2022年青岛地区鸡源和鸭源多黏菌素耐药大肠杆菌流行情况

为了分析青岛地区鸡源和鸭源多黏菌素耐药大肠杆菌的流行特征,并为多黏菌素的临床应用提供参考依据,本试验于山东省青岛市屠宰场采集鸡源和鸭源粪便样本,通过多黏菌素培养基分离大肠杆菌;分别采用琼脂稀释法、PCR、接合试验和全基因组测序,分析菌株的药物敏感性、耐药基因和毒力因子流行特征、系统发育群、mcr-1基因可转移性和遗传环境。结果显示,本试验从133份粪便样本中共分离获得26株多黏菌素耐药大肠杆菌,总分离率为19.55%(26/133),其中鸭源菌株分离率(24.24%,16/66)高于鸡源菌株(14.93%,10/67)。药物敏感性分析结果显示,所有菌株对替加环素和美罗培南全部敏感,对其余测试药物耐药率较高(42.31%~100%),所有分离菌株均存在多重耐药现象,鸡源菌株多重耐药较为分散,而鸭源菌株多重耐药集中于6和9重。26株分离菌株均携带黏菌素耐药基因mcr-1;其余耐药基因携带率介于7.69%~96.15%,tet(B)基因仅在鸡源菌株中携带(20.00%),qnrS基因在鸡源菌株中携带率(30.00%)显著低于鸭源(100%)。毒力因子检测发现,tarT、aer、pap和neuC基因在鸡源菌株中的携带率(90.00%、70.00%、50.00%和30.00%)高于鸭源(62.50%、12.50%、0%和0%)。系统发育群结果显示,青岛地区多黏菌素耐药大肠杆菌的主要系统发育群为A组,占比为76.92%。接合试验证实了部分mcr-1具有可转移性。mcr-1遗传环境结果显示,mcr-1上、下游并未发现插入序列。结果表明,mcr-1仍旧是导致禽源多黏菌素耐药大肠杆菌流行的主要“元凶”,但鸡源和鸭源多黏菌素耐药菌株在耐药性、耐药基因和毒力因子检出率等方面表现出一定差异性。因此,mcr-1在食品动物源细菌中的流行研究和监控仍旧不可忽视。

麻旺鸭源大肠杆菌耐药表型分析及β-内酰胺酶、PMQR基因检测

本研究旨在了解麻旺鸭源大肠杆菌对β-内酰胺类、氨基糖苷类、四环素类、酰氨醇类、氟喹诺酮类和磺胺类药物的耐药情况以及β-内酰胺酶基因和质粒介导的喹诺酮耐药(plasmid-mediated quinolone resistance, PMQR)基因流行情况。从重庆市酉阳县4个麻旺鸭养殖场采集146份泄殖腔拭子样品,经选择性增菌和PCR扩增大肠杆菌特异性phoA基因分离鉴定大肠杆菌。采用纸片扩散法测定分离菌对25种抗菌药物的耐药性并检测分离菌株中的β-内酰胺酶基因和PMQR基因。结果显示:共分离到大肠杆菌146株。这些菌株对氨苄西林、头孢唑啉耐药严重,耐药率超过50%;对庆大霉素、阿米卡星、氧氟沙星完全敏感。分别有111株(76.0%)和83株(56.8%)菌携带至少1种β-内酰胺酶基因和PMQR基因,其中bla_(TEM)(74.0%,108/146)和qnrS(54.8%,80/146)基因最为流行。63株菌同时携带β-内酰胺酶基因和PMQR基因。麻旺鸭源大肠杆菌对常用抗菌药物存在耐药,且广泛携带β-内酰胺酶基因和PMQR基因。

