LINC00341通过靶向miR-187对前列腺癌DU145细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响

目的 探讨LINC00341对前列腺癌DU145细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的靶向影响及机制。方法 将LINC00341过表达载体(pcDNA3.1-LINC00341)转染前列腺癌细胞DU145,检测细胞的增殖力、细胞凋亡及迁移和侵袭能力,蛋白质印记(Western blot)法检测Cyclin D1、P21、Bcl-2、Bax、MMP-2和E钙黏蛋白(E-cadherin)的表达。双荧光素酶报告实验联合RT-qPCR验证LINC00341对miR-187的靶向调控关系。将miR-187模拟物(miR-187 mimics)和pcDNA3.1-LINC00341共转染DU145细胞,采用上述方法检测细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力变化。结果 过表达LINC00341抑制DU145细胞Cyclin D1、Bcl-2和MMP-2的表达,促进P21、Bax和E-cadherin蛋白的表达水平,抑制DU145细胞的增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡。miR-187是LINC00341的靶基因,LINC00341靶向负性调控miR-187表达。过表达miR-187可逆转LINC00341过表达对DU145细胞的增殖、迁移侵袭抑制作用和凋亡促进作用。结论 LINC00341通过靶向下调miR-187抑制DU145细胞的增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡。

重组P53基因复合物对DU145细胞致瘤性的抑制作用

目的 观察野生型 P53基因对前列腺癌细胞系 DU1 4 5致瘤性的抑制作用。方法 将野生型 P53真核表达载体用 lipofec-tamine导入 DU1 4 5细胞中。PCR法和抗 P53基因单抗免疫组化方法检测 P53基因的表达情况 ,MTT法检测细胞的生长程度 ,流式细胞仪检测细胞的凋亡情况 ,软琼脂生长试验检测细胞集落形成能力的变化。结果 P53基因可转染入 DU1 4 5细胞中 ,且对其致瘤性有一定的抑制作用。结论 本实验从理论上证明了利用野生型 P53基因对前列腺癌进行基因治疗的可行性。

Survivin-siRNA真核重组质粒的构建及对前列腺癌DU145细胞增殖抑制作用

目的应用RNA干扰技术（RNAi），构建针对凋亡抑制因子survivin的siRNA，并检测其对DU145细胞增殖抑制的影响．方法构建重组质粒shRNA-sur1和shRNA-sur2并分别转染DU145细胞株，通过MTT法和流式细胞术观察其对细胞的增殖抑制作用及凋亡的影响．结果成功构建针对survivin干扰的两种真核表达质粒，转染72h后，两个实验组细胞的生长速度分别是脂质体组的（37．2％±5．8％）（n=3）和（43．5％±7．2％）（n=3）．流式细胞术发现：实验组细胞的G1期细胞比例明显高于对照组，而G2期和S期细胞比例减少，细胞出现凋亡，与脂质体组比较，两实验组细胞的凋亡率分别为（21．70％±6．45％），（14．835±5．65％）．结论成功构建针对survivin siRNA的真核重组质粒，两种质粒体外均可抑制DU145增殖并诱导其凋亡，为survivin介导的肿瘤基因沉默提供良好的基础．

