人参皂苷Rb1干预DSS诱导结肠炎模型小鼠转录组高通量测序及分析

目的研究人参皂苷Rb1干预葡聚糖硫酸钠盐(Dextran Sulfate Sodium Salt,DSS)诱导结肠炎模型小鼠转录组学信息特征。方法C57BL/6雄性小鼠构建动物模型,将15只小鼠分为正常组、模型组和Rb1组,每组5只。模型组和Rb1组给予4%DSS并自由饮水,第2天给Rb1组40 mg/kg Rb1进行干预。持续9 d,处死小鼠后,取结肠组织。利用Illumina高通量测序平台分别对三组小鼠结肠组织进行转录组测序。利用测定的转录组学数据对Rb1组和模型组两两比较之后进行重叠分析,筛选差异基因进行GO和KEGG分析。结果Rb1干预后各项指标均有改善;GO富集后其有10450个有效差异表达基因得到GO注释,其中分子功能占13.5%,生物过程占68.73%,细胞组成占17.77%;富集最显著的前20个KEGG通路中与Rb1干预后密切相关的有钙离子信号通路、神经活动配体-受体相互作用通路以及c AMP信号通路。结论人参皂苷Rb1能够缓解DSS诱导结肠炎模型小鼠的症状。通过构建Rb1干预后DSS诱导结肠炎模型小鼠结肠组织转录组序列数据库,为以后Rb1功能基因的挖掘和参与代谢途径提供数据支撑,为临床应用提供新的思路。

靖宇平贝母浸出物通过调节肠道菌群失调缓解DSS诱导溃疡性结肠炎

目的基于肠道菌群调节探讨靖宇平贝母浸出物抗DSS诱导溃疡性结肠炎效果。方法利用DSS诱导构建溃疡性结肠炎小鼠模型,通过检测疾病活跃指数、结肠长度和肠组织学评分,明确靖宇平贝母浸出物抗溃疡性结肠炎效果;通过16S rRNA测序分析结肠内容物中微生物组成与多样性,明确靖宇平贝母浸出物对溃疡性结肠炎小鼠肠道菌群的影响。结果靖宇平贝母能够显著性降低模型小鼠的疾病活跃指数,阻止结肠缩短以及改善肠组织损伤;并且能够显著性增加潜在有益菌丰度(如Faecalibaculum,Ruminococcaceae_UCG-014和Lachnospiraceae_NKA136_group等),降低潜在有害菌丰度(如Bacteroides和Escherichia)。结论靖宇平贝母浸出物可以通过调节肠道菌群失调改善模型小鼠的溃疡性结肠炎症状。

烟碱型乙酰胆碱受体激动剂GTS-21对鼠实验性结肠炎的影响

目的:通过建立葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)诱导的鼠结肠炎模型,探讨alpha7烟碱型乙酰胆碱受体(alpha7 nicotinic acetylcholine receptor,α7n ACh R)激动剂GTS-21改善模型鼠结肠炎症的效果及可能机制。方法:8~10周龄SPF级雄性BALB/c小鼠随机分为正常对照(CON)组、DSS模型组、GTS-21治疗组(每组8只)。DSS模型组采用自由饮用含3.5%DSS水造模,治疗组自由饮用3.5%DSS水,同时给予GTS-21[10 mg/(kg·d),腹腔注射],共7 d,对照组予生理盐水,每天予各组鼠疾病活动性评分(DAI评分)。第8天处死小鼠,观察结肠黏膜组织大体改变并测其长度、湿重,HE染色后行肠组织学炎症(HI)评分;细胞因子芯片筛选变化的细胞因子;ELISA法进一步检测芯片筛选出的变化明显的细胞因子。结果:(1)DSS组鼠结肠长度变短[(8.22±0.37)cm vs.(11.65±0.30)cm,n=8,P<0.001],DAI评分较正常组增高[(1.51±0.10)分vs.0分,n=8,P<0.001],HI评分升高[(20.5±3.9)分vs.(0.9±0.4)分,n=8,P<0.001],表明造模成功;(2)给予烟碱型乙酰胆碱受体激动剂GTS-21的DSS模型鼠,DAI评分下降[(0.25±0.10)分vs.(1.51±0.10)分,n=8,P<0.001];结肠长度较DSS组改善[(9.42±0.32)cm vs.(8.22±0.37)cm,n=8,P<0.05];HI评分减低[(7.5±2.0)分vs(20.5±3.9)分,n=8,P<0.01],提示GTS-21能改善DSS诱导的鼠结肠炎症;(3)细胞因子芯片筛选实验结果表明,DSS组γ干扰素诱导单核细胞因子(monokine induced by IFN-γ,CXCL9/Mig)升高最明显,此外肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)、白细胞介素1β(interleukin 1β,IL-1β)、γ-干扰素(interferonγ,IFN-γ)也明显升高;(4)进一步ELISA检测芯片变化最明显的CXCL9/Mig,发现DSS组鼠血清CXCL9/Mig明显升高(P<0.05),给予GTS-21后,血清CXCL9/Mig降低(P<0.05)。结论:GTS-21能减轻实验结肠炎鼠肠道炎症,该作用可能与减低趋化因子CXCL9/Mig水平,进而减少炎症细胞的肠道聚集有关。

