.05)。与化疗前相比,AML和ALL患者化疗后DNMT1和β-catenin mRNA表达显著下降(t=3.461~6.374,均P<0.05),SFRP1表达显著上升(t=17.076,7.454,P<0.05)。两组患者DNMT1与SFRP1表达呈明显负相关(r=-0.328,-0.315,均P<0.05);SFRP1与β-catenin表达呈明显正相关(r=0.682,0.728,均P<0.05);两组患者DNMT1与β-catenin表达均无明显相关性。两组患者DNMT1基因甲基化生存率高于其未甲基化生存率(χ^(2)=3.862,3.679,均P<0.05);SFRP1基因甲基化生存率低于其未甲基化生存率(χ^(2)=2.927,3.155,均P<0.05)。结论DNMT1和SFRP1基因甲基化与恶性血液病患者临床病理及预后相关,究其原因可能与DNMT1和SFRP1基因甲基化异常激活Wnt/β-catenin信号通路有关。

DNMT1蛋白通过沉默MEG3基因促进视网膜母细胞瘤增殖

目的探讨DNMT1蛋白是否通过沉默MEG3基因诱导视网膜母细胞瘤增殖。方法通过转染pcDNA-DNMT1或si-DNMT1上调或干扰DNMT1的表达水平;通过转染pcDNA-MEG3或si-MEG3上调或干扰MEG3的表达水平;用Western blot检测视网膜母细胞瘤细胞系中DNMT1蛋白表达量;用CCK-8法及EdU法检测细胞的增殖能力;用实时荧光定量PCR技术检测转染后的视网膜母细胞瘤细胞中MEG3表达量的变化;干扰DNMT1表达后,用甲基化特异性PCR检测MEG3基因启动子DNA甲基化水平的变化。结果视网膜母细胞瘤SO-RB50及HXO-RB44细胞中DNMT1蛋白表达量显著升高(P<0.05)。转染了pcDNA-DNMT1的HXO-RB44细胞中DNMT1蛋白表达增加,细胞增殖能力增加,MEG3表达量降低;转染了siRNADNMT1的SO-RB50细胞DNMT1蛋白表达减少,细胞增殖能力降低,MEG3表达量增加(P<0.05)。干扰DNMT1蛋白表达后,MEG3基因启动子DNA甲基化水平降低(P<0.05)。逆转DNMT1蛋白对MEG3基因的调控后,DNMT1蛋白调控RB细胞增殖的能力减弱(P<0.05)。结论在视网膜母细胞瘤细胞中,DNMT1蛋白表达的上调,诱导了MEG3基因启动子DNA甲基化失活,最终导致细胞异常增殖。

DNMT1在非贲门胃癌中的表达及意义

目的:探讨DNA甲基转移酶1(DNMT1)在非贲门胃癌中的表达变化及其意义。方法:采用免疫组化法检测DNMT1在70例非贲门胃癌组织以及70例对照组中的表达情况,分析DNMT1的表达水平与患者临床特征的关系。结果:DNMT1在非贲门胃癌组的阳性表达率高于正常对照组(χ2=30.8699,P=0.000);DNMT1表达与胃癌患者的肿瘤分期有关(Fisher检验,P=0.005),而与患者性别、肿瘤分化程度、淋巴结转移情况及肿瘤大小均无关(P>0.05)。结论:DNMT1可能参与了胃癌的发生发展,DNMT1检测在胃癌的诊断和防治中有一定的意义。

