DRR1调节神经母细胞瘤细胞分化的作用机制

目的:探究肾细胞癌下调蛋白1(down-regulated in renal cell carcinoma 1,DRR1)在神经母细胞瘤细胞分化中的作用以及内在的分子机制。方法:在神经母细胞瘤细胞中敲减或过表达DRR1后,分别考察细胞分化状态的变化、细胞周期的变化以及利用real-time PCR的方法检测其潜在下游因子的表达变化;利用神经母细胞瘤患者数据库,分析在神经母细胞瘤患者样本中DRR1的潜在下游因子的表达与DRR1表达之间的相关性;诱导神经母细胞瘤细胞分化后,利用real-time PCR的方法检测DRR1的潜在下游因子的表达变化。结果:DRR1的表达可促进神经母细胞瘤细胞的分化;敲减DRR1促进神经母细胞瘤细胞的G_(1)/S期的转换,过表达DRR1抑制神经母细胞瘤细胞的G_(1)/S期的转换;DRR1的表达改变影响其潜在下游因子在神经母细胞瘤细胞中的表达;在神经母细胞瘤患者样本中DRR1的表达与其潜在下游因子的表达呈显著相关性;DRR1的潜在下游因子的表达随神经母细胞瘤细胞分化状态的变化而改变。结论:DRR1通过调控下游因子的表达调节神经母细胞瘤细胞的分化。

人DRR1真核表达载体和稳定转染HEK293细胞株的建立及鉴定

目的:构建人DRR1基因的真核表达载体,通过转染HEK293细胞建立稳定的DRR1表达细胞株。方法:通过改造质粒pIRES,在其MCS1和MCS2中分别引入串联亲和纯化标签和绿色荧光蛋白基因,形成一个新的表达质粒pFSIG。将PCR扩增的DRR1基因插入pFSIG中进行酶切和测序验证。用重组质粒pFSIG-DRR1转染HEK293细胞,通过G418和绿色荧光检测筛选DRR1稳定表达细胞株。通过W esternb lot鉴定FS-DRR1蛋白的表达。结果:酶切、PCR和测序证实成功构建了pFSIG-DRR1表达质粒;建立了稳定转染的HEK293细胞系,W estern b lot检测证明重组DRR1在该细胞系中成功表达。结论:融合有串联亲和纯化标签的DRR1真核表达载体的构建和稳定表达细胞HEK293株的建立为在生理条件下研究DRR1的相互作用蛋白奠定了基础。

DRR1在人脑胶质瘤中的表达及意义

目的:探讨DRR1基因在胶质瘤患者组织标本中的表达及其临床意义。方法:免疫组化检测57例胶质瘤患者中DRR1的表达,SPSS软件检测DRR1表达与胶质瘤患者年龄、性别及病理分期的关系。结果:DRR1在胶质瘤患者中的表达阳性率为87.7%,其表达与病理分期显著相关(P<0.05),病理分期越高,DRR1表达越高。其与年龄(P>0.05)、性别(P>0.05)无显著相关性。结论:DRR1基因表达与脑胶质瘤病理分期显著相关,或可成为脑胶质瘤新的分子靶标。

DRR1生物学功能的研究进展

DRR1 (down-regulated in renal cell carcinoma 1)最早被发现在肾癌组织中表达水平降低,因此被认为是一种肿瘤抑制因子。进一步的研究发现,DRR1 在脊椎动物的各种组织细胞内广泛表达,其在神经系统中的表达水平最高,并且在维持神经系统正常生物学功能方面起重要作用。近年来的研究还发现DRR1 在肿瘤发生发展过程中起着双重作用。一方面,DRR1 被发现在多种肿瘤组织中存在表达降低或表达缺失的现象,其表达水平高低与肿瘤细胞增殖能力强弱呈负相关关系。另一方面,DRR1 在恶性度高的胶质母细胞瘤组织中的表达水平较正常组织显著升高,其表达水平高低与胶质母细胞瘤细胞侵袭能力强弱呈正相关关系。本文通过对近年来DRR1 相关研究的总结,揭示了DRR1 在正常神经系统发育及肿瘤发生发展过程中的重要作用,对全面了解DRR1 的生物学功能提供了必要的参考,同时也为进一步研究DRR1 的生物学功能提供了新的依据。

DRR1与COMMD1基因在人肾上皮细胞HEK293T中相互作用的研究

目的到目前为止,肿瘤抑制基因DRR1被发现在各种组织中表达广泛,但其作用机制尚未完全揭示。本研究主要对DRR1在细胞核内与COMMD1基因之间相互的作用进行研究。方法采用免疫荧光染色的方法检测DRR1和COMMD1在HEK293T细胞核内表达情况,同时,在细胞中过表达DRR1后检测细胞核内COMMD1含量变化。结果DRR1主要在细胞核内表达,且DRR1与COMMD1在细胞核内相互结合;过表达DRR1可以促进细胞核内COMMD1的富集。结论DRR1对COMMD1在细胞核内富集具有调控作用,为DRR1的作用机制提供了新的理论依据。

Midkine对神经母细胞瘤TNB1细胞生长与分化的影响

目的:通过对中期因子(midkine,MK)在神经母细胞瘤TNB1细胞中的生物学作用进行研究,揭示该因子在肿瘤细胞生长和分化中相关分子机制。方法:1)利用神经母细胞瘤临床患者数据库,明确MK的表达与神经母细胞瘤患者生存率之间的关系。在体外细胞实验中,利用携带MK shRNA载体的慢病毒体外感染神经母细胞瘤TNB1细胞,分析MK的敲减对其生长与分化的影响;2)通过进一步临床数据分析,找到与MK表达的相关基因,并采用Real-time PCR验证MK对相关基因之间表达联系;3)联合使用携带MK shRNA和肾细胞癌下调蛋白1(downregulated in renal carcinoma 1,DRR1)shRNA载体的两种慢病毒感染TNB1细胞,评价MK-DRR1轴对TNB1细胞分化以及克隆形成的影响。结果:临床数据分析显示MK的表达量与神经母细胞瘤患者生存率呈负相关(P<0.01)。体外细胞实验结果表明MK的敲减能够抑制TNB1细胞生长,同时促进TNB1细胞分化;临床数据分析结果进一步证明,在神经母细胞瘤中MK与DRR1的表达量呈负相关(P<0.01);Real-time PCR结果证实下调MK表达可增强TNB1细胞中DRR1的表达(P<0.01);细胞挽救实验显示敲低DRR1的表达可以挽救由MK敲减而产生的对TNB1细胞的分化和软琼脂克隆的影响(P<0.01)。结论:MK通过调控DRR1的表达从而参与调节TNB1细胞的生长与分化。