Dps(DNAprotection during starvation)蛋白是原核生物中特有的一类具有铁离子结合和抗氧化损伤功能的重要蛋白。利用体外PCR扩增技术和体内同源重组方法,获得了耐辐射奇球菌(Deinococcus radiodurans)dps全基因(DRB0092)缺失突变株。...Dps(DNAprotection during starvation)蛋白是原核生物中特有的一类具有铁离子结合和抗氧化损伤功能的重要蛋白。利用体外PCR扩增技术和体内同源重组方法,获得了耐辐射奇球菌(Deinococcus radiodurans)dps全基因(DRB0092)缺失突变株。对突变株和野生型分别进行不同浓度过氧化氢(H2O2)处理,结果表明:与野生型菌株R1相比,dps突变株在低浓度H2O2(≤10mmol/L)条件下存活率急剧下降,而高浓度(≥30mmol/L)下则完全致死。Native-PAGE活性染色结果显示,稳定生长期dps突变株体内两种过氧化氢酶(KatA和KatB)的活性较野生型R1分别上调2.3倍和2.6倍。通过质粒构建和大肠杆菌诱导表达,获得可溶性Dps蛋白。体外结合和DNA保护实验结果显示:Dps具有明显的DNA结合功能,并能保护质粒DNA免受羟自由基攻击。本研究证明,Dps蛋白在耐辐射奇球菌抗氧化体系中发挥重要作用,可能对该菌极端抗性机制有重要贡献。展开更多
DNA结合蛋白(DNA-binding proteins from starved cells,DPS)是细菌一类重要的抗逆境保护蛋白。对大肠杆菌DPS蛋白进行原核表达和纯化旨为研究其体外自组装和抗氧化活性。构建表达载体p BVDPSHis,诱导表达并纯化DPS单体蛋白,通过非变性P...DNA结合蛋白(DNA-binding proteins from starved cells,DPS)是细菌一类重要的抗逆境保护蛋白。对大肠杆菌DPS蛋白进行原核表达和纯化旨为研究其体外自组装和抗氧化活性。构建表达载体p BVDPSHis,诱导表达并纯化DPS单体蛋白,通过非变性PAGE检测DPS单体自组装情况,通过质粒在Fenton反应时的降解情况检测DPS对DNA的抗氧化保护作用。结果表明,PCR扩增得到522 bp的特异性基因片段,成功构建表达载体p BVDPSHis,诱导表达了分子量为19.5 k D的DPS单体蛋白,亲和层析法纯化的单体DPS经非变性PAGE电泳证实以多聚体蛋白形式存在,Fenton反应说明DPS具有保护质粒DNA抗氧化损伤作用。原核表达的DPS在体外可以自组装成多聚体结构具有抗氧化保护DNA作用。展开更多
文摘Dps(DNAprotection during starvation)蛋白是原核生物中特有的一类具有铁离子结合和抗氧化损伤功能的重要蛋白。利用体外PCR扩增技术和体内同源重组方法,获得了耐辐射奇球菌(Deinococcus radiodurans)dps全基因(DRB0092)缺失突变株。对突变株和野生型分别进行不同浓度过氧化氢(H2O2)处理,结果表明:与野生型菌株R1相比,dps突变株在低浓度H2O2(≤10mmol/L)条件下存活率急剧下降,而高浓度(≥30mmol/L)下则完全致死。Native-PAGE活性染色结果显示,稳定生长期dps突变株体内两种过氧化氢酶(KatA和KatB)的活性较野生型R1分别上调2.3倍和2.6倍。通过质粒构建和大肠杆菌诱导表达,获得可溶性Dps蛋白。体外结合和DNA保护实验结果显示:Dps具有明显的DNA结合功能,并能保护质粒DNA免受羟自由基攻击。本研究证明,Dps蛋白在耐辐射奇球菌抗氧化体系中发挥重要作用,可能对该菌极端抗性机制有重要贡献。
文摘DNA结合蛋白(DNA-binding proteins from starved cells,DPS)是细菌一类重要的抗逆境保护蛋白。对大肠杆菌DPS蛋白进行原核表达和纯化旨为研究其体外自组装和抗氧化活性。构建表达载体p BVDPSHis,诱导表达并纯化DPS单体蛋白,通过非变性PAGE检测DPS单体自组装情况,通过质粒在Fenton反应时的降解情况检测DPS对DNA的抗氧化保护作用。结果表明,PCR扩增得到522 bp的特异性基因片段,成功构建表达载体p BVDPSHis,诱导表达了分子量为19.5 k D的DPS单体蛋白,亲和层析法纯化的单体DPS经非变性PAGE电泳证实以多聚体蛋白形式存在,Fenton反应说明DPS具有保护质粒DNA抗氧化损伤作用。原核表达的DPS在体外可以自组装成多聚体结构具有抗氧化保护DNA作用。