人胰腺癌组织中DPC4/Smad4、p21^(wafI)、p16蛋白表达的检测

背景与目的:近一半的胰腺癌存在DPC4/Smad4失活,使肿瘤细胞增殖的抑制作用丧失;p21waf1是Smad4调控的下游靶基因,而DPC4和p16基因在胰腺癌的发生中可能有协同作用。本研究拟通过研究DPC4/Smad4、p21wafI、p16蛋白在人胰腺癌中的表达情况,探讨三者之间的关系及它们在胰腺癌中的可能作用机制。方法:用免疫组化技术检测56例石蜡包埋人胰腺癌组织Smad4、p21wafI、p16的蛋白表达情况;用原位杂交、免疫组化技术、Westernblot检测5株人胰腺腺癌细胞系中DPC4/Smad4的mRNA和蛋白表达情况。结果:石蜡包埋人胰腺癌组织免疫组化显示Smad4、p21wafI和p16阳性率分别为58.93%、48.21%和42.86%,对应癌旁非癌胰腺组织阳性率分别为89.29%、87.5%和76.79%;P3、P4、P7人胰腺腺癌细胞系DPC4/Smad4的原位杂交、免疫组化及Westernblot均为阳性,而P1、P2均为阴性。统计学分析显示胰腺癌及癌旁非癌胰腺之间3种蛋白表达均有显著性差异(P<0.05),胰腺癌中Smad4与p21wafI表达之间有一定相关性(P<0.05),Smad4与p16表达之间有一定相关性(P<0.05),但p21wafI与p16表达之间无显著相关(P>0.05)。结论:胰腺癌与正常胰腺相比,Smad4、p21wafI、p16蛋白表达明显下降,其改变在胰腺癌的发生发展中可能起重要作用。

胰腺癌DPC4/Smad4基因突变及表达

目的:探讨胰腺癌DPC4/Smad4基因突变和表达的意义及临床应用价值,并分析了DPC4/Smad4基因表达与胰腺癌病理特征的关系。 方法:采用聚合酶链反应-单链构像多态性分析(PCR-SSCP)-银染技术和直接测序法检测了胰腺癌组织中DPC4/Smad4基因第8及第11外显子突变,并采用原位杂交方法检测DPC4/Smad4 mRNA的表达。 结果:23例胰腺癌中2例DPC4第8外显子DNA片段出现异常泳动带,1例DPC4第11外显子出现异常泳动带,突变率为13.04％。对其中阳性标本进行测序,1例表现为点突变。DPC4/Smad4 mRNA在胰腺癌组织表达的阳性率52.2％(12/23),较癌周胰腺组织90％(9/10)表达阳性率降低(P<0.05),随着胰腺癌分化程度不同,表达的阳性率不同,分化程度越差,表达率越低;分化程度越好,表达率越高,表明DPC4/Smad4基因表达与肿瘤的分化程度呈正相关,而与胰腺癌病理分期、淋巴结转移无显著相关(P>0.05),胰腺癌DPC4/Smad4 mRNA在Ⅰ,Ⅱ期表达率63.6％(7/11)与Ⅲ,Ⅳ期表达率41.7％(5/12)相近(P>0.05),伴有淋巴结转移胰腺癌DPC4/Smad4 mRNA表达率41.7％(5/12)与不伴有淋巴结转移者表达率63.6％(7/11)也相似(P>0.05)。 结论:胰腺组织与胰腺癌组织可存在DPC4/Smad4 mRNA表达的差异,DPC4/Smad4 mRNA的表达与胰腺癌分化程度相关。DPC4基因的失活在胰?