通辽部分地区鸭源大肠杆菌耐药性检测及多重耐药菌株YA-1全基因组测序分析

【目的】大肠杆菌作为家禽最常见细菌性病原之一,其耐药性的不断增强已引起广泛关注。试验旨在了解通辽地区部分鸭场大肠杆菌的耐药性及耐药基因分布,为该地区鸭源大肠杆菌耐药性及耐药基因的研究提供参考。【方法】经16S rRNA测序、生化试验和小鼠致病性试验对送检的通辽市各旗县15份病死鸭肠道样品进行病原菌分离纯化,对分离菌株进行药敏试验及耐药基因的PCR检测,并选取多重耐药菌株进行全基因组测序。【结果】所分离的10株鸭源大肠杆菌均具有不同程度耐药性,对链霉素、环丙沙星、恩诺沙星等药物的耐药率在80%及以上,耐药基因aphA1、strB和qnrS的检出率最高,达到100%。多重耐药菌株YA-1全基因组测序证实,该菌株染色体大小为4 844 827 bp,携带3个完整的质粒,大小分别为144 776 bp(pTLYA-1)、113 584 bp(pTLYA-2)和77 544 bp(pTLYA-3)。分离菌株携带arr-3、aadA16、sul1等70个耐药基因,其中pTLYA-1中携arr-3、dfrA27、aadA16等8个可移动耐药基因,pTLYA-3中携带floR、tetA、sul2等5个可移动耐药基因,pTLYA-2中未发现耐药基因。【结论】由通辽地区部分鸭场分离的鸭源大肠杆菌存在多重耐药性,耐药水平较高,aphA1、strB和qnrS耐药基因普遍流行。

种鸭大肠杆茵性生殖器官病的研究——6.氢氧化铝甲醛灭活菌苗免疫原性的研究

本文对大肠杆菌灭活菌苗的免疫原性、免疫鸭的外周血液免疫动态及卵黄凝集抗体的测定进行了研究。结果表明,菌苗对小白鼠、可疑感染鸭和健康鸭具有良好免疫原性,鸭的免疫期达4—5个月,可提高种鸭产蛋率和种蛋孵化率。鸭只免疫后45天平均凝集抗体滴度达270.4和313.6,免疫后5个月仍有62.5％鸭只的凝集抗体滴度≥40。免疫鸭血清r-球蛋白含量显著(P<0.05)或极显著(P<0.01),高于非免疫鸭。

鸭致病性大肠杆菌的分离鉴定及其生物学特性分析

鸭致病性大肠杆菌病是危害养鸭业的最为重要的细菌性传染病之一。本研究分离鉴定了65株鸭致病性大肠杆菌,并对其O血清型、耐药谱以及毒力相关基因进行了检测。结果表明:大肠杆菌O78,O2和O1为主要流行血清型,各占分离株的75%、11%和5%。对15种常规抗菌素或药物的药敏试验结果表明:100%的分离株对利福平和红霉素耐药;94%以上的分离株对头孢噻吩等10种抗菌素或药物耐受;70%以上的分离株对氯霉素、卡那霉素、庆大霉素、壮观霉素和头孢噻肟敏感。对14种可能的大肠杆菌毒力相关基因的检测结果表明:ompA、pfs和luxS三种基因高度保守,在分离菌株中的检出率为100%;iss、iuCD、tsh、fimC、cvaC和iroC基因的检出率达到72%以上,为重要的鸭致病性大肠杆菌毒力相关基因。

鸭致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验

对四川省什邡县马景镇养鸭户发病鸭中分离的3株细菌,经培养特性及生化试验,鉴定为大肠杆菌.用临床上常用的22种抗菌素纸片对分离菌株进行药敏试验.结果表明:所分离的大肠杆菌对菌必治、丁胺卡那霉素和复达欣3种药物高度敏感,对头孢噻肟、痢特灵、庆大霉素、链霉素和氨曲南中度敏感,而对利福平、四环素及呋喃妥因等药物表现为耐药性.

鸭源大肠杆菌氨基糖苷类耐药基因的检测与传播扩散机制

目的探索鸭源大肠杆菌对氨基糖苷类耐药及耐药传播的分子机制。方法用微量稀释法测定鸭源大肠杆菌对氨基糖苷类药物的耐药表型,用PCR和DNA测序方法检测多种氨基糖苷修饰酶基因和质粒介导的16S甲基化酶基因,通过质粒接合试验分析有关耐药基因和耐药性的质粒接合传递特点,并采用基因克隆方法研究rmtB的基因环境。结果 27株分离菌中,有23株、19株、19株和18株分别对安普霉素、庆大霉素、阿米卡星和新霉素耐药,耐药率分别为85.2%、70.4%、70.4%和66.7%。27株中的13株检测到rmtB基因,6株同时检测到rmtB和aac(3)-IV基因。质粒接合试验获得5株接合子,接合子对安普霉素、庆大霉素、阿米卡星和新霉素均高水平耐药(MIC≥128μg/ml),rmtB基因检测呈阳性反应。结论鸭源大肠杆菌氨基糖苷类药物耐药和交叉耐药十分严重,质粒介导的rmtB基因和质粒接合传递是其耐药及其传播扩散的重要机制。

