基于In Silicon模拟消化的北极虾DPP-Ⅳ抑制肽活性分析

北极虾具有很高的营养价值,在食品领域已引起越来越多的关注。对北极虾蛋白进行In Silicon模拟消化获得寡肽,通过PeptideRanker活性评分及理化性质分析,从中筛选出具有潜在生物活性的寡肽。使用ToxinPred分析和BIOPEP-UWM生物活性预测,发现部分寡肽具有二肽基肽酶-Ⅳ(dipeptidyl peptidase-Ⅳ,DPP-Ⅳ)抑制活性,最终确定WFP(一种三肽,Trp-Phe-Pro)具有最优的DPP-Ⅳ抑制活性肽。分子对接表明,WFP和DPP-Ⅳ能够形成稳定的复合物,其结合能为-6.93 kcal/mol,进一步研究表明,WFP通过与DPP-Ⅳ S1、S2、S3三个活性口袋中的9个氨基酸残基发生相互作用而抑制其活性。本研究为阐释北极虾营养价值及生物活性肽的开发提供了理论依据。

牡蛎DPP-Ⅳ抑制肽的结构特征及其协同花色苷的活性增效作用研究

为探讨牡蛎肽对二肽基肽酶Ⅳ(dipeptidyl peptidaseⅣ,DPP-Ⅳ)的抑制活性及其协同花色苷的增效作用,通过酶解法制备牡蛎肽,对其结构进行表征,采用体外DPP-Ⅳ活性抑制模型与Compusyn协同计算模型分析牡蛎DPP-Ⅳ抑制肽协同花色苷抑制DPP-Ⅳ活性的增效作用。结果表明:牡蛎肽的分子质量主要集中在3 kDa以下(55.44%),其氨基酸组成中支链氨基酸(branched chain amino acids,BCAAs)和脯氨酸(Pro)占疏水性氨基酸总量的60.84%;肽谱分析显示牡蛎肽中主要的17条肽段N端富含BCAAs和Pro,具有显著的DPP-Ⅳ抑制肽结构特征。筛选合成的5条肽(FPVGR、APPNIT、IAPPERK、LDFYLDIP、LAIL)中FPVGR的DPP-Ⅳ抑制活性最强(P<0.05);6种常见的花色苷:芍药色素/矢车菊素/锦葵色素/飞燕草素/天竺葵色素/矮牵牛色素-3-O-葡萄糖苷(Pn3G,C3G,Mv3G,D3G,Pg3G,Pt3G)中Pn3G、C3G和Mv3G的DPP-Ⅳ抑制活性最强(P<0.05);协同作用研究显示FPVGR与Pn3G/C3G/Mv3G均具有协同抑制DPP-Ⅳ的作用(当抑制率为50%时,CI值分别为0.89、0.93、0.89)。该研究为进一步开展DPP-Ⅳ抑制肽和花色苷的活性增效研究提供了科学依据。

DPP-Ⅳ抑制肽联合运动对2型糖尿病的改善

糖尿病已成为严重的全球性公共卫生问题,目前临床应用的大多数降血糖药物,都伴有一定副作用,严重影响患者的生活质量。因此,迫切需要关注延缓糖尿病及其并发症的非药物干预策略,如营养摄入和运动干预。采用DPP-Ⅳ抑制肽联合运动进行早期干预,可以延长运动产生的内源性GLP-1活性,是预防糖尿病和改善其治疗的理想选择。综述DPP-Ⅳ抑制肽、运动改善糖尿病机制,为评估联合治疗策略的基本机制提供依据。

治疗2型糖尿病药物二肽基肽酶Ⅳ(DPP-4)抑制剂的研究进展

2型糖尿病是最常见的慢性病之一。DPP-4抑制剂是治疗2型糖尿病的新药,目前已有大量研究报道了不同结构的DPP-4抑制剂。本文主要根据当前进入临床前和临床研究阶段的DPP-4抑制剂候选药物的数据,对DPP-4抑制剂的化学结构类型进行分类,综述它们的药理、药效和构效关系,并对DPP-4抑制剂的研发进展进行展望。

