应用基因组步移克隆小鼠Doc-1R基因组序列

目的 获得小鼠 Doc- 1R基因组序列。方法 根据小鼠 Doc- 1R基因的 c DNA序列设计、合成特异引物 ,应用基因组步移策略对小鼠基因组步移文库进行扩增。以含有特殊接头 (adaptor)的小鼠基因组步移文库作为模板 ,用巢式 PCR法扩增目的片段。结果 应用此方法得到约 1.5 kb的目的片段 ,经测序分析证实 Doc- 1R基因克隆成功。此基因含有 4个外显子、3个内含子 ,外显子与内含子接头符合 GT- AG法则。结论 基因组步移方法简单、可靠、有效 。

细胞周期相关蛋白DCT1染色体及细胞定位与其组织表达的研究

目的对候选抑癌基因DOC-1R((Deleted in oral cancer-1 related,CDK2AP2)相关基因DCT1(DOC-1Rterminal1)进行染色体定位分析并观察其细胞内定位,检测该基因在人类组织中的表达。方法通过辐射杂交细胞系对其进行染色体定位分析,同时构建EGFP-DCT1质粒并转染HeLa细胞,荧光显微镜观察DCT1蛋白在细胞内的定位。此外,应用荧光定量PCR的方法检测该基因在16个正常人类组织中的表达。结果DCT1基因定位于5q31,其编码产物在HeLa细胞中定位于核膜,该基因在正常人类的16个组织中均有表达,其中在脾中表达水平较高。结论DCT1可能为细胞周期调控相关基因,在人类组织中普遍表达。