子宫颈鳞状细胞癌中△Np63α、DPC4/Smad4和P21的表达及其临床意义

目的研究△Np63α、DPC4/Smad4和P21在子宫颈鳞状细胞癌中的表达情况。方法采用免疫组织化学ElivisionTMPlus法检测100例子宫颈鳞状细胞癌组织、40例子宫颈上皮内瘤变(CIN)和40例正常子宫颈组织中△Np63α、DPC4/Smad4和P21蛋白的表达情况。分析三者在子宫颈鳞状细胞癌的发生发展中的相互作用,及其与子宫颈鳞状细胞癌发生、发展和预后的关系。结果从正常子宫颈组织到子宫颈上皮内瘤变及子宫颈鳞状细胞癌,△Np63α和DPC4/Smad4的表达逐渐下降,P21的表达逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.01);同时,三者的表达均与肿瘤的分化程度、临床分期和淋巴结转移有关(P<0.01)。另外,△Np63α与DPC4/Smad4的表达呈正相关关系(r=0.581,P<0.05);而DPC4/Smad4和△Np63α的表达与P21的表达均成负相关(r=-0.449,r=-0.254,P均<0.05)。同时,生存分析显示:△Np63α和DPC4/Smad4阳性表达组5年生存率显著高于其阴性表达组,差异有显著性(P<0.001);而P21阳性表达组则显著低于阴性表达组,差异有显著性(P<0.05)。结论△Np63α、DPC4/Smad4和P21的表达与子宫颈癌组织的发生发展、转移和预后等均有关;联合检测三者的表达情况,对子宫颈鳞状细胞癌的进展及预后判断有重要意义。

CD109、DPC4/Smad4在食管鳞状细胞癌中的表达及其相关性

目的探讨CD109和DPC4/Smad4的表达与食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)发生发展的关系,以及二者的相关性。方法采用免疫组化ElvisionTMplus法检测正常食管黏膜组织、食管鳞状上皮非典型增生(包括轻、中、重度)、食管鳞状细胞原位癌以及ESCC(包括高分化、中分化和低分化)中CD109和DPC4/Smad4的表达情况。结果 (1)CD109在ESCC中的阳性表达率高于在食管正常黏膜、非典型增生和原位癌,差异有统计学意义(P<0.05);而DPC4/Smad4在ESCC中的阳性表达率低于在食管正常黏膜、非典型增生和原位癌,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)在轻、中、重度非典型增生和原位癌中,CD109的表达阳性率逐渐增加,组间差异有统计学意义(均P<0.05);而DPC4/Smad4的表达逐渐下降,组间差异有统计学意义(P<0.05)。(3)随ESCC分化程度的降低,CD109表达增加,而DPC4/Smad4表达下降,差异均有统计学意义(P<0.05);(4)ESCC中CD109与DPC4/Smad4的表达呈负相关(rs=-0.354,P<0.05)。结论 CD109和DPC4/Smad4与食管鳞状细胞癌的发生发展密切相关,二者在ESCC的发生发展中呈负相关。

DPC4/Smad4在胰腺癌组织中的表达

目的检测胰腺癌组织和正常胰腺组织中DPC4/Smad4基因的表达差异,探讨其在胰腺癌发病机制中的作用。方法分别运用RT-PCR和免疫组化技术检测40例胰腺癌和36正常胰腺组织中的DPC4mRNA及蛋白的表达。结果胰腺癌组织中DPC4阳性16例(40%);正常胰腺组织的DPC4的阳性表达率100%(36/36)。免疫组化显示癌组织中的弥漫阳性数为4例,局灶阳性数为10例,阳性表达率35%(14/40);正常胰腺组织的弥漫阳性数为16例,局灶阳性数为20例,阳性表达率100%(36/36)。两者比较有显著性差异(P<0.05)。结论DPC4基因在胰腺癌组织中有明显的表达异常,可能与胰腺癌的发病有一定的关系,可考虑作为胰腺癌患者一个临床诊断或预后的指标。

胰腺癌组织DPC4/Smad4 mRNA表达的临床意义

目的 观察DPC4/Smad4 mRNA在胰腺癌组织中的表达及其临床意义。方法 应用原位杂交技术对23例胰腺癌组织中的DPC4/Smad4 mRNA表达进行研究。结果 胰腺癌组织中DPC4/Smad4 mRNA表达率为52.2％（12/23）,低于癌周组织表达率9/10。统计学分析显示,DPC4/Smad4mRNA表达与胰腺癌病理分级呈显著相关（P<0.05）,与胰腺癌临床分期及有无局部淋巴结转移间无显著相关（P>0.05）。结论 DPC4/Smad4 mRNA基因表达有可能作为胰腺癌诊断与鉴别诊断的生物学指标之一。

