水貂阿留申病毒VP2蛋白Dot-ELISA检测方法的建立

为建立一种适合于基层快速检测水貂阿留申病毒(ADV)的检测方法,本研究将ADV的VP2基因经重叠延伸PCR法进行扩增后克隆至表达载体p GEX-4T-1中进行原核表达,将纯化的重组蛋白作为包被抗原建立了ADV的Dot-ELISA检测方法,并与对流免疫电泳(CIEP)作对照试验。结果表明,抗原最适包被浓度为20μg/m L,最适血清稀释度为1∶200,酶标二抗最适工作浓度为1∶2 000,血清和酶标抗体最适反应温度为37℃,反应时间为45 min^60 min。阻断试验和交叉试验显示与常见的貂病毒性肠炎和貂犬瘟热阳性血清无交叉反应,表明其具有良好的特异性。采用建立的Dot-ELISA和CIEP对78份临床血清样品进行检测,结果显示Dot-ELISA阳性检出率为84.6%,CIEP的阳性检出率为80.8%,敏感性高于CIEP,两者符合率为96.2%。本研究建立的Dot-ELISA检测方法简便、快速、灵敏、特异、重复性好,适合基层单位用于水貂阿留申病快速诊断和疫病普查。

重庆丰都烟区田间烟草病毒病及其Dot-ELISA检测

为明确重庆市丰都烟区田间烟草病毒病的发生情况,开展了病毒病调查,并于还苗期、伸根期、旺长期和成熟期共采集病毒病样品117 份,利用TMV、CMV、PVY、TEV、PVX、TuMV 和BBWV-2 等7 种病毒的特异性抗体对其进行Dot-ELISA检测.调查发现,病毒病症状主要包括花叶、畸形、坏死斑、脉坏死、矮化和蚀纹等类型.9 个调查点烟草病毒病的发病率在28%～84%,病情指数最低为6.67,最高为60.89.Dot-ELISA 检测结果表明,还苗期样品未检出病毒;伸根期没有检测到PVX;旺长期和成熟期均检测到7 种病毒,其中TMV 和CMV 的检出率较高,其次为TuMV 和PVY,PVX 的检出率较低.此结果表明,烟草病毒病在丰都烟区发生较普遍,且TMV 和CMV 为田间烟草病毒病的优势毒源.

Dot-ELISA检测犬瘟热病毒抗原的研究

用建立的三抗体夹心法Dot ELISA检测犬瘟热病毒 (CDV )抗原 ,其抗原最低检出量为 1.15 μg/mL ( 0 .5 762 5ng/点 ) ,经与常规ELISA对 10 4份自然感染犬的血液白细胞样本 ,60份眼结膜分泌物样本 ,73份脾、肝、淋巴结等脏器样本进行检测 ,检出的阳性率分别为 92 .3 1%、66.67%、83 .5 6%和 90 .72 %、63 .2 9%、81.86% ;两种方法检出的总阳性率分别为 83 .5 4% ( 198/ 2 3 7)和 80 .17% ( 190 / 2 3 7) ,总阳性符合率为 95 .96% ,表明两者呈高度正相关 (r =0 .92 ,P <0 .0 1)。Dot ELISA和AGID对样本检测总阳性符合率为 2 4.89% ,呈差异极显著 (X2 =3 4 0 .89,P <0 .0 1)。经电子显微镜观察验证比较 ,三抗体夹心法Dot ELISA检测的可信度为 94.74%。

Dot-ELISA检测猪胴体中沙门氏菌的研究

应用Dot-ELISA法对西宁某猪屠宰点 85份猪胴体进行了沙门氏菌的检测 ,同时采用常规分离培养鉴定技术作对照实验。结果在 85份肉样中 ,Dot-ELISA检出沙门氏菌阳性 6 5份 ,阳性率为 76 .4 7% (6 5 /85 ) ;而常规分离培养鉴定技术检出沙门氏菌阳性 6 7份 ,阳性率为 78.82 % (6 7/85 ) ,此两种方法的阳性符合率为 86 .5 7%。经统计分析 ,两种方法差异不显著 (P >0 .0 5 )。

单克隆抗体Dot-ELISA检测血吸虫病循环抗原的研究Ⅱ

将血吸虫肠相关阳极抗原单克隆抗体1B10A标记过氧化物酶后用于Dot-ELISA检测了急、慢性血吸虫病人血清中循环抗原,阳性率分别为90％、80.8％,除肺吸虫外,对其他主要的寄生虫病感染、非寄生虫感染性疾病及正常人无阳性反应。检测EPG>80病人血清中的抗原水平高于EPG<80者;病人经有效药物治疗后,粪检阳性者,大部分抗原检测转为阴性,其余抗原滴度呈不同程度下降。将该单克隆抗体与肠相关阴极抗原的单克隆抗体,分别检测同批血清,结果基本一致。将肠相关阳极抗原与阴极抗原的单克隆抗体联合应用,能增强某些弱反应。