鸭致病性大肠杆菌分离鉴定及药敏试验

2006年10月—2008年5月,从国内5个省的9个规模型鸭场的发病鸭或死亡鸭分离、鉴定大肠杆菌67株,采用肉汤稀释法测定其对头孢3代、4代,碳青霉烯类、单环β-内酰胺环类和氟喹诺酮类药物的敏感性。结果表明,试验菌株对以上药物的耐药率分别为头孢曲松钠(56.7%)、头孢噻呋(71.6%)、头孢吡肟(31.3%)、头孢噻肟(49.3%)、左氧氟沙星(50.7%)、环丙沙星(71.6%)、加替沙星(62.7%)、亚胺培南(0%)、氨曲南(56.7%),鸭致病性大肠杆菌的耐药性比较严重,且同类药物的交叉耐药不容忽视。

鸭大肠杆菌超广谱β-内酰胺酶检测(ESBLs)及药物敏感性测定

对国内7个省份临床分离的32株鸭大肠杆菌进行超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)检测及药物敏感性研究。结果表明,32株分离的鸭大肠杆菌中产ESBLs菌株7株,阳性检出率为21.87%;产ESBLs菌株对常用头孢三代及半合成青霉素类药物的敏感率低于42.9%,耐药率则高于28.6%,对阿莫西林、氨苄西林、头孢噻呋的耐药率高达100%。产酶菌株和非产酶菌株对新型头孢四代产品头孢吡肟及碳青霉烯类药物亚胺培南、美罗培南的敏感率高于96%。加酶抑制剂的β-内酰胺类抗生素如阿莫西林/棒酸、氨苄西林/舒巴坦、头孢哌酮/舒巴坦等对产酶菌株和非产酶菌株的敏感率全部高于未加酶抑制剂的单方药物。产ESBLs菌株存在多重耐药现象,酶抑制剂能够部分解决此类耐药性问题。

鸭疫里氏杆菌—大肠杆菌二联四价苗研究

从浙江省分离鉴定的67株鸭疫里氏杆菌、43株大肠杆菌中，筛选出免疫原性良好的优势血清型RA二株RA—J（Ⅰ型），RA—Y（Ⅱ型），Escherichia coli二株Ed6（O78）、Ed15（O1）作为制苗菌株，采用改进的液体培养工艺，使RA和E．coli含菌量分别稳定在（220-260）×10^10 cfu／ml和（230-280）×10^10cfu／ml，然后加佐剂研制出鸭疫里氏杆菌-大肠杆菌二联四价苗。免疫剂量1ml，对RA和E．coli的攻毒保护率分别达95．8％和91．7％；疫苗保存1年，经野外扩大试用，效果良好。

2011年黄三角地区鸭源大肠杆菌的分离鉴定

本试验从黄河三角洲区域2011年规模化肉鸭商品鸭场送检的病料中,通过细菌分离、培养特性观察、生化试验和致病性试验,分离到54株鸭源高致病性大肠杆菌。通过药敏试验,发现分离菌对多种抗生素存在多重耐药,其中对链霉素、氨苄西林和克林霉素3种药物的耐药性达到90%以上。敏感性较高的药物有阿米卡星、头孢噻肟、头孢曲松等药物。对分离菌进行了O抗原血清型分型,初步鉴定有12种血清型存在,其中O78、O35、O2、O18分别有12株、8株、6株和5株,为该区域优势血清型。本试验为了解和掌握该区域鸭源大肠杆菌病的流行情况,进一步研究和防控该病提供了参考依据。

鸭大肠杆菌血清型分析和疫苗菌株的筛选

目的分析鸭大肠杆菌的血清型分布,并进行疫苗菌株的筛选。方法近年来从山东、河北等地区的商品鸭场送检的病料中分离大肠杆菌,并进行血清型鉴定和生物特性分析;通过毒力检测和免疫原性试验筛选疫苗菌株。结果共分离到44株鸭大肠杆菌。根据菌体抗原O进行分型,共鉴定血清型有6种:O78、O93、O76、O2、O92和O32;其中O78为优势血清型,占56.8%(25/44);O93血清型次之,占15.9%(7/44)。免疫原性试验证实O78血清型菌株SD具有较强的毒力和良好的免疫原性。结论分析地区的鸭场鸭大肠杆菌以O78、O93、O76为优势血清型;免疫原性较好的SD菌株可作为下一步研制灭活疫苗的候选菌株。

