6个品种马DRD4基因克隆与序列比较分析

从6个品种马的血液中提取基因组DNA,根据GenBank中已发表的人、鼠、雪貂的DRD4 cDNA基因保守区序列,设计3对特异性引物,另1对由文献所得,对6个品种马的DRD4基因分4段进行PCR扩增,经电泳检测,分别呈4条特异条带,将其分别克隆入pMD19-T载体中,进行序列测定并拼接序列,得到包括所有内含子的DRD4基因序列。分析结果表明,马DRD4基因含有4个外显子和3个内含子,所得序列与人、鼠和狗同源区比对,发现其同源性都达到了75%以上。对6个品种马DRD4基因序列比较发现,不同品种马之间,第1内含子和第3外显子存在一定的变异,包括转换、颠换、插入/缺失和VNTR。

马DRD4基因部分序列克隆和PCR-RFLP分析

克隆了马DRD4基因完整第1内含子及部分第1、2外显子序列,并用StuI限制性内切酶通过PCR-RFLP技术检测了包括引入品种、培育品种和地方品种6个类型共270匹马的DRD4基因部分序列多态性。用8%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳将酶切产物分离,并用银染法显色。结果经StuI内切酶消化表现出多态,由3种共显性等位基因控制,出现了6种基因型;经Hardy-Weinberg平衡检验,乌审马(WS)、巴而虎马(BH)和乌珠穆沁马(WZ)(P>0.05)达到平衡,而其余均未达到平衡(P<0.05)。

DAT1和DRD4基因启动子区甲基化与注意缺陷多动障碍临床症状的关联研究

目的探索注意缺陷多动障碍(attention deficit hyperactivity disorder,ADHD)患儿多巴胺转运体基因(dopamine transporter gene,DAT1)、多巴胺D4受体基因(dopamine receptor D4 gene,DRD4)启动子区CpG岛甲基化状态与其临床症状严重程度的相关性。方法收集111例ADHD患儿精神类疾病家族史资料,并采用ADHD症状分级父母评定量表(attention deficit hyperactivity disorder rating scale-Ⅳhome version,ADHD-RS-Ⅳ)及自编对立违抗障碍(oppositional defiant disorder,ODD)量表对患者临床症状进行评定。采用亚硫酸氢钠测序法,检测患者外周血的DAT1、DRD4启动子区CpG岛目标片段甲基化状态。结果无抑郁、焦虑和ADHD家族史的患儿DAT1启动子区甲基化水平高于有抑郁、焦虑或ADHD家族史的患儿(P<0.05)。DAT1和DRD4甲基化水平在ADHD-RS-Ⅳ总分(≤30分组与>30分组)、注意缺陷因子分(≤17分组与>17分组)、多动冲动因子分(≤13分组与>13分组)低分和高分组的比较中差异均无统计学意义(均P>0.05)。ODD量表<9分的患儿DAT1甲基化水平较ODD量表得分≥9分的患儿高(P<0.05),且患儿DAT1甲基化水平与ODD量表得分呈负相关(r=-2.203,P=0.033)。结论 DAT1启动子区甲基化水平可能影响ADHD患者对立违抗行为的严重程度,且与患者有无抑郁、焦虑和ADHD家族史存在一定关系。

DRD4基因与亲社会行为的关联及其潜在脑机制

DRD4基因是亲社会行为的重要候选基因,且与环境交互影响亲社会行为的发生发展。通过梳理既有研究,本文从性别差异、亲社会行为的不同类型及发展动态性等角度探讨了亲社会行为遗传研究存在分歧的原因,并在此基础上探索了DRD4基因作用于亲社会行为的潜在脑机制。未来研究应采用纵向设计探究DRD4基因影响亲社会行为的发展动态性问题,并深入探索其性别差异;采用多质多法分析考察不同类型亲社会行为遗传机制的差异性;采用影像遗传学设计揭示“DRD4基因—脑—亲社会行为”作用机制。

多巴胺D4受体基因与注意缺损多动障碍

为探讨注意缺损多动障碍 (ADHD)与多巴胺D4受体基因 (dopamineD4receptorgene ,DRD4)间的关系 ,采用Amp -FLP的方法检测了上海地区汉族人群中 6 8例ADHD患者及其父母DRD4的多态性 ,数据采用基于单体型的单体型相对风险 (HHRR)及传递不平衡检验 (TDT)进行遗传关联分析。结果表明HHRR分析和复等位基因的TDT检验 ,均未显示出与ADHD的遗传关联性 (P >0 .0 5 )。提示上海地区人群中DRD4基因与ADHD无显著性关联。

