5-氮杂胞苷对胃癌裸鼠移植瘤死亡受体DR4和DR5表达的影响

【目的】研究5-氮杂胞苷(5-Aza-CdR)对胃癌裸鼠移植瘤中死亡受体4(DR4)和死亡受体5(DR5)表达的影响。【方法】利用RT-PCR方法检测5-Aza-CdR处理后的胃癌裸鼠移植瘤内DR4和DR5的RNA表达水平、用MS-PCR检测5-Aza-CdR处理后的胃癌裸鼠抑制瘤内DR4和DR5启动子区甲基化水平。【结果】5-Aza-CdR能够抑制胃癌裸鼠移植瘤的生长。5-Aza-CdR能够逆转胃癌裸鼠移植瘤中DR4和DR5的启动子甲基化水平,并上调DR4和DR5的表达水平。【结论】去甲基化药物5-Aza-CdR能够抑制裸鼠胃癌移植瘤生长,提示该药物有治疗作用且能够诱导DR4和DR5的启动子区去甲基化从而使DR4和DR5的表达水平升高。

5-氮杂胞苷对胃癌细胞系的生长凋亡及DR4与DR5表达的影响

目的探讨5-氮杂胞苷(5-Aza-CdR)对胃癌细胞系的生长,凋亡及DR4与DR5表达的影响。方法反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法、Western blot方法和甲基化特异性PCR(MS-PCR)法检测5-Aza-CdR处理后的胃癌细胞株内DR4和DR5的RNA表达水平。结果 5-Aza-CdR能够逆转胃癌细胞中DR4和DR5的启动子甲基化水平,并上调DR4和DR5的表达水平。结论 5-氮杂胞苷对胃癌细胞系MKN28、AGS和SGC7901具有增殖抑制作用,且具有药物浓度和作用时间的依赖性。促进胃癌细胞系MKN28、AGS和SGC7901的凋亡且能使死亡受体DR4和DR5的表达水平增高。

大骨节病患者软骨组织中FAS/DR4死亡受体膜蛋白高表达

目的研究大骨节病关节软骨组织中凋亡相关的死亡受体4/5(DR4/5)及FAS的表达变化。方法按照大骨节病诊断标准收集大骨节病患者关节软骨标本(KBD组),以原发性骨关节病关节软骨(OA组)作为病例对照,以正常关节软骨(NC组)作为健康对照,制备石蜡切片,进行免疫组织化学染色标记法检测凋亡途径中重要死亡受体DR4/5及FAS的表达,光学显微镜下计数并计算软骨细胞阳性表达率,统计分析组间差异。结果在软骨组织表层,KBD组、OA组的FAS阳性细胞率明显高于NC组,KBD组的DR4及DR5与NC组差异均无统计学意义;在中层,KBD组和OA组的FAS、DR4阳性细胞率均明显高于NC组,KBD组的DR5与NC组无差异;在深层,KBD组的FAS阳性细胞率明显高于NC组,KBD组和OA组的DR4阳性细胞率均明显高于NC组,KBD组的DR5与NC组无差异。结论FAS/DR4主要表达于深层及中层,提示FAS/DR4介导的细胞死亡可能参与了深层软骨坏死这一特征性的病理变化。

