盐酸青藤碱诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡及其死亡受体DR4、DR5表达的变化

目的观察人肝癌细胞SMMC-7721凋亡过程中死亡受体DR4、DR5的表达,探讨盐酸青藤碱诱导人肝癌细胞凋亡的作用机制。方法体外培养人肝癌细胞SMMC-7721,经不同浓度盐酸青藤碱作用后,采用MTT法检测细胞增殖情况;Hoechst染色荧光显微镜观察细胞凋亡;用Western blotting方法检测人肝癌细胞DR4、DR5的表达。结果盐酸青藤碱对人肝癌细胞的生长有明显的抑制作用,并呈剂量、时间依赖性,不同浓度组之间差异均有统计学意义(P<0.05);Hoechst33258染色可见凋亡细胞皱缩,核碎裂,也可见典型凋亡小体;在蛋白水平,盐酸青藤碱处理后SMMC-7721细胞死亡受体DR4、DR5的表达水平较未处理组显著增加(P<0.05)。结论盐酸青藤碱可抑制人肝癌细胞SMMC-7721的细胞增殖,促进其凋亡,此作用可能与细胞内死亡受体DR4和DR5表达上调有关。

敲低TRAIL-DR5抑制辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)诱导的MCF-7乳腺癌细胞自噬

目的探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体-死亡受体5(TRAIL-DR5)在辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)诱导乳腺癌MCF-7细胞自噬过程中的调控作用。方法对数生长期MCF-7细胞分为空白对照组、SAHA处理组、TRAIL-DR5 siRNA处理组及SAHA联合TRAIL-DR5 siRNA处理组。Western blot法验证TRAIL-DR5的沉默效果,定量PCR阵列检测细胞自噬相关基因9B(ATG9B)、微管相关蛋白1轻链3A(LC3A)及LC3B的mRNA水平;Western blot法检测MCF-7细胞自噬相关蛋白beclin-1、ATG3、ATG5、ATG7、ATG12、ATG16、ATG4 A、ATG4 B、ATG9 B及LC3Ⅱ和组织蛋白酶B(CTSB)的蛋白水平;ELISA分析乳腺癌细胞培养上清液CTSB水平;免疫荧光细胞化学染色检测乳腺癌细胞LC3Ⅱ表达和分布。结果 TRAIL-DR5 siRNA转染后明显敲低MCF-7细胞的TRAIL-DR5水平。敲低TRAIL-DR5受体可抑制上述自噬相关基因及蛋白的表达水平,抑制乳腺癌细胞中CTSB蛋白的表达;SAHA处理MCF-7细胞后,LC3Ⅱ含量增加,当敲低TRAIL-DR5受体后,LC3Ⅱ水平明显弱于单独SAHA处理的细胞。结论敲低TRAIL-DR5受体抑制SAHA诱导的MCF-7乳腺癌细胞自噬作用。

TNF相关凋亡诱导配体联合阿糖胞苷诱导HL-60细胞凋亡及其机制的研究

本研究探讨人重组可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(hrsTRAIL)单用或联合阿糖胞苷(Ara-C)诱导HL-60细胞凋亡作用及其机制。在体外以人类急性白血病细胞株HL-60为研究对象,分5组进行细胞培养:对照组、Ara-C组、rsTRAIL组、同时给药组(Ara-C+rsTRAIL)、先后给药组(Ara-C→rsTRAIL)。采用MTT比色法测定细胞生长抑制率;应用Annexin V/PI染色和流式细胞术检测细胞凋亡率;使用流式细胞术检测不同浓度的Ara-C对细胞表面DR5表达水平的影响及rsTRAIL单药组、先后给药组细胞表面DR5表达水平和细胞内caspase-8活性。结果表明:rsTRAIL能抑制HL-60细胞生长并诱导HL-60细胞凋亡。先后给药组诱导HL-60细胞凋亡率大于同时给药组。先后给药组细胞表面DR5表达水平和细胞内caspase-8的活性高于rsTRAIL组。5mg/L、10mg/LAra-C作用于HL-60细胞24小时,其细胞表面DR5表达水平升高,大于对照组。结论:rsTRAIL抑制HL-60细胞生长,诱导HL-60细胞凋亡。Ara-C上调HL-60细胞表面DR5表达水平,增强rsTRAIL诱导HL-60细胞凋亡的作用。Ara-C和rsTRAIL联合用药时,在先加Ara-C、再加rsTRAIL组诱导HL-60细胞凋亡的效果比同时给药组效果好,其机制可能与Ara-C上调细胞表面DR5表达水平和(或)增强细胞内caspase-8的活性有关。

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对胃癌细胞杀伤作用研究

目的检测肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对胃癌细胞的杀伤作用及其受体在胃癌细胞中的表达情况,评估TRAIL信号在胃癌治疗中的可行性。方法研究选取11株胃癌细胞进行实验,采用实时荧光定量PCR方法检测胃癌细胞中TRAIL相关受体(DR4、DR5、DcR1、DcR2)mRNA表达。采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)法检测TRAIL抑制胃癌细胞生长,Annexin V/PI双染色法测定TRAIL诱导细胞凋亡,Western blot检测TRAIL介导Caspase裂解。结果死亡受体DR4、DR5在11株胃癌细胞内普遍高表达,表达水平显著高于诱骗受体DcR1、DcR2。TRAIL对9株胃癌细胞有不同程度的生长抑制作用,SNU-16、NUGC3、NCI-N87和SNU-1灵敏度最高,抑制作用呈时间和剂量依赖性。TRAIL通过诱导细胞凋亡发挥肿瘤杀伤作用,低浓度TRAIL(200 ng/ml)作用24 h后50%以上细胞发生凋亡。Caspase-3、-8、-9和PARP的裂解水平与凋亡程度相关。结论TRAIL对胃癌细胞具有不同程度的生长抑制和凋亡诱导作用,在胃癌中具有潜在应用价值。