结直肠癌中DPC4/SMAD4基因杂合性缺失及生物学意义

目的分析我国散发性结直肠癌肿瘤组织中,DPC4/SMAD4基因杂合性缺失的发生情况。方法利用D18S46、D18S363、D18S474、D18S535和D18S877共5个跨DPC4基因区域的微卫星位点,采用微卫星分析方法,对25例散发性结直肠癌相关位点的杂合性缺失(LOH)进行了分析。结果至少1个位点呈多态性的病例为100%,DPC4/SMAD4基因LOH发生率为60%。结论等位基因杂合性缺失是中国人散发性结直肠癌中DPC4基因失活的重要机制。

恶性肿瘤中TGF-β_1信号传递分子DPC4/Smad4的研究进展

DPC4/Smad4基因是新近被鉴定的一个肿瘤抑制基因 ,其编码的DPC4/Smad4蛋白是TGF β信号传导通路中的重要传导蛋白 ,是TGF β配体、受体结合后后续信号传导的胞质递质 ,参与TGF β受体激活后的信号传导。DPC4/Smad4调控的下游目的基因有p2 1WAF1、uPA、PAI 1、VEGF、TSP 1。转化生长因子 -β(transforminggrowthfactorbeta ,TGF β)信号传导通路的配体、受体、胞内信号传导分子Smad蛋白及其调控的下游目的基因等组成一个肿瘤生长的负性调节 ,通路中任何一个元件的异常都可引起信号传导紊乱 。

石蜡包埋人胰腺癌组织中DPC4/SMAD4/MADH4基因的改变

目的研究石蜡包埋人胰腺癌组织中DPC4/SMAD4/MADH4基因的改变。方法用PCR-SSCP、PCR产物直接测序法检测46例石蜡包埋人胰腺癌组织中DPC4基因改变情况,用原位杂交(ISH)、免疫组织化学(IHC)检测56例石蜡包埋人胰腺癌组织DPC4的mRNA、SMAD4蛋白表达情况。结果胰腺癌DPC4基因第1、2、3、4、8、11外显子的纯合性缺失率为28.26%,突变率为21.74%,测序显示有3例无义突变,5例错义突变,1例插入、缺失及错义突变,1例插入突变。ISH、IHC显示胰腺癌DPC4/SMAD4阳性率分别为53.57%、58.93%,而对应正常胰腺阳性率分别为91.07%、89.29%。统计学分析表明胰腺癌与正常胰腺有显著性差异(P<0.05)。32例胰腺癌进行了PCR-SSCP、测序、ISH和IHC实验,四者结果一致者28例,符合率为87.50%,其中基因改变与ISH符合率为87.50%,基因改变与IHC符合率为96.88%。56例胰腺癌的ISH与IHC符合率为91.07%,统计学分析显示上述三组阳性率间均无显著性差异(P>0.05)。结论人胰腺癌纯合性缺失和突变是DPC4失活的主要机制,胰腺癌与正常胰腺相比,SMAD4表达明显下降,DPC4作为一种抑癌基因,其改变可能为胰腺癌的重要分子事件,在胰腺癌的形成中可能起重要作用。

抑癌基因DPC4/smad4、P16在食管鳞状细胞癌中的表达及其临床意义

目的研究食管鳞状细胞癌中DPC4/smad4、P16的表达情况及其与患者生存预后之间的关系。方法采用免疫组织化学ElivisionTMplus法检测80例食管鳞状细胞癌和30例正常食管粘膜组织抑癌基因DPC4(DPC4/smad4)和p16的表达情况。结果正常食管粘膜组织中DPC4/smad4、P16的表达阳性率分别为80.0%和93.0%,而在食管鳞状细胞癌组织中二者表达阳性率分别为43.7%和31.1%,差异均有显著性(P<0.01)。食管鳞状细胞癌中,DPC4/smad4、P16阳性表达与患者的性别、年龄、肿瘤的大小均无相关性(P>0.05);而与肿瘤分化程度、淋巴结转移与否、临床病理分期具有相关性(P<0.01)。癌组织中,DPC4/smad4和P16的表达成正相关性(r=0.898,P<0.01)。结论 P16与DPC4基因的失活与食管鳞状细胞癌发生密切相关,在食管鳞状细胞癌中检测P16和DPC4的表达情况可以帮助临床分期评估预后。