胃转流术对2型糖尿病大鼠降糖作用及DPP-Ⅳ分泌的影响

上世纪50年代,减肥手术开始用于治疗肥胖症,最初的临床观察发现,肥胖患者术后不仅体重显著下降,而且其并发的非胰岛素依赖型糖尿病得到意想不到的治愈或改善。但这一现象并未引起关注,至1998年,East Carolina大学Brody医学院的Pories等在Annals of Surgery杂志报道了减肥手术后的随访研究结果,才引起了学术界的高度重视。

口服降糖药二肽基肽酶Ⅳ(DPP-4)抑制剂的多器官保护作用

二肽基肽酶Ⅳ(DPP-4)抑制剂是近年来新上市的一种新型口服降糖药物。DPP-4抑制剂通过抑制DPP-4来抑制胰岛素多肽(GIP)和胰高血糖素样肽1(GLP-1)降解,发挥降低血糖的作用。DPP-4抑制剂不仅能双向控制血糖,且具有降糖外的胰腺、心血管、肾脏、肝脏等多器官保护作用和抗炎作用。本文对已有的DPP-4抑制剂及其多器官保护作用进行综述,总结其优势及进一步发展的趋势,为临床用药提供参考。

具有DPP-Ⅳ抑制活性的酪蛋白糖肽分离纯化及其序列鉴定

采用牛乳酪蛋白糖巨肽制备酪蛋白糖肽,并分析其对二肽基肽酶-Ⅳ(dipeptidyl peptidase-Ⅳ, DPP-Ⅳ)活性的抑制作用,筛选DPP-Ⅳ抑制活性最强的酪蛋白糖肽,并进行分离鉴定。结果表明:(1)酪蛋白糖肽的DPP-Ⅳ抑制率最高达54.55±3.65%;(2)经葡聚糖凝胶G-25(Sephadex G-25)分离得到两个组分,其中F1组分具有较强的DPP-Ⅳ抑制活性,抑制率达63.27±3.24%;(3)进一步利用反相高效液相色谱及液相色谱串联质谱从F1组分中分离并鉴定得到3条DPP-Ⅳ抑制肽,肽序列分别为MAIPPKKNQDKT、PPKKNQDKTEIPTI、SPEVIESPPEIN。研究结果表明酪蛋白糖巨肽经酶解获得的酪蛋白糖肽具有DPP-Ⅳ抑制活性,具备作为降糖活性功能性配料开发的潜在性。

Identification and dipeptidyl peptidase Ⅳ(DPP-Ⅳ) inhibitory activity verification of peptides from mouse lymphocytes

The objective of this study was to isolate and identify the intracellular bioactive peptides from mouse lymphocytes before and after lipopolysaccharide(LPS)stimulation,to explore novel peptides and to research the bioactive function.Mouse spleen lymphocytes were isolated and cultured with LPS stimulation(experimental group)or not(control group)to collect intracellular peptides.Totally 385 peptides were analyzed by nanoliter liquid phase-Q Exactive quadrupole ultra-high resolution orbitrap mass spectrometer(Nano LC-Q Exactive Plus)and identifi ed by PEAKS X software.After compared with peptides reported,131 novel peptides were discovered,which then were predicted bioactivity by Peptide Ranker and 6 peptides with high bioactivity were predicted function by BIOPEP-UMW database.Prediction data showed that they may have dipeptidyl peptidase IV(DPP-IV)inhibitory activity.Finally,two peptides showed better potent inhibition were verifi ed with competitive and noncompetitive modes.