Dot-ELISA检测副鸡嗜血杆菌血清型特异性抗原的研究

本研究在副鸡嗜血杆菌型特异性单克隆抗体的基础上建立了检测该菌 Ａ、 Ｃ 型特异性抗原的 Ｄｏｔ Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 方法，结果表明本方法在检测副鸡嗜血杆菌型特异性抗原时未呈现与其它 ８ 种常见病原体的交叉反应，新鲜肉汤的最低检出量为 Ａ 型 １３×１０６ Ｃ Ｆ Ｕ／ｍ ｌ和 Ｃ 型 ８×１０６ Ｃ Ｆ Ｕ／ｍ ｌ，抗原的最低检出量均为 ２５μｇ／ｍ ｌ，对 ２０ 份抗原、肉汤和卵黄样品的检测结果与其已知结果相符。这就证明本方法具有较好的敏感性和特异性，是一种能直接检测分离株血清型的良好方法。

单克隆抗体Dot-ELISA检测血吸虫病循环抗原的研究.Ⅰ.

将血吸虫肠相关阴极抗原的单克隆抗体3D8A联结过氧化物酶后用于直接法Dot-ELISA检测急性、慢性与晚期血吸虫病人血清中循环抗原,阳性率分别为90.6、83.2及30.7％。正常人血清及非寄生虫感染病人血清均未见阳性反应。EPG>100组血清阳性率及抗原水平高于EPG<100。慢性血吸虫病人经吡喹酮治疗后一年,粪检阴性者大部分血清抗原转为阴性;粪检阳性者血清检查仍为阳性。结果表明,肠相关阴极抗原单克隆抗体3D8A能用于Dot-ELISA检测各期病人血清中循环抗原,并能反映病人感染度与药物治疗效果。

庆大霉素快速Dot-ELISA检测方法的建立及初步应用

本研究旨在建立一种适用于快速、现场检测要求的庆大霉素残留Dot-ELISA检测方法。将硝酸纤维素膜用激光切割成小圆片,粘贴到激光打孔的塑料胶条上,制成8个圆片组成的NC膜检测条。通过条件优化,建立了基于NC膜条的庆大霉素残留直接竞争Dot-ELISA检测方法。结果表明,该方法可以快速检测牛奶等食品中的庆大霉素残留,检测灵敏度达到60 ng/mL,可用于庆大霉素残留的筛查。与微孔板ELISA相比,Dot-ELISA可以大大节省检测时间。直接竞争Dot-ELISA具有简便、快速、灵敏、直观的特点,具有推广和应用价值。

应用Dot-ELISA检测鸡毒支原体血清抗体

应用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测鸡毒支原体血清抗体＠郭建华＠陈明勇＠陈德威￥中国农业大学实验动物研究所应用Ｄｏｔ┐ＥＬＩＳＡ检测鸡毒支原体血清抗体郭建华＊陈明勇陈德威（中国农业大学实验动物研究所，北京海淀１０００９４）鸡毒支原体（ＭＧ）为慢性呼吸道病（ＣＲＤ）的...

饲料中沙门氏菌的分离鉴定与Dot-ELISA检测

[目的]建立检测饲料中沙门氏菌的Dot-ELISA法。[方法]采用Dot-ELISA法,对随机采集自西宁市某饲料厂的100份成品饲料、85份鱼粉和50份精蛋白进行了沙门氏菌检测。通过生化试验和血清学试验对饲料样品中的细菌进行了进一步的鉴定。[结果]通过Dot-ELISA检测,成品饲料、鱼粉和精蛋白中的沙门氏菌阳性率分别为38.00%、62.35%和60.00%。Dot-ELISA法与常规分离鉴定技术的符合率为82.23%。[结论]Dot-ELISA法具有较好的特异性和敏感性,与常规分离技术具有较高的符合率,可以用于饲料中沙门氏菌的检测。

应用Dot-ELISA检测羊胴体中沙门氏菌的研究

应用Dot ELISA法对西宁某屠宰点 1 0 1份羊胴体淋巴结进行了沙门氏菌的检测 ,同时采用常规分离培养鉴定技术作为对照。结果显示在1 0 1份羊胴体中 ,Dot ELISA检出沙门氏菌阳性 56份 ,阳性率为 55 44% (56/ 1 0 1 ) ;而常规分离培养鉴定技术检出沙门氏菌阳性 48份 ,阳性率为 47 52 % (48/ 1 0 1 )。 2种方法的阳性符合率为 85 71 % ,差异不显著 (P >0 0 5)。

Dot-ELISA检测减蛋综合征病毒的研究

将辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）直接标记到ＭｃＡｂ（ＩｇＧ）上，建立了检测减蛋综合征（ＥＤＳ７６）病毒的ＤｏｔＥＬＩＳＡ方法，可敏感、特异、及早、快速地检测细胞培养物和实验感染鸡样品中的病毒抗原，某发病鸡场的泄殖腔拭子样品的阳性率为４３３３％（１３／３０）。