鸭源大肠杆菌O_(88)的分离鉴定及药敏试验

为了分离鸭大肠杆菌病病原,并筛选出敏感药物,从河北省安新县某大型鸭场30日龄病死雏鸭肝脏分离到一株革兰氏阴性杆菌,通过菌落形态观察、培养特性试验和生化试验鉴定以及药敏试验。确定为大肠杆菌。应用大肠埃希菌O抗原定型血清鉴定为O_(88)。动物试验结果显示,该分离菌株对小鼠有较强的致死性,为致病性大肠杆菌。药敏试验结果显示,分离菌株对庆大霉素、头孢曲松、头孢拉啶、呋喃妥因等药物敏感,对氨苄西林和链霉素等产生耐药。

家禽发酵床养殖环境对病原微生物的防控作用研究

[目的]检测微生物发酵床养禽基质垫料中病原性大肠杆菌和沙门氏菌的数量,分析微生物发酵床技术对禽舍中病原菌的生物防控作用。[方法]参考国标检测环境中大肠杆菌和沙门氏菌的方法,以传统大棚养禽舍为对照,检测发酵床养鸡和发酵床养鸭舍中大肠杆菌和沙门氏菌的数量,同时检测动物肠道中2种病原微生物的数量指标,从环境微生物和动物体内携带微生物方面分析发酵床养禽技术对病原微生物的抑制作用。[结果]发酵床基质中2种病原微生物的数量明显低于普通饲养舍组,发酵床养殖环境中禽的肠道大肠杆菌和沙门氏菌的数量也低于普通养殖环境中动物体内携带的病原菌数量。[结论]发酵床养殖环境可以显著抑制病原微生物的繁殖,对控制禽类的细菌性传染病具有积极的生态安全意义。

一株鸭致病性大肠杆菌的分离鉴定及耐药分析

对江西省樟树市某鸭养殖场送检的病死鸭进行病理剖检,通过细菌分离、生化鉴定得到1株致病性大肠杆菌。药敏试验结果表明,该菌株对头孢拉定、头孢唑啉、头孢曲松和阿莫西林等β-内酰胺类抗生素产生了严重的耐药。通过质粒提取和接合转移试验对分离菌株进行耐药性分析;提取得到一10 kb左右的质粒;质粒接合转移试验表明,成功将该质粒转化入感受态E.coli JM109,并能使E.coli JM109获得对β-内酰胺类抗生素耐药且与分离菌株的耐药谱一致。推测该菌株产β-内酰胺酶的基因存在于质粒,并且该耐药基因能随质粒的转移转化入敏感菌E.coli JM109。

银翘解毒颗粒防治鸭实验性大肠杆菌病的药效试验

[目的]为评价银翘解毒颗粒对鸭人工感染大肠杆菌病的疗效。[方法]以仙湖3号鸭为研究对象,通过体外和体内抑菌试验研究了银翘解毒颗粒防治鸭实验性大肠杆菌病的疗效,并对银翘解毒颗粒的临床安全性进行了探讨。[结果]体外抑菌试验表明,银翘解毒颗粒对鸭大肠杆菌病有抑制作用,其最小抑菌浓度为0.012 5 g/ml。体内抑菌试验中,感染对照组出现典型大肠杆菌病理变化,各试验组临床症状较轻。5.01、.0 g/kg银翘解毒颗粒组中的有效率、痊愈率显著高于感染对照组,5.0、1.00、.5 g/kg 3个剂量组肉鸭的相对增重率显著高于感染对照组。临床安全试验表明,银翘解毒颗粒剂的安全性较高。[结论]银翘解毒颗粒可用于防治鸭大肠杆菌病,以1.0g/kg的防治效果最佳。