白血病细胞多巴胺受体基因甲基化研究

目的 :探讨多巴胺受体 ( DRD4 )基因第一外显子中 Not 酶切位点甲基化与急性非淋巴细胞白血病( AML)的关系。方法 :应用 Southern印记杂交及 DNA序列分析技术对 AML 患者骨髓标本进行分析。结果 :在 2 7例白血病患者骨髓标本中 16例 DRD4基因甲基化 ( 5 9% ) ,其中初治化疗敏感患者 DRD4基因甲基化发生率为5 0 % ( 9/18) ,复发及难治患者甲基化发生率为 78% ( 7/9) ,而 9例正常人骨髓标本 DRD4基因均无甲基化。结论 :DRD4基因甲基化在白血病患者发生率明显高于正常人 ( P<0 .0 5 ) ,而在复发及难治患者其发生率略高于初治化疗敏感患者 ,DRD4基因甲基化可能与白血病的发生。

DAT1和DRD4基因启动子区甲基化水平与注意缺陷多动障碍发病的关联研究

目的探讨注意缺陷多动障碍（attention deficit hyperactivity disorder，ADHD）患儿和正常儿童在多巴胺转运体基因（DAT1／SLC6A3）、多巴胺D4受体基因（DRD4）启动子区CpG岛甲基化状态的差异，旨在从表观遗传学角度进一步阐明ADHD的遗传学机制。方法收集111例ADHD患者及118例对照组儿童的外周血及一般人口学资料，采用亚硫酸氢钠测序法，检测111例ADHD患者及118例对照儿童的DAT1基因、DRD4基因的启动子区CpG岛目标片段的甲基化状态。结果病例组和对照组在DAT1和DRD4启动子区总体发生甲基化的频数比例的均差异无统计学意义（P〉0．05）；DAT1启动子区第17个CpG位点、DRD4启动子区第8个CpG位点病例组发生甲基化的频数比例（23．42％、64．86％）较对照组高（11．86％、47．46％）（均P〈0．05）。在所有样本中，DAT1启动子区发生甲基化的频数比例男性高于女性（P〈0．05），DRD4启动子区则女性高于男性（P〈0．05）；病例组中DAT1启动子区发生甲基化的频数比例男性高于女性（P〈0．05），而对照组中则为DRD4启动子区女性高于男性（P〈0．05）。在所有样本中，〉7岁年龄组在DAT1启动子区发生甲基化的频数比例高于≤7岁组（P〈0．05）；病例组中〉7岁年龄组在DAT1启动子区发生甲基化的频数比例亦高于≤7岁组（P〈0．05）。结论DAT1及DRD4基因启动子区CpG岛甲基化状态可能与ADHD易感性相关；不同性别、年龄个体的DAT1及DRD4基因启动子区CpG岛甲基化状态存在差异。

三穗鸭DRD4基因多态性及生物信息学分析

本实验以三穗鸭为材料,采用PCR扩增并采用直接测序技术对三穗鸭DRD4基因进行SNP多态位点检测,共筛查出4个SNP位点:exon2-C12406T、exon3-A13144G、intron2-C12777T、intron2-T12789C。其中exon2-C12406T、exon3-A13144G位点突变为同义突变。对DRD4进行生物信息学分析表明,突变前后的等位基因频率估算有差异,但其m RNA二级结构预测,蛋白质二级、三级结构预测分析均无差异。

DRD4基因与人类认知能力的相关性研究

以某高校随机抽取的790余名汉族健康大学新生作为随机人群样本,采用PCR-SSCP结合DNA测序的方法探究位于多巴胺神经递质通路中的多巴胺D4受体基因(DRD4)上的共2个SNP,探索DRD4基因的正常功能多态与人认知能力的相关性。分析结果显示,DRD4基因上选取的两个SNP中,仅有rs936461与男性中央执行功能关联p值校正后仍然存在显著性(p=0.034)。说明DRD4基因可能与人的中央执行功能有关。

