鸭坦布苏病毒E蛋白中和性单克隆杭体的制备

本试验利用纯化的鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus , DTMUV)奉贤株(FX2010)免疫BALB/c小鼠,通过淋巴细胞杂交瘤技术,筛选获得3株能够稳定分泌杭DTMUV的杂交瘤细胞,分别命名为:J1-E5-E4, 7B5和1E5-B6,3株杂交瘤细胞诱导同品系刁、鼠的杭体效价为1:12 800,1:6 400和1:25 600。间接ELISA和IFA结果显示,3株单杭均可以与DTMUV发生特异性反应。进一步研究发现,J1-E5-E4可以与DTMUV-E蛋白结合,使得表达E蛋白的293T细胞显现出特异性的绿色荧光;在病毒中和试验中,J1-E5-E4可以中和DTMUV,使其失去致死鸡胚的能力。这些结果表明,J1-E5-E4是一株针对DTMUV-E蛋白中和表位的单杭,该单杭将在DTMUV诊断和杭原分析中发挥重要作用。

杆状病毒表面展示鸭坦布苏病毒E蛋白的免疫原性及保护效果的研究

鸭坦布苏病毒(DTMUV)为新出现的病毒,主要引起鸭的产蛋量急剧下降。为评价真核表达DTMUV的E蛋白的免疫原性,本研究利用杆状病毒表面展示技术,构建表面展示DTMUV JSXZ株E蛋白的重组杆状病毒(r BV-DTMUV-E),将其感染昆虫细胞,从而将E蛋白展示在杆状病毒的表面,并对表达的重组E蛋白(r E)的免疫原性和保护效果进行研究。经western blot和间接免疫荧光试验证明r E能够在Sf9细胞中有效表达;并且呈可溶性表达。重组蛋白经镍柱纯化,并采用氢氧化铝乳化(0.1μg/m L),分别以0.2 m L、0.4 m L和0.6 m L的剂量免疫雏鸭,通过ELISA抗体检测结果证明,r E可以诱导产生高水平的Ig G血清抗体;MTT试验结果表明,r E能够刺激T淋巴细胞增殖;攻毒保护试验结果显示,其0.2 m L组免疫保护率为80%,0.4 m L和0.6 m L组保护率均为100%,而对照组雏鸭均表现为典型的DTMUV感染症状,其中4只死亡。以上研究结果为DTMUV亚单位疫苗的研究奠定了基础。

鸭坦布苏病毒E基因在昆虫细胞中的分泌表达及免疫原性与保护性研究

鸭坦布苏病毒(DTMUV)为新出现的病毒,主要引起鸭产蛋量急剧下降。本研究通过杆状病毒表达系统,利用蜂素信号肽(honeybee melittin signal peptide,Mels)构建分泌表达DTMUV JSXZ株E蛋白的重组杆状病毒,将其感染Sf9昆虫细胞,从而分泌表达DTMUV E蛋白,并对该表达E蛋白的免疫原性和保护效果进行了研究。经Western blotting、IFA试验证明E蛋白可以在Sf9昆虫细胞培养上清中分泌表达;通过免疫雏鸭试验、间接ELISA结果证明E蛋白可以诱导产生高水平的IgG血清抗体;MTT试验结果显示E蛋白能刺激T淋巴细胞增殖;攻毒保护试验结果显示0.3mL组免疫保护率为80%,0.6mL组和0.8mL组保护率均为100%,而PBS对照组雏鸭均表现为典型的DTMUV感染症状,其中3只死亡。上述研究结果为DTMUV亚单位疫苗的研究奠定基础。