DPC4/Smad4基因转染对胰腺癌细胞体外生长的抑制作用

目的观察抑癌基因DPC4/Smad4对胰腺癌细胞生长的抑制作用。方法将人全长DPC4/Smad4cDNA亚克隆到逆转录病毒载体pLXSN中,分别导入包装细胞GP+E86和PA317,经G418筛选获取阳性抗性克隆。收集病毒上清液,转染至胰腺癌BxPC-3细胞;获稳定表达后,观察其对BxPC-3体外生长的抑制作用。结果聚合酶链反应扩增证实GP+E86、PA317/pLXSNDPC4+细胞中有外源性DPC4/Smad4基因整合;DPC4基因转染BxPC-3细胞后,可获得稳定表达,并可显著抑制胰腺癌细胞的生长和集落形成,下调癌细胞内VEGF基因的表达。结论将DPC4/Smad4逆转录病毒载体转染到人源性胰腺癌细胞后,可显著抑制癌细胞的生长及血管形成能力。

DPC4/SMAD4在子宫内膜癌中的表达及意义

目的探讨Smad4蛋白在子宫内膜癌中的表达情况及其意义。方法应用免疫组织化学SP方法检测 56例子宫内膜癌Smad4的表达情况,并与 30例正常子宫内膜和 42例各型增生性子宫内膜对比。结果Smad4在子宫内膜癌中的表达明显低于正常子宫内膜和单纯性增生性子宫内膜(P<0. 01,P<0. 05),且与组织学分级及临床分期明显相关 (P<0. 01,P<0. 05),而与肌层浸润深度无关。结论Smad4蛋白的表达可能在子宫内膜癌的发生发展及判断预后方面具有重要作用,可作为重要的生物学标记物。

胰腺癌组织中DPC4/Smad4的表达及临床意义

目的 探讨DPC4 /Smad4在胰腺癌组织中的表达及意义。方法 采用免疫组织化学SABC法,对34例胰腺癌和慢性胰腺炎组织进行DPC4 /Smad4表达水平研究。结果 DPC4 /Smad4蛋白在胰腺癌组织中的阳性表达低于慢性胰腺炎组织(P <0 .0 5 ) ,患者性别、年龄、肿瘤大小、部位、病理分型、组织学浸润之间的表达差异无统计学意义(P >0 .0 5 )。结论 DPC4作为一种抑癌基因,其改变对胰腺癌的发生、发展可能起重要作用。

胰腺癌与DPC4/Smad4基因

胰腺癌恶性程度高,在男性、女性中发病率类似,患者病死率接近于发病率,每年造成大约213 000人死亡[1].在世界范围内胰腺癌病死率位居肿瘤病死率的第8位[2],在欧美则位居肿瘤的第4位[3].胰腺癌患者5年生存率＜5.0％[4],手术是目前胰腺癌患者获得长期生存的唯一治疗手段,然而超过60.0％的患者首次诊断时已经发生局部浸润或远处转移,只有10.0％～20.0％的患者能够获得手术机会.

DPC4/Smad4基因失活与幼年性息肉综合征发病的关系

幼年性息肉综合征(JPS)是一种以消化道多发幼年性息肉为特征的少见疾病,存在潜在恶性。Smad4蛋白是DPC4基因的编译蛋白,在TGF-β信号转导中有非常重要的地位。许多研究表明DPC4/Smad4基因失活在JPS患者的诊治中具有非常重要的作用,现对DPC4/Smad4在JPS发病机制中的作用作一综述。

The relationship between loss expression of DPC4/Smad4 gene and carcinogenesis of pancreatobiliary carcinoma

