酶联免疫吸附分析检测鳍藻毒素DTX1和DTX2

利用BALB/c小鼠腹水大量制备抗大田软海绵酸(Okadaic Acid,OA)的单克隆抗体,并以此抗体为探针建立了检测鳍藻毒素(Dinophysistoxins,DTXs)DTX1和DTX2的间接竞争酶联免疫吸附分析方法(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)。DTX1和DTX2各组分的标准曲线在一定范围内都有良好的线性范围和相关系数,最低检出浓度为0.53μg/L和0.45μg/L;批内和批间平均变异系数为6.18%、5.11%和7.28%、5.79%;加标样品平均回收率为76.4%、79.9%;OA与DTX1和DTX2的交叉反应率分别为53%和79%。结果表明,该方法可用于贝类样品中DTX1和DTX2的残留检测。

运动对大学生外周血T细胞Dtx1蛋白表达以及T细胞增殖与活性的影响

目的:探究体育运动是否影响大学生外周血T淋巴细胞Deltex 1(Dtx1)蛋白表达,以及对T细胞发育活性的影响。方法:将具有不同运动量及运动习惯的大学生志愿者分为3组(运动1组:>12 h/周,运动2组:>6 h/周,运动3组:<1 h/周),分别抽取外周血提取T淋巴细胞,MTT实验检测3组学生之间T淋巴细胞增殖能力差异,ELISA实验检测外周血IL-2与IL-10浓度差异,同时Western blotting实验检测3组学生之间T淋巴细胞内Dtx1蛋白表达差异。结果:3组成员T细胞增殖能力存在显著差异(P<0.05,运动1组>运动2组>运动3组);3组成员的外周血IL-2及IL-10浓度存在显著差异(P<0.05,运动1组>运动2组>运动3组);同时,3组成员的T淋巴细胞Dtx1蛋白表达存在显著差异(P<0.05,运动1组<运动2组<运动3组)。结论:体育运动可显著降低大学生T淋巴细胞内Dtx1蛋白的表达,显著增强T细胞的增殖发育能力以及活性。

CIK细胞联合多西紫杉醇对肺腺癌耐药细胞SPC-A1/DTX的体内外杀伤作用的实验研究

目的:探讨正常人细胞因子诱导的杀伤(Cytokine induced-killer,CIK)细胞联合多西紫杉醇对肺腺癌多西紫杉醇耐药细胞SPC-A1/DTX的体内外杀伤作用。方法:取健康人外周血单个核细胞,经IFN-γ、IL-2、抗CD3单抗联合诱导CIK细胞,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定多西紫杉醇、CIK细胞及两者联合对耐药细胞SPC-A1/DTX体外的细胞毒活性。用肺腺癌耐药细胞SPC-A1/DTX建立裸鼠皮下移植瘤模型,2周后腹腔给予生理盐水(对照组)、多西紫杉醇(单纯化疗组)、CIK细胞和CIK细胞联合多西紫杉醇(联合治疗组),观察它们对裸鼠移植瘤生长的抑制作用。结果:体外实验表明,SPC-A1/DTX对多西紫杉醇的耐受性(IC50为110.5μg/ml)较亲代敏感株SPC-A1(IC50为8.5μg/ml)增加了13倍。CIK细胞对人肺腺癌多西紫杉醇耐药细胞SPC-A1/DTX的杀伤活性,明显高于其亲代敏感株SPC-A1(P<0.05)。经CIK细胞作用后的SPC-A1/DTX细胞,仅10μg/ml的DTX即可使CIK:SPC-A1/DTX效靶比为5:1组中的联合杀伤率比单纯加DTX(同等剂量)组增加6.1倍,比单纯加CIK(相同效靶比)细胞杀伤率增加1.4倍,联合杀伤率的大小随效靶细胞比值和DTX浓度的升高呈依赖性增加。体内实验表明,CIK细胞联合多西紫杉醇可明显抑制裸鼠皮下肺腺癌耐药细胞移植瘤的生长,联合治疗组肿瘤生长缓慢,肿瘤组织坏死、淋巴细胞浸润明显。结论:CIK细胞联合多西紫杉醇能够显著抑制体内外肺腺癌多药耐药细胞SPC-A1/DTX的生长,为临床上应用CIK细胞联合化疗治疗放、化疗等无效的中晚期耐药肺癌患者提供了实验依据。

人工合成小麦HMW-GS D^tx1.5亚基的AS-PCR鉴定程序优化及遗传分析

人工合成小麦综合了自然界中现有四倍体小麦(Triticum turgidun)和粗山羊草(节节麦,Aegilops tauschii)的丰富遗传变异,是将野生祖先种中优异的抗病、抗逆基因成功利用到普通小麦育种中的重要桥梁。源于粗山羊草的高分子量谷蛋白(HMW-GS)Dtx1.5亚基,是一种新的优质亚基。本研究对HMW-GSDtx1.5亚基AS-PCR反应体系及扩增程序进行了逐步的优化,并利用普通小麦川育12与人工合成小麦Syn780(含有Dtx1.5亚基)杂交F2代(低代)和F9重组自交系(高代)群体对Dtx1.5亚基的遗传规律进行了分析。结果表明:优化后目的扩增条带清晰、稳定、可靠,可以用于Dtx1.5亚基的分子鉴定;Dtx1.5亚基在普通小麦与人工合成小麦杂交的低代和高代群体中的分布都符合孟德尔分离定律,说明源于粗山羊草的Dtx1.5亚基能在小麦遗传背景下遗传稳定,传递正常,可用于小麦品质育种。

扇贝和利玛原甲藻混合基体中大田软海绵酸和鳍藻毒素-1标准样品的研制

目的 研制基于扇贝和利玛原甲藻混合基质的大田软海绵酸(OA)和鳍藻毒素-1(DTX1)定量分析标准样品。方法 以扇贝组织和含有OA和DTX1的利玛原甲藻的藻泥为原料,经充分混匀、冷冻干燥制备基体OA和DTX1标准样品,开展定性确证以及均匀性、稳定性检验和协同定值分析。结果 经确证该标准样品中含有OA和DTX1;经方差分析法(F检验)检验评价均匀性良好;考察长期稳定性和模拟运输条件下短期稳定性,样品性能稳定;该基体标准样品中OA和DTX1特性标准值及不确定度分别为(7.039±0.272)mg/kg(k=2)、(2.012±0.021)mg/kg(k=2)。结论 该混合基体标准样品填补了国内目前没有该类标准样品的空白,可以用于方法验证、检测过程质量控制、能力验证等实验室质量控制活动。