多聚胞嘧啶结合蛋白E2诱骗RNA对DP210细胞小鼠致瘤能力的影响

目的:慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)急变中伴随着多聚胞嘧啶结合蛋白E2[poly(rC)-binding protein E2,hnRNP E2]的表达异常。本研究初步探讨hnRNP E2诱骗RNA对DP210细胞在动物体内致白血病的作用。方法:分别将稳定表达hnRNP E2诱骗RNA野生序列的DP210-pGD细胞、表达突变序列的DP210-pGM细胞以及对照组DP210细胞通过尾静脉注射CH3小鼠,观察各组小鼠的一般情况以及生存期;外周血白细胞计数(white blood count,WBC)并行外周血涂片及骨髓涂片检查;观察各组小鼠肝、脾和肺组织病理组织学变化。结果:各组小鼠注射不同细胞20 d后,DP210-pGD组小鼠毛色依然发亮,活动力和生长状况较良好,WBC为(8.36±2.81)×109/L,外周血涂片中仅见少量白血病细胞;DP210和DP210-pGM组小鼠的WBC分别为(40.52±12.89)×109/L和(38.73±8.26)×109/L(P<0.01),外周血涂片均可见较多的幼稚白血病细胞。与DP210组和DP210-pGM组小鼠相比,DP210-pGD组小鼠骨髓增生不明显,仍可见许多成熟的粒细胞,肝、脾和肺组织的病理学结构改变较少,白血病细胞浸润程度较低,且生存期明显延长(P<0.01),但最终66 d时全部死亡。结论:hnRNP E2诱骗RNA能延缓DP210细胞对小鼠的致瘤能力。

探讨电穿孔法介导转染32DP210细胞的参数

目的:采用电穿孔法将质粒pGenesil-1(简称pG)转染32DP210细胞,从中寻找最佳的参数。方法:分别采用LipofectamineTM2000、transfast、脂质体DMRIC-E和电穿孔法,将能表达G418抗性蛋白和绿色荧光蛋白(GFP)的质粒pG转染32DP210细胞;荧光显微镜下观察GFP表达并测定瞬时转染率;通过G418筛选得到稳定转染的细胞。结果:本实验室电穿孔法介导的32DP210细胞转染其最佳电转条件为电压270 V,电容950μF,DNA剂量14μg。48 h后电穿孔法的转染效率达50.81%,其它三种方法转染效率都小于3%。结论:用电穿孔法将质粒pG转染32DP210细胞是最佳的转染方法。

三氧化二砷对伊马替尼耐药bcr—abl基因突变细胞株生长抑制作用的研究

目的探讨三氧化二砷（As2O3）在体外对伊马替尼（IM）耐药bcr-abl基凶突变细胞株（简称IM耐药细胞侏）的生长抑制作用。方法采用MTT比色法观察IM敏感细胞株32Dp210和包括32Dp210^T315I。等15种IM耐药细胞株的细胞增殖能力。选择其中5种慢性粒细胞白血病（CML）常见基因突变型细胞株，经膜联蛋白V（AnnexinV）标记流式细胞术检测细胞凋亡，Western blot检测bcr-adl融合蛋白、CRKL磷酸化及细胞凋亡相关蛋白表达的变化。结果32Dp210^T315I等15种IM耐药细胞株具有不同程度的IM耐药性（IC50为IM敏感细胞株32Dp210的1．5～25．0倍）。As2O3对IM耐药细胞株的IC50值仅为32Dp210细胞的0．18—0．34。将5种CML常见的IM耐药细胞株与32Dp210比较发现，As2O3更显著地呈剂量依赖性抑制IM耐药细胞株bcr—abl融合蛋白、磷酸化CRKL蛋白的表达，诱导细胞凋亡的作朋也明显强于32Dp210。4μmol／LAs2O3可激活5种突变细胞的caspase-3、8、9蛋白表达。结论As2O3在体外对IM耐药细胞株具有比IM敏感细胞株更显著的生长抑制和诱导凋亡的作用，细胞凋亡的产生主要与easpase-3、8、9蛋白的激活有关，提示As2O3可能成为治疗IM耐药CML患者的新选择。