shRNA介导GSTP1基因沉默对激素非依赖性前列腺癌细胞株DU145的影响

目的:探讨谷胱甘肽巯基转移酶P1(glutathione S-transferase P1,GSTP1)基因沉默对雄激素非依赖性前列腺癌细胞株DU145增殖活性和对化学治疗药物敏感性的影响。方法:根据选取靶序列形成短发卡状RNA(short hairpinRNA,shRNA)的DNA模板设计3条表达载体(shRNA255,shRNA554,shRNA593),并克隆到质粒pGPU6/GFP/Neo。经酶切和测序鉴定,筛选转染率最高基因沉默效果最好的shRNA作RNA干扰。DU145细胞株分为空白质粒转染组和shRNA转染组。转染前后按化学治疗药物分为氟尿嘧啶(fluorouracil,FU)组及紫杉醇(paclitaxel,PA)组,并按作用浓度(FU:30,60,120,240μg/mL;PA:0.2,2,10,20μg/mL)分别分成4个亚组,并分别设有一个空白对照组。四甲基偶氮唑盐[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide,MTT]比色法检测转染后细胞增殖活性的变化,MTT及末端脱氧核苷酸转移酶介导脱氧尿苷三磷酸缺口末端标记法(terminal de-oxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)检测转染前后不同浓度FU和PA对DU145细胞抑制增殖及诱导凋亡的效果。结果:3条表达载体(pGPU6/GFP/Neo-shRNA255,pGPU6/GFP/Neo-shRNA554,pGPU6/GFP/Neo-shRNA593)的转染率分别为(63.3±1.04)%,(76.2±0.68)%,(72.7±0.33)%,shRNA554转染率最高,三者之间比较差异有统计学意义(P<0.01)。转染后mRNA含量分别为128.31±2.50,43.24±4.30和85.62±6.30,GSTP1蛋白含量分别为163.92±12.40,65.38±9.30和114.25±16.70,shRNA554转染后GSTP1基因mRNA和蛋白含量均最低,三者比较差异有统计学意义(P<0.01)。MTT检测转染前FU不同浓度(30,60,120,240μg/mL)四个亚组作用后细胞存活率分别为(95.60±2.11)%,(90.20±0.86)%,(83.10±3.12)%和(74.60±1.32)%;转染后存活率为(91.30±1.43)%,(84.6±2.13)%,(73.2±1.52)%和(65.5±0.94)%。TUNEL检测转染前FU不同浓度(30,60,120,240μg/mL)四个亚组作用后细胞凋亡率分别为(5.50±0.88)%,(10.20±1.64)%,(15.20±2.39)%和(25.10±2.59)%;转染后凋亡率(10.80±0.62)%,(15.70±1.32)%,(20.40±1.89)%和(34.90±2.54)%。转染后相同FU浓度下细胞存活率降低,凋亡率增加,差异均具有统计学意义(P<0.01)。MTT检测转染前PA不同浓度(0.2,2,10,20μg/mL)四个亚组作用后细胞存活率为(98.50±2.34)%,(95.20±1.32)%,(89.40±0.68)%和(82.70±1.73)%;转染后存活率为(94.2±0.78)%,(86.5±2.13)%,(78.7±1.34)%和(70.1±0.76)%。TUNEL检测转染前PA不同浓度(0.2,2,10,20μg/mL)四个亚组作用后细胞凋亡率分别为(2.4±1.07)%,(5.2±1.33)%,(10.5±2.41)%和(20.7±1.92)%;转染后凋亡率(5.46±2.13)%,(13.8±1.24)%,(21.2±2.39)%和(29.2±2.21)%。转染后相同PA浓度下细胞存活率降低,凋亡率增加,差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论:shRNA介导的GSTP1基因沉默可抑制雄激素非依赖型前列腺癌DUl45细胞增殖活性,诱导凋亡,并且其作用呈现时间依赖性,可提高其对于化学治疗的药物敏感性。

TGF-α诱导前列腺癌DU145细胞神经内分泌分化和增强DU145对顺铂的化疗耐药性

目的:研究TGF-α是否具有EGF相似的可诱导前列腺癌DU145细胞发生神经内分泌分化(neuroendocrine differentiation,NED)的作用,并探讨TGF-α诱导的前列腺癌DU145细胞神经内分泌分化对肿瘤化疗耐药性的影响。方法:将接受不同培养液处理的DU145细胞分为3组:2%FBS组、2%FBS+TGF-α5 ng/mL组和2%FBS+TGF-α10 ng/mL组。显微镜下观察TGF-α处理后DU145细胞的形态变化;Real time RT-PCR法检测神经特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)mRNA的表达水平;Western印迹检测NSE,P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp),多药耐药相关蛋白1(multiple drug resistance protein,MRP1)和Bcl-2蛋白的表达水平。流式细胞术分析TGF-α(5μg/mL)处理后DU145细胞周期的变化;MTT比色法测定TGF-α(5μg/mL)对DU145细胞顺铂化疗耐药性的影响。结果:同2%FBS组相比,2%FBS+TGF-α处理组的DU145细胞出现多形性,细胞伪足伸出;NED标志物NSEmRNA的表达水平升高,分别为上调了(3.6±0.5)倍(P<0.05)和(10.1±0.1)倍(P<0.01);细胞的NSE,Bcl-2和MRP1蛋白的表达水平也明显增加,但未检测到P-gp蛋白的表达;同时,TGF-α(5μg/mL)处理后DU145细胞的G1期细胞比例降低,S期和G2/M期细胞比例升高;顺铂的化疗耐药性增加。结论:TGF-α也可诱导前列腺癌DU145细胞神经内分泌分化增强,从而进一步增强DU145细胞对顺铂的化疗耐药性。