慢性乙型肝炎患者血清sVAP-1、DNMT1、Tim-3水平与肝功能指标及炎症因子的相关性

目的观察慢性乙型肝炎(CHB)患者血清DNA甲基化转移酶1(DNMT1)、T淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3(Tim-3)、可溶性血管黏附蛋白-1(sVAP-1)水平变化,并分析sVAP-1、DNMT1、Tim-3与肝功能指标及炎症因子的相关性。方法选取2018年4月至2020年7月期间西安市第八医院肝病科收治的93例CHB患者为研究对象,将患者分为乙型肝炎病毒(HBV)DNA阳性组(HBV DNA>1.0×10^(3)copy/mL,n=53)和HBV DNA阴性组(HBV DNA≤1.0×10^(3)copy/mL,n=40),另选取同期来我院体检的50例健康志愿者为对照组。比较三组受检者的血清sVAP-1、DNMT1、Tim-3水平及肝功能指标及炎症因子水平,采用Pearson线性相关性分析患者血清sVAP-1、DNMT1、Tim-3水平与肝功能指标及炎症因子的相关性。结果HBV DNA阳性组患者的血清sVAP-1、DNMT1、Tim-3水平分别为(762.75±102.05)ng/mL、(51.37±5.29)μg/L、(24.58±4.39)%,HBV DNA阴性组分别为(493.13±93.11)ng/mL、(38.59±4.24)μg/L、(13.28±2.35)%,两组均明显高于对照组的(184.64±54.19)ng/mL、(25.66±3.18)μg/L、(5.16±0.93)%,且HBV DNA阳性组的上述各项指标明显高于HBV DNA阴性组,差异均有统计学意义(P<0.05);HBV DNA阳性组患者的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-4(IL-4)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBIL)水平分别为(31.53±2.87)pg/mL、(21.29±4.43)ng/L、(52.96±9.32)U/L、(49.31±6.06)U/L、(37.29±3.25)μmol/L,HBV DNA阴性组分别为(23.24±2.68)pg/mL、(13.56±3.41)ng/L、(38.25±5.26)U/L、(35.68±5.17)U/L、(19.71±4.36)μmol/L,两组均明显高于对照组的(15.18±2.77)pg/mL、(4.72±0.93)ng/L、(18.38±3.09)U/L、(16.19±3.23)U/L、(9.23±2.25)μmol/L,且HBV DNA阳性组的上述各项指标明显高于HBV DNA阴性组,差异均有统计学意义(P<0.05);HBV DNA阳性组和HBV DNA阴性组患者的白蛋白(Alb)水平分别为(39.43±4.05)g/L,(51.57±5.25)g/L,明显低于对照组的(66.89±6.12)g/L,且HBV DNA阳性组明显低于HBV DNA阴性组,差异均有统计学意义(P<0.05);经Pearson线性相关性分析结果显示,sVAP-1、DNMT1、Tim-3与TNF-α、IL-4、ALT、AST、TBIL呈正相关(P<0.05),而与Alb呈负相关(P<0.05)。结论CHB患者中的sVAP-1、DNMT1、Tim-3水平存在异常升高,且与肝功能指标及炎症因子指标存在一定的相关性,可考虑作为CHB诊断的血清学指标之一。

叶酸对DNMT1和MeCP2在宫颈癌细胞中表达调节的实验研究

目的探讨宫颈癌细胞中叶酸对DNA甲基转移酶1（DNMT1）和甲基化CpG岛结合蛋白2（MeCP2）表达的调节作用。方法采用体外实验研究方法，对宫颈癌细胞caski（HPV16阳性）和C33A（HPV阴性）进行不同浓度（10、50、100、500、750、1000μg／ml）叶酸干预，分别采用Westernblot和real．timePCR方法检测两种细胞中DNMT1和MeCP2蛋白的表达量和mRNA水平。结果随着叶酸水平的升高，两种细胞的生长抑制率（C33A：r=0．984，P〈0．001；Caski：r=0．978，P=0．002）和凋亡率（C33A：r=0．989，P〈0．001；Caski：r=0．994，P〈0．001）均逐渐上升，DNMTl蛋白表达（C33A：r=－0．914，P〈0．001；Caski：r=－0．859，P=0．003）及MeCP2蛋白表达（C33A：r=－0．830，P=0．005；Caski：r=－0．981，P〈0，001）均呈逐渐降低趋势，而DNMTl和MeCP2mRNA的Q比值在两种细胞中的变化均无统计学意义（P〉0．05）。相同叶酸浓度下，DNMTl蛋白和mRNA表达水平在Caski细胞均较C33A细胞为高，而MeCP2蛋白和mRNA表达水平则在C33A细胞较Caski细胞普遍为高。结论补充叶酸可有效抑制宫颈癌细胞的增殖，促进凋亡，逆转DNMTl和MeCP2蛋白的异常表达；HPVl6感染与DNMTl功能异常对宫颈癌的发生可能有协同效应。

玻璃化冷冻对乳鼠卵巢Dnmt1和Grb10的影响研究

目的探索玻璃化冷冻对乳鼠卵巢Dnmt1和Grb10 mRNA和蛋白表达的影响。方法 26只出生10 d的C57BL/6雌性小鼠,每只乳鼠双侧卵巢均分成新鲜组和玻璃化冷冻组。免疫组织化学法检测Dnmt1蛋白在玻璃化冻融前、后卵巢组织卵泡中的表达变化;通过qRT-PCR检测Dnmt1和Grb10 mRNA在玻璃化冻融前、后卵巢组织中的表达变化;通过Western blotting方法检测Dnmt1和Grb10蛋白在玻璃化冻融前后卵巢组织中的表达变化。结果 Dnmt1在玻璃化冻融前、后的乳鼠卵巢组织各级卵泡的颗粒细胞及卵母细胞胞核表达。与新鲜组相比,玻璃化冷冻组卵巢内Dnmt1蛋白和mRNA表达水平均显著下调(P<0.05);Grb10蛋白和mRNA表达水平均显著上调(P<0.05)。结论玻璃化冷冻复苏过程导致卵巢内Dnmt1表达降低,使印记基因Grb10过表达,可能使配子糖代谢性表观遗传信息紊乱的的风险增加。