辽宁锦州地区家禽大肠埃希菌耐药性研究

为了解辽宁锦州地区鸡、鸭、鹅源大肠埃希菌的耐药性情况,分别从健康和患病鸡、鸭、鹅分离出302株大肠埃希菌,并采用微量稀释法测定了这些菌株对12种抗菌药物的敏感性。结果显示,302株大肠埃希菌除对阿米卡星和多黏菌素B较敏感,对其他抗菌药物呈现不同程度的耐药且多重耐药现象严重。除对氨苄西林、氯霉素和环丙沙星耐药性最高的为鹅源大肠埃希菌和鸭源大肠埃希菌外,对其他抗菌药物耐药率最高的都是鸡源大肠埃希菌;同时,从患病组家禽分离的大肠埃希菌对氨苄西林以外的其他11种抗菌药物的耐药率明显高于健康组大肠埃希菌。由此可见,辽宁锦州地区鸡、鸭、鹅大肠埃希菌对不同抗菌药物的耐药现象有差异,这3种家禽对抗菌药物的整体耐药现状已不容乐观,有必要进一步加强耐药性的监测,为指导兽医临床合理使用抗菌药物提供指导。

金定鸭神经症状相关致病菌分离和鉴定

【目的】探究导致金定鸭神经症状的病原菌。【方法】从辽宁金定鸭主产区4个24~48日龄的发病群中选择有神经症状以及纤维素性心包炎、肝周炎和气囊炎病变的病例共22例,用胰酶大豆琼脂(tryptic soy agar,TSA)和麦康凯琼脂(MacConkey’s agar,MCA)从脑组织分离细菌,通过革兰染色和瑞氏染色、生化试验和16S rDNA基因序列分析法对细菌分离株进行鉴定。【结果】从金定鸭脑组织中分离出的19株细菌均为革兰阴性杆菌,其中17株细菌(命名为H1株~H17株)在MCA培养基不生长,在生化试验中呈阴性结果,另外2株细菌(命名为H18株和H19株)在MCA形成红色菌落,能发酵葡萄糖、乳糖和麦芽糖,甲基红与吲哚试验均为阳性。以H1株为代表的17株分离株与血清1~19型的鸭疫里默氏菌(Riemerella anatipestifer,RA)参考菌株之间16S rDNA基因序列相似性为99.1%~100%。分离株H18株和H19株与所选8株大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)参考菌株之间16S rDNA基因序列相似性为99.2%~99.9%。用16S rDNA扩增产物序列进行遗传演化分析的结果显示,以H1株为代表的17株分离株属于RA,分离株H18株和H19株属于大肠杆菌。【结论】在观察的病例中,RA是导致金定鸭表现神经症状的主要致病菌,大肠杆菌亦可导致金定鸭出现神经症状。

输卵管炎种鸭大肠杆菌的分离鉴定及生物学特性分析

为分析表现输卵管炎种鸭体内分离的大肠杆菌的致病性、药敏试验、血清型及毒力基因携带情况,无菌采集表现输卵管炎的种鸭肝脏,进行大肠杆菌的分离鉴定,经易感鸭皮下注射,测定其致病性;纸片法进行药敏试验;凝集试验确定血清型;PCR法检测毒力基因。结果共分离鉴定大肠杆菌16株,其中强毒菌株11株。70%以上菌株表现敏感的药物有丁胺卡那霉素、氟苯尼考、头孢唑啉、左氧氟沙星和壮观霉素,70%以上菌株表现耐受的药物有复方新诺明、卡那霉素、庆大霉素、恩诺沙星和氟哌酸。16株大肠杆菌分属于4个血清型,O78占56.3%,为主要血清型。毒力基因irp2、fyuA、fimC和papC的检出率分别为68.8%、87.5%、75%和100%。总结说明,从表现输卵管炎的种鸭体内共分离到16株大肠杆菌,O78是主要的血清型,首选壮观霉素和氟苯尼考等敏感药物进行治疗。

辽宁锦州地区三种家禽大肠杆菌耐药性研究

分别从健康和患病鸡、鸭、鹅分离出302株大肠杆菌,采用微量稀释法测定菌株对12种抗菌药物的敏感性。结果表明,302株大肠杆菌除对阿米卡星和多粘菌素B较敏感,对其他抗菌药物呈现不同程度的耐药且多重耐药现象严重。鹅源大肠杆菌和鸭源大肠杆菌对氨苄西林、氯霉素和环丙沙星耐药性较高,鸡源大肠杆菌对其他抗菌药物耐药率较高。同时,患病组家禽分离的大肠杆菌对氨苄西林以外的其他11种抗菌药物的耐药率明显高于健康组大肠杆菌。结果显示,辽宁锦州地区鸡、鸭、鹅三种家禽大肠杆菌对不同抗菌药物的耐药性存在差异,三种家禽对抗菌药物的整体耐药性较强,应加强耐药性监测,为指导兽医临床合理使用抗菌药物提供指导。