基质细胞在DU145前列腺癌细胞种植小鼠肿瘤模型中的作用

目的探讨前列腺基质细胞对肿瘤发生的作用。方法将BALB／c裸鼠分为两组，每组10只，对照组（D组）裸鼠皮下单纯注射前列腺癌细胞株DU145细胞，实验组（D＋P组）混合注射DU145细胞和前列腺外周带分离的基质细胞（PrSC），注射后第9周收集肿瘤组织，记录肿瘤重量。采用TUNEL法检测凋亡细胞的数量，采用免疫组织化学法标记α-SMA、Ki67和P53阳性细胞，分别检测肿瘤组织中基质细胞和血管数目，增殖细胞的数目和P53蛋白的表达。结果D＋P组瘤重、血管数量和增殖细胞多于D组，但凋亡细胞和P53的表达两组之间差异并无统计学意义。结论基质细胞在肿瘤产生中发挥了重要作用，PrSC的作用可能是促进肿瘤细胞增殖和血管生成，对细胞的凋亡影响较小。

帕米磷酸二钠及埃本磷酸二钠对前列腺癌细胞系DU145、LNCaP体外生长的抑制作用

目的 观察帕米磷酸二钠 (PAM )及埃本磷酸二钠 (IBN )对体外培养的前列腺癌细胞系DU 14 5、LNCaP生长的抑制作用 ,探讨双磷酸盐类药物抑制前列腺癌细胞生长的机制。方法 采用MTT法检测不同剂量的PAM、IBN对DU 14 5、LNCaP细胞系生长的影响 ,并计算 2种药物的IC50 值 ,应用流式细胞仪检测DNA含量以探讨双磷酸盐类药物的作用机制。结果 PAM、IBN对前列腺癌DU 14 5、LNCaP细胞系的生长均有抑制作用 ,抑制效应与药物剂量、作用时间成正比 ,15 0 μg/mlPAM和 10 0 μg/mlIBN作用 72h后 ,2种细胞的生存率均低于 40 .0 0 % (P <0 .0 5 )。根据IC50 值可知IBN对前列腺癌细胞的抑制作用比PAM强。结论 PAM、IBN对体外生长的前列腺癌细胞系DU 14 5、LNCaP产生剂量、时间依赖性的抑制作用 ,其抑制细胞的作用机制为促进癌细胞凋亡和干扰DNA合成。

茶多酚对前列腺癌细胞DU145生长的影响

目的:探讨茶多酚对前列腺癌细胞生长的影响及其作用机制。方法:选取激素非依赖性前列腺癌细胞系DU145为研究对象,在药物组的培养基中加入茶多酚使其终浓度分别为50、100、250、500μg/ml,对照组加入正常细胞培养基。各组细胞培养48 h后,采用MTT比色法检测细胞生存率,然后通过Western印迹分析和荧光定量RT-PCR法检测各组细胞survivin基因表达情况。结果:加入茶多酚溶液48 h后,各药物组细胞存活率分别为0.97±0.12、0.71±0.07、0.20±0.03和0.08±0.01,与对照组相比,除50μg/ml组(P=0.42)外,其余3个药物组细胞存活率均明显低于对照组(P﹤0.01)。随茶多酚作用时间增加,各组细胞存活率呈现下降趋势,到96 h时,除50μg/ml组,其余3组细胞存活率均在5%以下。加药48 h后,对照组、100、250、500μg/ml药物组的sur-vivin表达条带灰度值分别为15 075±48、13 425±31、2 017±24、1 274±22,与对照组相比,3个药物组survivin蛋白表达均明显减少(P均﹤0.01)。另外,50、100、250、500μg/ml药物组给药48 h时的survivin mRNA量分别为0.74±0.03、0.64±0.02、0.52±0.01、0.21±0.02,均明显少于对照组(P均﹤0.01)。结论:茶多酚可以抑制前列腺癌DU145细胞的生长,且这种作用可能与survivin基因表达减少有关。