Objective: To clarify the relationship between loss of DPCA gene expression and pathogenesis of pancreato- biliary carcinoma. Methods: 75 slides of normal duct (20), hyperplasia (15), dysplasia (15), invasive carcinoma (25) from patients with pancreatic diseases including pancreatic carcinoma (25 patients), chronic pancreatitis (6), pancreas injury (2) and 71 slides of common bile duct (CBD) carcinoma (38), gallbladder carcinoma (18), hilar bile duct (HBD) carcinoma (15) from patients with primary biliary tract carcinoma were analyzed for the expression of DPC4 protein by im- munohistochemical staining. Results: All specimens from 20 cases of normal duct and 15 cases of hyperplasia showed marked expres- sion of DPC4 protein. The frequency of loss expres- sion of the DPC4 gene was 33 % in dysplasia, and 48% in invasive carcinoma. There was a significant statistical difference between byperplasia and dyspla- sia (P<0.01) and in dysplasia vs invasive carcinoma (P<0.05). The frequency of loss expression of the DPC4 gene was 47.3% in CBD carcinoma, 11% in gallbladder carcinoma, and 13% in HBD carcinoma. The frequency of loss expression of the DPCA gene was significantly different in CBD carcinoma vs gall- bladder carcinoma and HBD carcinoma (P<0.01). Conclusions: Inactivation of the DPC4 gene occurs late in the neoplastic progression of pancreatic carci- noma. The frequency of DPC4 gene alternation was different in various locations of biliary tract carcino- ma. In CBD carcinoma, this frequency is similar to that in pancreatic carcinoma, indicating their similar molecular alternations.

绝经后女性患者血清Smad4和Osterix水平与骨密度及骨折发生率的相关性分析

目的分析绝经后女性患者血清Smad同源物4(Smad4)和成骨细胞特异性转录因子(Osterix)水平与骨密度(BMD)及骨折发生率的相关性。方法选取2020年5月至2022年5月西安交通大学第二附属医院收治的157例45~70岁绝经女性作为研究对象,按BMD将患者分为BMD正常组(n=51)、BMD减少组(n=59)、骨质疏松症(OP)组(n=47);根据是否骨折分为骨折组(n=48)和非骨折组(n=109)。检测研究对象血清Smad4、Osterix、β胶原降解产物(β-CTX)、Ⅰ型胶原氨基端延长肽(P1NP)、骨桥蛋白(OPN)及N端骨钙素(N-MID)水平;分析血清Smad4与Osterix的相关性,及血清Smad4、Osterix与骨代谢指标间的相关性,以及影响患者发生OP的因素。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清Smad4、Osterix水平对发生骨折风险的预测价值。结果与BMD正常组比较,BMD减少组和OP组的β-CTX、P1NP、OPN、N-MID依次升高,股骨BMD、腰椎L1-4BMD依次降低(P<0.05);BMD减少组和OP组的血清Smad4和Osterix水平依次降低(P<0.05);OP组骨折发生率显著高于BMD正常组和BMD减少组(P<0.001),BMD减少组骨折发生率显著高于BMD正常组(P=0.027)。骨折组的血清Smad4、Osterix水平显著低于非骨折组(P<0.05)。Pearson分析结果表明,Smad4和Osterix的表达水平呈正相关(P<0.05);Spearman分析结果表明,Smad4表达水平与β-CTX、P1NP、OPN和N-MID呈负相关(P<0.05),与股骨BMD和腰椎L1-4BMD呈正相关(P<0.05);Osterix的表达水平与β-CTX、P1NP、OPN和N-MID呈负相关(P<0.05),与股骨BMD和腰椎L1-4BMD呈正相关(P<0.05)。多因素Logistic回归分析表明,低水平Smad4、Osterix、股骨BMD、腰椎L1-4BMD是影响OP发生的危险因素(P<0.05)。绘制ROC曲线结果显示,血清Smad4预测骨折风险的曲线下面积(AUC)为0.937,血清Osterix预测骨折风险的AUC为0.911,二者联合预测骨折风险的AUC为0.974,二者联合优于血清Smad4和Osterix各自单独诊断(Z联合vs.Smad4=3.843、Z联合vs.Osterix=2.386,P<0.05)。结论绝经后OP患者血清Smad4和Osterix呈低表达,与患者的骨代谢生化指标和BMD密切相关,且是影响OP发生的独立危险因素,二者联合可以更好地预测患者发生骨折的风险。