DPP-Ⅳ抑制剂联合胰岛素强化降糖治疗对胰岛修复的影响

目的:考察DPP-Ⅳ抑制剂联合胰岛素强化降糖治疗对胰岛修复的影响。方法:选取90例初诊2型糖尿病患者随机分为观察组和对照组,每组45例。观察组患者给予预混型胰岛素早、晚餐前皮下注射治疗,设定靶血糖值(fasting blood glucose,FBG)<6.1 mmol/L,2h PG<7.8 mmol/L,沙格列汀起始剂量5 mg/次,1次/d。对照组给予胰岛素早预混型胰岛素早、晚餐前皮下注射治疗,设定靶血糖值FBG<6.1 mmol/L,2h PG<7.8 mmol/L,安慰剂1次/d。比较两组患者血糖水平、血脂水平、糖化血红蛋白(hemoglobin A1c,Hb A1C)、胰岛β细胞功能(HOMA-β)和胰岛素抵抗指数(HOMAIR)差异。结果:治疗前两组患者各指标差异无统计学意义(P>0.05),治疗12周后,观察组患者血糖水平显著低于对照组患者(t=1.756,t=2.369,P<0.05),血脂水平与对照组患者比较差异无统计学意义(P>0.05)。观察组患者治疗后HOMA-β显著高于对照组,且Hb A1C、HOMA-IR水平显著低于对照组(t=2.219,t=1.896,t=1.934,P<0.05)。结论:DPP-Ⅳ抑制剂联合胰岛素强化降糖治疗可以更好地修复胰岛功能。

基于Caco-2细胞模型对DPP-Ⅳ抑制肽IPQVS的活性评价研究

基于Caco-2细胞模型研究了二肽基肽酶-4(DPP-Ⅳ)抑制肽(IPQVS)的活性,评价了小肠吸收与降解作用对DPP-Ⅳ抑制活性的影响。测定了IPQVS和其降解肽片段PQVS、QVS、VS的表观渗透系数(Papp),分别为(1.35±0.09)×10^(-6)、(1.46±0.18)×10^(-6)、(0.95±0.08)×10^(-6)、(3.01±0.15)×10^(-6) cm/s。其中,IPQVS主要是通过胞吞的形式跨Caco-2细胞单层转运,IPQVS以剂量依赖型方式抑制Caco-2细胞单层中的DPP-Ⅳ活性,不会影响DPP-Ⅳ中mRNA的表达(P>0.05),其IC50为(101.66±6.02)μmol/L,数值高于体外化学底物法测量值。分子对接结果表明DPP-Ⅳ和IPQVS降解产物(PQVS和QVS)的结合弱于IPQVS,结合的位点也发生了明显减少,这极大限制了IPQVS的DPP-Ⅳ抑制活性。

胰高血糖素样肽-2和二肽基肽酶Ⅳ抑制剂联合使用对断奶仔猪肠上皮细胞的影响

本试验旨在研究不同浓度的胰高血糖素样肽-2(Glucagon-like peptide 2,GLP-2)和二肽基肽酶Ⅳ(Dipeptidyl peptidase-Ⅳ,DPP-Ⅳ)抑制剂联合使用对体外原代培养的28日龄断奶仔猪肠上皮细胞增殖、代谢及相关酶活力的影响,初步探讨提高GLP-2作用效果的方法。试验首先采用单因子试验设计探讨不同浓度DPP-Ⅳ抑制剂(KR62436)对断奶仔猪肠黏膜上皮细胞增殖及代谢的影响;然后采用2×3因子设计,考察添加不同浓度的GLP-2(1×10-10、1×10-9、1×10-8 mol·L-1)和KR62436(0和1×10-11 mol·L-1)对细胞增殖、代谢及凋亡的影响。结果发现,培养液中单独添加1×10-11 mol·L-1 KR62436,细胞数量、MTT OD值、细胞沉积蛋白量、细胞总蛋白量、胞外LDH、CK和Na+,K+-ATP酶活均无显著变化(P>0.05);当KR62436浓度升高到1×10-10 mol·L-1,细胞MTT OD值显著低于对照组(P<0.05),胞外LDH和CK活力显著高于对照组(P<0.05)。培养液中同时添加GLP-2和低剂量的KR62436,随着培养液中GLP-2浓度的增加,细胞数量、MTT OD值、细胞蛋白沉积量、细胞总蛋白含量和Na+,K+-ATP酶活力显著增加(P<0.05),胞外LDH、CK活力显著降低(P<0.05)。KR62436显著提高了GLP-2的作用效果。结果表明,低剂量KR62436对细胞生长的影响不显著,高剂量的KR62436对细胞的代谢和完整性有负面效应;但低剂量的KR62436能够促进GLP-2对细胞增殖、代谢和细胞完整性的作用效果。