TRAIL基因修饰脐带间充质干细胞联合5-氟尿嘧啶对U-87MG、A549及HeLa细胞杀伤作用研究

目的研究TRAIL基因修饰的脐带间充质干细胞(TRAIL-MSCs)联合化疗药5-氟尿嘧啶(5-FU)对人脑胶质瘤细胞U-87MG、人肺癌细胞A549和人宫颈癌细胞HeLa的杀伤作用。方法通过基因工程手段结合慢病毒转染体系构建高表达十二聚体TRAIL蛋白(dTRAIL)的TRAIL-MSCs,应用流式细胞技术检测TRAIL-MSCs的生物学特性;通过ELISA技术检测TRAIL-MSCs分泌的TRAIL量来评估转染效果;CCK-8法检测低浓度(0、1、2、4、8、16μg/mL)5-FU对U-87MG、A549、HeLa细胞的增殖抑制率,并计算其对各细胞的半数抑制浓度(IC_(50));CCK-8法检测5-FU(IC_(50))、UC-MSCs培养上清、TRAIL-MSCs培养上清、5-FU(IC_(50))+UC-MSCs培养上清和5-FU(1/4 IC_(50)、1/2 IC_(50)和IC_(50))+TRAIL-MSCs培养上清对U-87MG、A549、HeLa细胞的增殖抑制率,计算5-FU和TRAIL-MSCs培养上清的相互作用系数(CDI);Western blotting法检测5-FU对U-87MG、A549、HeLa细胞死亡受体DR4、DR5蛋白表达的影响;台盼蓝染色法观察5-FU、UC-MSCs、TRAIL-MSCs、5-FU+UC-MSCs和5-FU+TRAIL-MSCs对U-87MG、A549、HeLa细胞的杀伤作用。结果生物学检测结果表明TRAIL-MSCs在维持UC-MSCs生物学特性的同时能够高表达TRAIL蛋白。5-FU对U-87MG、A549、HeLa细胞均有增殖抑制作用,抑制作用由高到底依次为HeLa细胞(IC_(50)为9.15μg/mL)>A549细胞(IC_(50)为10.62μg/mL)>U-87MG细胞(IC_(50)为22.37μg/mL)。与对照组比较,除A549细胞UC-MSCs培养上清组外,各处理组细胞增殖抑制率均显著升高(P<0.01、0.001);与相应各5-FU IC_(50)及TRAIL-MSCs培养上清组比较,U-87MG、HeLa细胞5-FU(1/4 IC_(50)、1/2 IC_(50)和IC_(50))+TRAIL-MSCs培养上清组细胞增殖抑制率均显著升高(P<0.001),A549细胞5-FU(IC_(50))+TRAIL-MSCs培养上清组细胞增殖抑制率显著升高(P<0.01、0.001);5-FU(1/2 IC_(50))+TRAIL-MSCs培养上清组对U-87MG的细胞增殖抑制协同效应最显著(CDI<0.7且P<0.001);5-FU(1/4 IC_(50))+TRAIL-MSCs培养上清组对A549的细胞增殖抑制具有协同作用,但其协同效果并不显著;5-FU(1/4 IC_(50))+TRAIL-MSCs培养上清组对HeLa细胞增殖抑制的协同效果最显著(CDI<0.7且P<0.01)。经5-FU处理后U-87MG、A549、HeLa细胞DR4和DR5的蛋白表达明显升高,其中DR5的表达水平高于DR4,与对照组比较差异均具有统计学意义(P<0.001)。与对照组比较,5-FU、TRAIL-MSCs和5-FU+TRAIL-MSCs组对于肿瘤细胞U-87MG、A549、HeLa均具显著的杀伤作用(P<0.001);与5-FU或TRAIL-MSCs组比较,5-FU+TRAIL-MSCs组的杀伤效果更显著(P<0.001)。结论TRAIL-MSCs联合低浓度的5-FU对肿瘤细胞U-87MG、A549和HeLa具有显著的细胞杀伤作用,二者联用协同效果显著,机制可能与5-FU提高DR4、DR5蛋白表达、提高肿瘤细胞对TRAIL-MSCs的敏感性相关。

地塞米松提高TRAIL基因修饰脐带间充质干细胞对急性T淋巴细胞白血病细胞杀伤作用及机制研究

目的构建肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)基因修饰的脐带间充质干细胞(TRAIL-MSCs),并检测其联合地塞米松(DEX)对急性T淋巴细胞白血病细胞系(Jurkat)的影响。方法通过慢病毒载体将SPD-TRAIL基因转染脐带间充质干细胞(UC-MSCs)构建TRAIL-MSCs,使其能够表达十二聚体TRAIL蛋白(dTRAIL)。通过CCK-8法、流式细胞术检测UC-MSCs、TRAIL-MSCs、DEX(200μmol/L)、DEX(200μmol/L)+UC-MSCs和DEX(200μmol/L)+TRAIL-MSCs对Jurkat细胞增殖、凋亡的影响;显微镜光镜下观察细胞形态及密度;通过实时荧光定量PCR及Western blotting法检测各组Jurkat细胞表面死亡受体DR4、DR5 mRNA和蛋白表达水平。结果CCK-8结果显示,各处理组均可以抑制Jurkat细胞的增殖,与对照组比较有显著性差异(P<0.01);同时,DEX可以提高TRAIL-MSCs(抑制率约20%)对Jurkat细胞的增殖抑制作用,抑制率提高至60%,与TRAIL-MSCs组比较差异显著(P<0.01)。显微镜观察结果发现,DEX与TRAILMSCs联合组对肿瘤细胞Jurkat的杀伤作用最明显;流式细胞术结果显示,TRAIL-MSCs对Jurkat细胞有促进凋亡的作用,凋亡率达10%,单独使用DEX后,凋亡率约20%,与对照组比较差异显著(P<0.01);DEX联合TRAIL-MSCs作用于Jurkat细胞48 h后,细胞凋亡率为38%,较TRAIL-MSCs组显著提高(P<0.01)。TRAIL-MSCs组DR4、DR5的mRNA、蛋白水平较对照组显著降低(P<0.01),DEX组DR4、DR5的mRNA、蛋白水平较对照组显著升高(P<0.01),DEX与TRAIL-MSCs联合作用后,DR4、DR5的mRNA、蛋白水平较DEX组显著降低(P<0.01)。结论DEX可以提高肿瘤细胞Jurkat对TRAILMSCs的敏感性,增强TRAIL-MSCs对肿瘤细胞的杀伤作用,可能与提高DR4、DR5表达有关。