青稞酥油饮食对小鼠肠道菌群以及葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠结肠炎症状的影响

目的探求青稞酥油饮食对小鼠肠道微生物分布及葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠慢性溃疡性结肠炎的影响。方法定制饮食,将标准鼠繁殖料(N鼠料)中的大豆油和玉米次粉替换为等比例的酥油和生青稞粉,以制成定制饲料(C鼠料)。将28只5周龄雄性小鼠随机分为4组,每组7只:1)NW组:饲养以N鼠料和水;2)ND组:饲养以N鼠料和1.8%DSS;3)CW组:饲养以C鼠料和水;4)CD组:饲养以C鼠料和1.8%DSS。以7 d 1.8%DSS溶液之后换10 d蒸馏水为1个周期,共进行3个周期完成建模。匹拉米洞法测定小鼠粪便隐血进行DAI评分,选取结肠组织HE染色及粪便微生物16S rRNA高通量测序。结果青稞酥油饮食可提高正常小鼠肠道菌群丰度,改善肠道菌群组成,其中别样棒菌属增加。加入DSS诱导溃疡性结肠炎模型后,青稞酥油饮食组DAI评分显著增高(P<0.05),组织学检测结肠黏膜糜烂溃疡且肠组织腺体排列混乱,小鼠肠道菌群丰度和多样性降低(P<0.05),但梭菌属、萨特氏菌属增加(P<0.05)。结论青稞酥油饮食可增加正常小鼠肠道菌群丰度,改善肠道菌群组成,但对于DSS诱导的慢性溃疡性结肠炎炎性反应无显著改善。

母乳婴儿源植物乳杆菌BF_15体外抗氧化活性及缓解DSS诱导小鼠结肠氧化损伤的研究

以鼠李糖乳杆菌GG(LGG)为对照菌株,研究了自行分离鉴定的母乳婴儿源益生菌植物乳杆菌BF_(1)5的体外抗氧化活性、安全性与缓解DSS诱导小鼠结肠氧化损伤的症状。结果表明:试验菌株植物乳杆菌BF_(1)5能够耐受高浓度的H2O2(3.5 mmol/L)。发酵上清液中,菌株BF_(1)5对DPPH的清除能力低于对照菌株LGG(P<0.01);对·OH清除能力高于LGG(P<0.05);对·O2-清除能力高于LGG(P>0.05);抗脂质过氧化能力低于LGG(P<0.01)。菌悬液中,菌株BF_(1)5对DPPH和·O2-的清除能力高于对照菌株LGG(P>0.05);对·OH清除能力高于LGG(P<0.01);抗脂质过氧化能力低于LGG(P<0.01)。试验菌株BF_(1)5与对照菌株LGG均不产生有害代谢产物(生物胺、亚硝酸盐、吲哚),不具有溶血性。动物实验中,菌株BF_(1)5通过早期灌胃小鼠,减轻了小鼠肠黏膜损伤及炎症细胞浸润的程度,提高了超氧化物歧化酶(SOD)活性(P<0.01),降低了丙二醛(MDA)含量(P<0.01),进而有效缓解了DSS诱导小鼠结肠氧化损伤的症状,其效果与对照菌株LGG相当(P>0.05)。本研究为来自人体母乳婴儿源益生菌的开发、应用及其早期干预缓解溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis,UC)等肠道疾病提供了科学依据,也为氧化应激作为治疗UC等肠道疾病的新靶点提供了借鉴指导。

复方苦黄汤对实验性结肠炎小鼠结肠组织中Th17、Tregs分化相关转录因子表达的影响

目的:研究复方苦黄汤对实验性结肠炎小鼠结肠组织中Th17、Tregs分化相关转录因子表达的影响,探讨其治疗结肠炎的疗效和机制。方法:将36只BALB/c小鼠随机分为4组:正常对照组、模型组、地塞米松组和复方苦黄汤组,每组9只。正常对照组未行造模,其余3组自由饮用4%DSS水溶液共7 d建立实验性结肠炎模型。复方苦黄汤组小鼠给予复方苦黄汤灌胃,地塞米松组小鼠给予地塞米松腹腔注射,模型组和正常组小鼠均以蒸馏水灌胃,造模成功后第2天开始每日给药治疗共7 d,第8天禁食24 h后处死小鼠,观察实验小鼠结肠黏膜大体形态及肠道炎症评分,免疫组化法检测小鼠结肠Th17、Tregs分化相关转录因子ROR&#x03A5;t及Foxp3表达。结果:模型组较正常对照组小鼠结肠肠道大体形态和炎症评分显著升高(P<0.05),复方苦黄汤组及地塞米松组评分均显著低于模型组(P<0.05),免疫组化结果模型组ROR&#x03A5;t阳性细胞数计数显著高于正常组(P<0.05),Foxp3阳性细胞数计数显著低于正常组(P<0.05),而复方苦黄汤组及地塞米松组ROR&#x03A5;t阳性细胞数计数显著低于模型组(P<0.05),Foxp3阳性细胞数计数显著高于模型组(P<0.05)。结论:复方苦黄汤可能通过调控肠道ROR&#x03A5;t/Foxp3表达,从而调节结肠炎小鼠Th17/Treg平衡起到减轻结肠黏膜炎症,保护结肠黏膜的作用。