人血清Ⅳ型胶原ELISA检测法的建立与初步应用

本文研制了鼠抗人Ⅳ型胶原单克隆抗体与兔抗人Ⅳ型胶原多克隆抗体，用双抗体夹心法建立了人血清Ⅳ型胶原的酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测法。本法灵敏度为１６ｎｇ／ｍｌ，批内变异系数为１０．０２％，批间变异系数为９．１４％，回收率为９２．６８％。与Ⅰ型胶原无交叉反应。经５０例健康成人血清Ⅳ型胶原浓度测定，其范围在５～７３ｎｇ／ｍｌ，均值为３１．０６±１８．８１ｎｇ／ｍｌ。临床初步应用于肝硬化及肝癌患者血清Ⅳ型胶原的测定，其均值分别为８７．２７±５１．０８ｎｇ／ｍｌ及１４６±５８．８６ｎｇ／ｍｌ，具有一定的诊断意义。

国人Ⅱ型糖尿病患者载脂蛋白A-Ⅳ血清水平的研究

用酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）检测了我国Ⅱ型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）患者血清中载脂蛋白Ａ－Ⅳ（ａｐｏＡ－Ⅳ）的水平，并分析了它与其他７项血清参数ＴＧ、ＴＣ、ＨＤＬ－Ｃ、空腹血葡萄糖（ＦＰＧ）、ａｐｏＡ－Ⅰ、ａｐｏＢ１００和对数Ｌｐ（ａ）之间的关系。结果显示：与正常人群相比，ＮＩＤＤＭ患者ａｐｏＡ－Ⅳ和ＦＰＧ的血清水平显著增高（皆Ｐ＜０００１），ＨＤＬ－Ｃ和ａｐｏＡ－Ⅰ的血清水平显著降低（Ｐ＜０００１，Ｐ＜００５）。通过简相关分析和多元回归分析，两组人群ａｐｏＡ－Ⅳ的血清水平与ＨＤＬ－Ｃ和ＦＰＧ的血清水平呈正相关，与ＴＧ血清水平无显著相关性。可看出：ＮＩＤＤＭ患者血清ＨＤＬ中的两种主要载脂蛋白Ａ－Ⅰ和Ａ－Ⅳ的分布比例可能发生异常，致使ＨＤＬ逆向转运胆固醇的功能减弱。

二肽基肽酶Ⅳ抑制剂降糖外的靶器官效应研究进展

二肽基肽酶Ⅳ(DPP-4)抑制剂是近年来出现的一种新型降糖药物,因其双重降糖的机制且无低血糖、胃肠道反应少等副作用而备受青睐。目前国内外大量的动物实验及临床研究表明其不仅可以良好的控制血糖,还对其靶器官有益。本文就DPP-4抑制剂对除降糖外的靶器官效应进行综述,阐述这一类新型降糖药物的益处及不足。

苯那普利对糖尿病肾病UALB、TGF-β_1、CⅣ和LAM影响

目的评价苯那普利对糖尿病肾病(DN)的临床疗效,并探讨相应作用机制。方法采用随机对照研究,观察苯那普利治疗前后DN患者24h平均尿微量白蛋白排泄量以及尿转化生长因子β1(TGF-β1)、层黏连蛋白(LAM)和Ⅳ型胶原(CⅣ)的变化。结果苯那普利治疗6月后,患者24h尿微量白蛋白平均排泄量为(0·044±0·034)g,尿TGF-β1为(1·48±0·59)μg/L,LAM为(22·74±23·26)μg/L量,CⅣ浓度为(13·47±10·94)μg/L量,均较治疗前有显著降低(P<0·05),而对照组则较基线值明显升高(P<0·05)。结论苯那普利可以有效降低血压、抑制肾脏TGF-β1、LAM及CⅣ的表达、显著减少DN患者尿蛋白的排出,从而发挥其肾脏保护作用。

