DPF2基因RNA干扰对人胰腺癌细胞PANC-1增殖、凋亡和细胞周期的作用研究

目的已知DPF2参与白血病以及肿瘤的发生,但是DPF2是否参与胰腺癌发生和进展还不清楚,因此观察了DPF2基因RNA干扰对胰腺癌细胞系PANC-1细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法采用慢病毒介导的DPF2基因RNA干扰敲低PANC-1细胞的DPF2表达,通过克隆形成实验和MTT实验检测DPF2基因RNA干扰对PANC-1细胞增殖的作用,通过流式细胞术检测DPF2基因RNA干扰对PANC-1细胞凋亡和细胞周期的作用。结果慢病毒介导的DPF2基因RNA干扰中剂量和高剂量(2μL和4μL)使PANC-1细胞的DPF2表达明显降低。与阴性对照组比较,DPF2基因RNA干扰明显抑制PANC-1细胞活力和克隆形成,还促进PANC-1的凋亡。此外,DPF2基因RNA干扰引起细胞周期的S期阻滞,明显减少G2/M周期的细胞数量。结论 DPF2可能参与胰腺癌细胞PANC-1的增殖、凋亡过程和细胞周期的调控,通过慢病毒介导的DPF2基因RNA干扰敲低DPF2蛋白表达,可能为寻找潜在的抗胰腺癌的新方法提供实验依据。

DPF2干扰慢病毒感染人胚胎干细胞建立稳定细胞系

目的对DPF2干扰慢病毒感染H9细胞,获得稳定的人胚胎干细胞克隆细胞系的方法学探讨。方法将各型带有GFP荧光标签的DPF2-RNAi慢病毒导入H9细胞中,嘌呤霉素筛选前后,相差和荧光显微镜下观察细胞形态和细胞感染效率;Western blot鉴定感染后的各组H9细胞系内DPF2蛋白表达水平。结果成功获得慢病毒感染后的H9稳定细胞系,成功筛选出#25540 DPF2-RNAi慢病毒,其沉默或敲低H9细胞的效率更高,稳定性更好。结论应用携带DPF2-RNAi的慢病毒感染人胚胎干细胞,使目标基因沉默,探索建立稳定细胞系的方法,为进一步研究提供细胞模型。