人DNMT3B7原核表达载体的构建和表达

目的:构建人类DNA甲基转移酶(DNMT)3B7原核表达载体,并进行初步表达。方法:根据Genebank中人DNMT3B7 cDNA序列设计并合成特异性引物;提取HCT116细胞总RNA并进行反转录,利用PCR技术扩增出DNMT3B7;将扩增产物克隆到原核表达载体PGEX-4T.3中,并对重组质粒进行鉴定;然后将重组质粒转化E.coli BL21,IPTG诱导表达目的蛋白。结果:PCR扩增得到人DNMT3B7的cDNA片段大小为1.1 kb,重组子利用限制性内切酶进行酶切、PCR鉴定和DNA序列分析得到原核表达载体PGEX-4T.3-DNMT3B7;IPTG诱导表达后,SDS-PAGE分析显示目的蛋白在E.coli BL21中高效表达,分子量约为40 kD。结论:成功构建了人DNMT3B7原核表达载体,完成了其在E.coli BL21中的诱导表达,为进一步在体外研究DNMT3B异构体提供了条件。