二肽基肽酶Ⅳ在Ⅱ型糖尿病大鼠牙龈表达的影响

目的:探讨高脂饮食和Ⅱ型糖尿病对大鼠牙龈组织中二肽基肽酶Ⅳ(DPP-Ⅳ/CD26)表达的影响。方法:将实验动物分为高脂饮食组(HF)、Ⅱ型糖尿病组(DM)和对照组(正常饮食),根据葡萄糖耐量试验异常确定Ⅱ型糖尿病动物模型成功。采用RT-PCR半定量和Western blot测定DPP-Ⅳ/CD26在大鼠肠(回肠)、肝脏、肾脏和牙龈组织中的表达情况。结果:与对照组比较,RT-PCR半定量测定HF组大鼠小肠、肾脏及牙龈组织内DPP-IVmRNA表达明显增加(151.58%,239.73%,169.7%,P<0.05),肝脏的DPP-IV无明显变化;DM组大鼠小肠、肾脏、肝脏和牙龈组织DPP-IV mRNA表达均明显增加(242.36%,324.93%,190.57%,267.4%,P<0.01)。Western blot证实HF组大鼠DPP-IV蛋白表达在小肠、肾脏、牙龈组织内中度增加(152.37%,154.17%,157.8%,P<0.05),而在肝脏无明显增加;DM组大鼠DPP-IV蛋白表达在小肠、肾脏、肝脏和牙龈组织均明显增加(222.5%,210.82%,225.43%,254.7%,P<0.01)。结论:在高脂饮食和Ⅱ型糖尿病时牙龈组织中DPP-IV表达上调,而这种上调可能是Ⅱ型糖尿病影响牙周炎发生发展的机制之一。

二肽基肽酶Ⅳ在2型糖尿病大鼠牙龈表达的免疫组化研究

目的观察2型糖尿病时大鼠牙龈组织中DPP-Ⅳ分布和表达情况。方法将实验动物分为高脂糖饮食组、2型糖尿病组和对照组,以高脂糖饮食加链脲霉素腹膜内注射制备2型糖尿病动物模型,根据葡萄糖耐量试验异常确定2型糖尿病动物模型成功。采用免疫组化染色法观察二肽基肽酶Ⅳ(DPP-Ⅳ/CD26)在肠、肾和牙龈中的分布和表达。结果DPP-Ⅳ主要定位于肠上皮、肾小管细胞和牙龈黏膜上皮细胞。在肠和肾组织无论高脂糖饮食组(HF)还是2型糖尿病模型组(DM)DPP-Ⅳ表达均强于对照组。在牙龈组织,DM组大鼠强阳性表达,HF组大鼠弱阳性表达,对照组大鼠阴性表达。结论在2型糖尿病时,DPP-Ⅳ/CD26在大鼠牙龈组织中出现高表达。

壳聚糖Ce(Ⅳ)复合物对磷酯键的水解作用

以Ce(Ⅳ)、1,4,7,10-四氮杂环十二烷(Cyclen)、叶绿素-Cu(Ⅱ)以及壳聚糖为原料,采用反相悬浮交联法和离子配位法制备的复合物(CCC[Ce(Ⅳ),Cu(Ⅱ)]),在60℃条件下,能够显著加速磷酯键的断裂,在60 min时该复合物对p NPP和AMP实时水解率分别为60%和165%,是p NPP自身水解速率的183倍,对应的表观反应速率常数Kobsd为1.9×10^(-2)M/min;是AMP自身水解速率的211倍,对应的表观反应速率常数Kobsd为3.9×10^(-2)M/min。该复合物可使p BR322 DNA从双螺旋结构完全转变为缺刻型及直线型,且缺刻型比例高达93%。