应用Dot-ELISA检测牛胴体沙门菌

应用Dot ELISA法对西宁市某屠宰点 71份牛胴体淋巴结进行了沙门菌检测 ,同时与常规分离培养鉴定技术比较。结果 ,在 71份牛胴体样本中 ,用Dot ELISA法检出沙门菌阳性 33份 ,阳性率为 4 6 .4 8% (33/71) ;而用常规分离培养鉴定技术检出沙门菌阳性 31份 ,阳性率为 4 3.6 6 %(31/71) ;2种方法的阳性符合率为 81.82 % ,阳性检出率差异不显著 (P >0 .0 5 )。

猪附红细胞体Dot-ELISA检测方法的建立

本试验建立了一种检测猪附红细胞体抗体的Dot-ELISA方法,并确定了试验程序中最适抗原包被浓度、被检血清最适稀释度等工作条件。特异性和重复性试验结果表明,所建立的Dot-ELISA不与猪瘟等常见猪病阳性血清发生交叉反应,且稳定性高;用所建立的Dot-ELISA与IHA对70头份被检血清进行平行检测,阳性率分别为90%和60%;对20份阳性血清进行检测,Dot-ELISA和IHA平均抗体滴度分别为1∶1 012和1∶160。表明所建立的Dot-ELISA是一种比较敏感、特异和稳定的血清学检测方法,能用于猪附红细胞体的抗体检测和疾病诊断。

直接法McAb-Dot-ELISA检测日本血吸虫感染耕牛血清循环抗原的研究

将抗日本血吸虫单克隆抗体标记辣根过氧化物酶,进行直接法单克隆抗体斑点酶联免疫吸附试验(McAb-Dot-ELISA),检测日本血吸虫感染耕牛的血清循环抗原。结果,该方法对实验感染耕牛的阳性检出率为100％(32/32);对安徽、江西和湖南3省血吸虫病流行区自然感染耕牛(粪孵阳性)的阳性检出率分别为93.93％(418/445),88.50％(100/113)和81.71％(143/175);对健康耕牛的阴性符合率为98.51％(66/77),对16份感染锥虫和8份实验感染肝片吸虫的耕牛血清均未见交叉反应。提示,该方法具有操作简便、快速等优点,可作为一种新的耕牛血吸虫病免疫诊断方法在疫区基层推广应用。

McAbDot-ELISA检测卫氏并殖吸虫循环免疫复合物

应用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ法，以抗卫氏并殖吸虫囊蚴单克隆抗体ＩＦ８Ａ３检测了卫氏并殖吸虫感染犬血清循环免疫复合物动态。感染后１～２ｗｋ可以检测到免疫复合物，３～４ｗｋ阳性滴度逐渐上升，５～６ｗｋ处于较高水平，第８ｗｋ达高峰，然后较快地下降。研究结果表明，卫氏并殖吸虫囊蚴抗原特异的循环免疫复合物具有明显的期特异性；单克隆抗体Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测特异的循环免疫复合物，可用于卫氏并殖吸虫病的早期诊断和活动性感染的诊断。

Dot-ELISA检测广州管圆线虫抗体的研究

目的 研究Dot-ELISA诊断广州管圆线虫病的诊断价值。方法 用Dot-ELISA法检测广州管圆线虫感染大鼠血清抗体 ,并观察曼氏迭宫绦虫裂头蚴抗原免疫大鼠血清、猪蛔虫抗原免疫大鼠血清、日本血吸虫感染大鼠血清等 3种异源性血清有无交叉反应。结果 广州管圆线虫感染大鼠血清阳性率为 10 0 % ,猪蛔虫抗原免疫大鼠血清为 10 % ,其余检测血清均为阴性。结论 Dot -ELISA法用于检测广州管圆线虫病的诊断具有敏感性高 ,特异性强 ,并有简便快速等优点。

Dot-ELISA检测血吸虫循环抗原的方法学研究

本文观察了影响单克隆抗体Dot—ELISA检测血吸虫循环抗原的有关因素。经改进后的方法,以国产纤维薄膜为载体,0.05％Tw20作为封闭剂,整个反应时间缩短至1.5h,与原方法检测同批病人血清及正常人血清,无论敏感性、特异性与反应强度均一致。改进后的方法,节省试剂,降低成本,缩短时间,更利于推广应用。

单抗直接Dot-ELISA检测禽脑脊髓炎病毒抗原

本研究在已制备的 AEV单抗基础上建立了检测 AEV抗原的直接 Dot- ELISA方法。该方法对 AEV最低检出量为 8.0 3μg.m L-1。人工感染 1日龄 SPF鸡 ,取临床发病鸡 (6～ 1 3日龄 )相应病料 ,各病料样本病原阳性检出率分别为 :脑 98% ,胰 94% ,十二指肠 80 % ,腺胃 85%。对 1 0 0份临床自然发病鸡病料检测 ,阳性检出率为 90 %。对 1 0份 AEV病原分离阳性样品检测阳性率为 1 0 0 %。