基于TGF-β1/Smads信号通路探讨2-十二烷基-6-甲氧基-2,5-二烯-1,4-环己二酮抗肝纤维化的作用机制

目的探讨2-十二烷基-6-甲氧基-2,5-二烯-1,4-环己二酮(2-dodecyl-6-methoxycyclohexa-2,5-diene-1,4-dione,DMDD)对CCl_(4)致大鼠肝纤维化的影响及潜在作用机制。方法采用50%CCl_(4)复制肝纤维化模型,检测血液中门冬氨酸转移酶(aspartate transferase,AST)、丙氨酸转移酶(alanine transferase,ALT)、白蛋白/球蛋白(albumin/globulin,A/G)、总蛋白(total protein,TP)、总胆红素(total bilirubin,T-BIL)、大鼠透明质酸(hyaluronic acid,HA)、层黏连蛋白(laminin,LN)、Ⅲ型胶原(collagen typeⅢ,ColⅢ)和Ⅳ型胶原(collagen typeⅣ,ColⅣ)。HE和Masson染色观察肝脏组织病变和纤维形成情况。免疫组织化学法检测肝脏组织中α平滑肌肌动蛋白(αsmooth muscle actin,α-SMA)、Ⅰ型胶原(collagen typeⅠ,ColI)、转化生长因子β1(transformed growth factor-β1,TGF-β1)、Smad2、Smad7蛋白表达水平。RT-PCR法检测肝脏组织中α-SMA、ColI、TGF-β1、Smad7mRNA水平。Western blot法检测肝脏组织中TGF-β1、Smad4、Smad7蛋白表达水平。结果与正常对照组相比,模型组血清AST、ALT、TP、T-BIL、HA、LN、ColⅢ、ColⅣ水平明显升高,A/G水平明显降低,肝脏HE和Masson染色显示有大量纤维形成,说明造模成功。与模型组相比,DMDD给药组大鼠AST、ALT、TP、T-BIL、HA、LN、ColⅢ、ColⅣ含量和α-SMA、ColI、TGF-β1、Smad2、Smad4mRNA及蛋白水平显著下调,A/G、Smad7水平上调。肝脏HE和Masson染色结果显示纤维增生明显减少。结论DMDD对CCl_(4)诱导的肝纤维化具有保护作用,其机制可能与TGF-β1/Smads信号通路有关。

异氟醚通过BMP4/Smad信号通路对自发性高血压大鼠脑损伤的作用机制研究

目的:探究异氟醚通过调节骨发生形态蛋白4(BMP4)及其下游Smad蛋白对自发性高血压大鼠(SHR)脑损伤的作用机制。方法:采用随机数字表法将48只SHR分为模型组、异氟醚组、阳性药物组、异氟醚+LDN193189组,健康大鼠作为健康对照组,每组12只。各组大鼠分别放入氧气箱中,健康对照组、模型组、阳性药物组大鼠通入特殊气体(30%O_(2)、70%N_(2))1 h,异氟醚组、异氟醚+LDN193189组通入混杂2%异氟醚的特殊气体1 h,通过麻醉气体检测仪检测异氟醚含量,确保异氟醚浓度始终保持在2%。通气结束后,异氟醚+LDN193189组大鼠腹腔内注射BMP4/Smad通路抑制剂溶液20μL(LDN193189,5 mg/kg),阳性药物组大鼠腹腔内注射缬沙坦溶液20μL(10 mg/kg),健康对照组、模型组、异氟醚组大鼠腹腔内注射等量的生理盐水。氧气箱通气实验及注射每日1次,持续10 d。无创血压检测仪检测尾动脉收缩压变化;神经学行为评分评价行为功能;脑含水量检测脑水肿程度;原位末端转移酶标记法(TUNEL)染色和尼氏染色观察海马组织病理学变化及神经元损伤情况;荧光定量聚合酶链式反应(PCR)及蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测海马组织BMP4、Smad2 mRNA及蛋白表达水平。结果:与模型组比较,异氟醚组、阳性药物组、异氟醚+LDN193189组大鼠海马神经细胞凋亡减少,尼氏小体增多,血压、神经学评分、脑组织含水量显著降低,BMP4、Smad2 mRNA及蛋白表达量显著升高(P<0.05);与异氟醚组比较,异氟醚+LDN193189组大鼠神经细胞凋亡增多,尼氏小体急剧减少,血压、神经学评分、脑组织含水量显著升高,BMP4、Smad2 mRNA及蛋白表达量显著降低(P<0.05);异氟醚组与阳性药物组各项数据差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:异氟醚可通过促进BMP4/Smad信号通路减轻SHR脑损伤。