miR-3691-3p靶向调控E2F3/PRDM1对前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:探讨微小RNA-3691-3p(miR-3691-3p)调控的靶基因E2F3(E2F transcription factor 3)和PR结构域蛋白1(PR domain containing 1,PRDM1)对前列腺癌细胞增殖、迁移与侵袭的影响。方法:在前列腺癌DU145细胞株中,转染不同浓度梯度的miR-3691-3p mimic后,采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测候选靶基因E2F3和PRDM1 mRNA和蛋白表达的变化;人工合成候选靶基因的小干扰RNA(E2F3 siRNA和PRDM1 siRNA)转染入DU145细胞中,采用实时荧光定量PCR检测siRNA在细胞中的转染率;DU145细胞株分别转染阴性对照siRNA、E2F3 siRNA和PRDM1 siRNA后,采用MTT、Transwell、划痕实验检测DU145细胞株增殖、迁移、侵袭能力的变化。结果:随着miR-3691-3p mimic转染浓度增高,在DU145细胞株中E2F3和PRDM1 mRNA的表达量逐渐下降(P<0.01或P<0.05),两个蛋白的表达水平均明显降低(P<0.01)。与阴性对照组相比,转染E2F3 siRNA和PRDM1 siRNA的DU145细胞株中,E2F3和PRDM1在mRNA水平上表达量显著减少(E2F3:t=31,P<0.01;PRDM1:t=10.44,P<0.01)。且转染E2F3 siRNA的DU145细胞增殖、迁移和侵袭能力显著下降(均P<0.01);而转染PRDM1 siRNA的DU145细胞增殖和侵袭能力显著下降(均P<0.01),迁移能力没有明显变化(P>0.05)。结论:在DU145细胞中,低水平的miR-3691-3p通过靶向调控E2F3和PRDM1的增高来增强细胞的生物学特性。

糙叶败酱中新的环烯醚萜苷元成分体外抗肿瘤作用研究

目的 研究糙叶败酱中一个新的环烯醚萜苷元成分体外抗肿瘤作用。方法 采用四唑盐 (MTT)比色法研究糙叶败酱中环烯醚萜苷元成分对人前列腺癌细胞株DU1 4 5和PC3生长的影响。结果 PS I可显著抑制人前列腺癌细胞株DU1 4 5和PC3生长 ,并且具有一定的时间、剂量依赖关系。结论 环烯醚萜苷元PS I是糙叶败酱抗肿瘤作用的活性成分之一。

依立雄胺对雄激素非依赖前列腺癌细胞DU-145的作用

目的为研究依立雄胺治疗前列腺癌的可能性及可能机制,探讨依立雄胺体外对人激素非依赖型前列腺癌细胞(DU-145)生长的作用。方法用2.5,5,10,20和40μM的依立雄胺作用DU-145细胞3天后,用普通倒置显微镜进行细胞形态学观察;用黄酰罗丹明B法(SRB法)评价依立雄胺对前列腺癌细胞株DU-145的体外增殖抑制作用绘制的生长曲线;应用流式细胞仪评价依立雄胺对对前列腺癌细胞株DU-145的周期阻滞作用。结果 40μM和20μM的依立雄胺作用DU-145细胞3d后,可使其明显的皱缩凋亡;依立雄胺对DU-145呈现明显的浓度依赖的体外增殖抑制作用;通过流式细胞仪分析发现,依立雄胺对DU-145呈现明显的浓度依赖的周期阻滞作用。

广藿香醇对人雄激素非依赖性前列腺癌细胞DU145生长的抑制作用及机制

目的:观察广藿香醇(pachouli alcohol,PA)对人雄激素非依赖性前列腺癌细胞DU145的凋亡诱导效应及增殖抑制作用,探讨其发生机制。方法:广藿香醇10,20,40,80,160 mg·L-1作用在密度为6×107/L DU145细胞24,48,72 h后,采用四甲基偶氮唑盐法(MTT)检测广藿香醇对细胞的生长抑制作用;透射电镜观察药物诱导细胞凋亡形态变化;Annexin V-FITC,PI双标记法流式细胞仪检测药物诱发细胞凋亡的改变;Western blot检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2关联X蛋白(Bax)、凋亡抑制蛋白Livin的表达。结果:MTT法检测提示广藿香醇处理组细胞增殖抑制作用明显,10,20,40,80,160 mg·L-1广藿香醇对DU145的24,48,72 h抑制率分别为5.73%,16.67%,22.61%;13.42%,25.03%,39.68%;25.92%,31.46%,52.76%;39.61%,54.68%,73.52%;56.42%,77.35%,91.58%,呈剂量-时间依赖性(P<0.05)。透射电镜显示药物作用后细胞出现凋亡形态改变。流式细胞仪检测提示广藿香醇作用使细胞凋亡率明显升高,与对照组比较有统计学意义(P<0.05)。Western blot检测提示广藿香醇可增强细胞Caspase-3,Bax的表达,下调Livin,Bcl-2蛋白的表达。结论:广藿香醇能抑制DU145细胞增殖,其作用机制可能与诱导细胞凋亡效应有关。