壳聚糖对葡聚糖硫酸钠诱导急性结肠炎小鼠的疗效研究

[目的]本研究旨在探讨壳聚糖对葡聚糖硫酸钠(Dextran sulfate sodium,DSS)诱导急性结肠炎小鼠的疗效和可能机制。[方法]选取Balb/c小鼠40只,随机分为正常对照组、DSS组、美沙拉嗪组及壳聚糖组,除正常组自由饮食外,其余组连续饮用3%DSS溶液7d诱发急性结肠炎,建立溃疡性结肠炎模型,同时分别给予相应药物灌胃治疗,治疗期间每天观察小鼠的体重、粪便性状和血便情况,造模结束后检测结肠组织中性细胞髓过氧化物酶活力(myeloperoxidase,MPO)。[结果]DSS成功诱发急性结肠炎,小鼠有明显腹泻,粘液脓血便,体重减轻等。壳聚糖能有效改善DSS诱导的溃疡性结肠炎症状,降低结肠MPO活性(6.108±1.893U/g:3.502±0.529U/g,P<0.01);增加结肠长度,且HE染色的炎症程度和疾病活动指数均有明显改善。[结论]壳聚糖能有效治疗DSS诱发的急性结肠炎,主要通过诱导特异性免疫应答,降低炎症反应,增强机体免疫反应。未来有望成为治疗溃疡性结肠炎的潜在药物。

一株猪肠道Lactobacillus animalis LGM对结肠炎小鼠Th细胞分化转录因子基因表达的影响

【目的】从体外和体内研究Lactobacillus animalis LGM对Th细胞分化转录因子T-bet、GATA-3、ROR-γt和Foxp3的调节作用,以及探究L.animalis LGM对小鼠结肠炎的影响。【方法】本试验采用改良型的Hungate滚管技术从猪结肠内容物中分离一株L.animalis LGM,根据其16S rRNA序列进行鉴定。收集L.animalis LGM培养液上清,与细菌脂多糖(LPS,2μg/mL)同时孵育Caco-2细胞24 h,体外研究L.animalis LGM对Caco-2细胞内Th细胞分化转录因子(T-bet,GATA3,ROR-γt和Foxp3)mRNA表达的影响;配制L.animalis LGM细菌悬液,研究L.animalis LGM灌胃对DSS诱导结肠炎小鼠症状及结肠Th细胞分化转录因子和细胞因子(IFN-γ,IL-4,IL-17和IL-10)mRNA表达的影响,表达结果采用荧光定量PCR法检测。【结果】与对照组相比,L.animalis LGM培养液上清显著上调Caco-2细胞内ROR-γt与Foxp3 mRNA表达(P<0.05),显著下调GATA3、IL-4、IL-17和TGF-βmRNA表达(P<0.05)。L.animalis LGM灌胃显著上调小鼠结肠内ROR-γt和Foxp3的表达(P<0.05),显著降低了促炎因子IL-4和IL-17的表达(P<0.05),阻止了小鼠结肠长度缩短(P<0.05)。【结论】猪肠道分离L.animalis LGM表现出对Th细胞分化转录因子的选择性调节,显著上调Caco-2细胞及结肠炎小鼠ROR-γt与Foxp3 mRNA表达。降低DSS诱导结肠炎小鼠炎症水平,对DSS诱导结肠炎起保护作用,有助于维护肠道环境稳态。

热处理增强植物乳酸杆菌L-137模拟消化液的免疫调节活性和稳定性

本研究报道了热处理植物乳杆菌137对其体外细胞因子诱导活性、该活性在模拟消化液中的稳定性及体内免疫调节特性的影响。L-137细胞在固定的培养基被收集在,经或不经过后续热处理后进行冷冻干燥。热处理死的L-137细胞比未加热的L-137刺激小鼠脾细胞产生更多的白细胞介素-12p40。未加热的L-137细胞与模拟肠液共孵育时,白细胞介素-12p40诱导活性显著降低,而热处理灭的L-137细胞活性保持不变。此外,在右旋糖酐硫酸钠诱导的小鼠结肠炎模型中,热处理死的L-137比未加热的L-137具有更强的保护作用。因此,热处理可能对增强L-137细胞的免疫调节活性有效。