性别、年龄、教育年限及多巴胺受体4基因多态性与成人认知功能的关联研究

目的 探讨成人认知功能与性别、年龄、教育年限以及多巴胺受体4基因之间的关系.方法 对455名健康受试者采用汉诺塔、威斯康星卡片分类和连线测验进行认知检测.同时抽取受试者外周静脉血2 mL,用常规苯酚-氯仿法提取DNA后,用Illumina GoldenGate基因芯片对位于多巴胺受体4基因启动子区域的rs3758653位点进行基因分型.结果 男性汉诺塔平均执行时间和汉诺塔总分优于女性,而汉诺塔平均计划时间差于女性;年龄和性别对大多数的认知功能均有影响,年龄越大,认知能力越差,而教育年限越长,认知能力越好;多巴胺受体4基因rs3758653多态性主要与汉诺塔平均执行时间相关.与A等位基因携带者相比,G等位基因携带者汉诺塔平均执行时间较长.结论 性别、年龄、教育年限及多巴胺受体4基因多态性均对成人认知功能具有影响.

多巴胺D4受体基因exon Ⅲ 48bp VNTR多态性与学龄儿童气质的相关性

目的了解多巴胺D4受体基因(DRD4)第3外显子48bp可变串联重复序列多态性(exon Ⅲ 48bp VNTR)与学龄儿童气质的相关性。方法随机整群抽取350名8~12岁健康儿童进行问卷调查,其中一半儿童进行口腔上皮采集,其中164名儿童问卷资料完整且口腔上皮细胞中DNA浓度较高的样本纳入研究,运用PCR技术进行DRD4 exon Ⅲ 48bp VNTR分型,并分析该基因及其与环境的交互作用对气质的影响。结果携带L-DRD4基因型儿童在活动水平、反应强度、情绪本质以及坚持性4个维度的得分均低于S-DRD4基因型儿童(P<0.05)。母亲教养方式为拒绝/否认(OR=2.281,P<0.05)、儿童性别(OR=2.766,P<0.05)的主效应及儿童性别与DRD4 exon Ⅲ 48bp VNTR的交互作用对儿童活动水平有影响(OR=0.582,P<0.05)。DRD4 exon Ⅲ 48bp VNTR主效应(OR=0.314,P<0.01)及该基因与母亲教养方式为拒绝/否认的交互作用(OR=1.872,P<0.01)对儿童反应强度有影响。DRD4 exon Ⅲ 48bp VNTR(OR=0.420,P<0.05)及母亲教养方式为拒绝/否认(OR=2.236,P<0.05)的主效应对儿童坚持性有影响。结论 DRD4 exon Ⅲ 48bp VNTR及该基因与其他因素的交互作用可能影响学龄儿童的活动水平和反应强度。

多巴胺D4受体基因多态性与学龄双生子儿童行为问题的关系研究

目的探讨学龄双生子儿童多巴胺D4受体（Dopamine D4 receptor，DRD4）基因多态性与行为问题的关系及作用特点。方法采用Achenbach儿童行为量表对147对6～12岁双生子儿童行为问题进行测评；采用PCR技术，对DRD4基因多态性进行分型；运用广义估计方程模型分析双生子儿童DRD4基因多态性与行为问题的关系及其与儿童性别、年龄、卵型的交互作用。结果（1）DRD4基因多态性与学龄双生子儿童焦虑抑郁、退缩、思维问题、注意力问题、社会化问题、违纪行为、攻击行为的发生及总粗分相关（P〈0．05），与身体不适行为可能也有一定相关性（p=0．067）；除社会化问题外，基因型为4／6型（携带5次及以上重复序列片段的基因型）双生子儿童的行为问题检出率（6．25％-21．25％）均高于其他基因型儿童（0-14．74％），差异具有统计学意义（P〈0．05）；（2）退缩行为与儿童年龄有关（χ^2=4．348，P〈0．05），低年龄段（6～10岁）双生子儿童易发生退缩行为；（3）DRD4基因多态性与儿童年龄的交互作用对退缩行为（χ^2=4．348，P〈0．05）和身体不适（χ^2=5．189，P〈0．05）均有影响，高年龄段对4／6型双生子儿童退缩行为和身体不适行为的发生具有一定的保护作用，11～12岁高年龄段检出率均为0，6—10岁低年龄段二者检出率分别为3．54％和2．65％。结论DRD4基因多态性与学龄双生子儿童行为问题存在相关性；DRD4基因多态性与儿童年龄的交互作用对学龄双生子儿童退缩行为和身体不适的发生有影响。