五味子多糖通过抑制DUSP4/ERK信号通路对人胃癌HGC27细胞凋亡的影响

目的:探讨五味子多糖对人胃癌细胞HGC27凋亡的影响及可能的作用机制。方法:采用CCK8实验检测五味子多糖对HGC27细胞的增殖抑制作用,流式细胞术检测五味子多糖对HGC27细胞凋亡的影响,免疫印迹技术检测五味子多糖对HGC27细胞中双特异性磷酸酶4/细胞外信号调节激酶(dual specificity protein phosphatase 4/extracellular signal regulated kinase,DUSP4/ERK)信号通路相关蛋白、增殖及凋亡相关蛋白表达的影响。结果:与正常对照组相比,五味子多糖能明显抑制HGC27细胞增殖,差异具有统计学意义(P<0.05);五味子多糖能显著诱导HGC27细胞的凋亡,差异具有统计学意义(P<0.05);五味子多糖能明显抑制DUSP4、p-ERK、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)及B淋巴细胞瘤2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)蛋白的表达,且呈浓度依赖性。结论:五味子多糖能明显抑制HGC27细胞的增殖,诱导其凋亡,其作用可能与抑制DUSP4/ERK信号通路活化有关。

Netrin-4对胶质母细胞瘤细胞ERK/MAPK信号通路的影响

目的:通过免疫印迹方法检测不同浓度的Netrin-4(NTN4)重组蛋白对GBM细胞中磷酸化ERK水平的影响,初步探讨NTN4对GBM细胞ERK/MAPK信号通路的调控作用。方法:体外培养野生型GBM细胞:U251MG细胞及U87MG细胞,加入两种不同浓度的NTN4重组蛋白(5ng/ml,50ng/ml),裂解细胞提取目的蛋白,在不同时间点(0,10min/20min,30min,1h,2h,3h)通过免疫印迹方法检测磷酸化ERK水平变化情况。结果:加入NTN4后,U251MG细胞和U87MG细胞中的磷酸化ERK水平都有所增加;在U251MG细胞中,5ng/ml的NTN4作用后1h,磷酸化ERK水平最高,50ng/ml的NTN4作用后10分钟,磷酸化ERK水平最高;在U87MG细胞中,不同浓度的NTN4都在作用10分钟时,磷酸化ERK水平最高。结论:Netrin-4激活胶质母细胞瘤细胞内ERK/MAPK信号通路,是其抑制GBM细胞衰老的可能机制。

ERK信号通路通过CXCR-4作用于乳腺癌细胞的侵袭转移研究

目的:ERK信号通路与肿瘤的侵袭转移密切相关,本研究拟阻断ERK通路,检测乳腺癌细胞CXCR-4表达变化,分析ERK信号通路对乳腺癌细胞CXCR-4表达的影响,探讨乳腺癌转移的分子机制。方法:以培养的人乳腺癌MDA-MB-435细胞为研究对象,加入ERK特异性阻断剂PD98059为实验组,加入等量生理盐水为对照组,作用于人乳腺癌MDA-MB-435细胞24 h后,采用Western blotting法检测ERK通路重要因子ERK1/2及磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)表达;采用流式细胞术检测细胞表面CXCR-4表达;采用Transwell侵袭实验观察空白对照组、CXCR-4配体SDF-1α组、ERK通路阻断组和SDF-1α+ERK阻断组细胞的侵袭转移情况。结果 :ERK通路被有效阻断后,CXCR-4表达量明显下调;在趋化因子受体CXCR-4的配体SDF-1α的作用下,细胞侵袭能力提高,而在ERK通路阻断后,细胞侵袭能力明显降低且SDF-1α不能逆转这种降低效应反而具有协同作用。结论:在人乳腺癌MDA-MB-435细胞中,ERK信号通路可能通过上调CXCR-4的表达参与乳腺癌细胞的侵袭和转移。

siP4HA1经Akt/ERK信号通路抑制胃癌细胞增殖

目的探讨P4HA1对胃癌发生发展的影响及分子机制。方法构建P4HA1干扰质粒,稳定转染胃癌MKN-28细胞株;采取Western blot验证P4HA1干扰效率;MTT检测P4HA1干扰前后细胞增殖变化;Western blot检测增殖相关蛋白Akt和ERK表达水平;通过裸鼠移植瘤模型探讨P4HA1对成瘤生长的影响。结果成功构建P4HA1干扰质粒并稳转胃癌MKN-28细胞株,P4HA1表达抑制后MKN-28细胞增殖受到抑制;Akt和ERK蛋白表达降低,移植瘤实验组中P4HA1干扰后裸鼠肿瘤生长受到抑制。结论P4HA1通过调节Akt和ERK途径促进胃癌细胞增殖。

基于IRAK4/ERK/p38信号通路雷公藤红素对多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨雷公藤红素对人多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响,并揭示IRAK4/ERK/p38信号通路与雷公藤红素调控H929、ARP-1细胞增殖和凋亡的关系,探究雷公藤红素联合硼替佐米是否具有协同作用。方法:采用CCK-8法检测多发性骨髓瘤细胞株H929、ARP-1细胞经不同浓度雷公藤红素、硼替佐米以及二者联用后的细胞活力,并利用金氏公式判定协同药效。Annexin V/PI法检测H929细胞凋亡率和ARP-1细胞坏死率。蛋白免疫印迹法检测雷公藤红素对IRAK4/ERK/p38信号通路中关键蛋白和凋亡蛋白表达的影响。结果:雷公藤红素能够呈时间-浓度依赖性地显著抑制H929、ARP-1细胞的增殖(r=0.9018,0.9244),并诱导细胞的凋亡;与对照组比较,雷公藤红素能够明显上调H929、ARP-1细胞内PARP、cleaved caspase-3表达,下调p-IRAK4、p-ERK、p-p38表达。雷公藤红素、硼替佐米单用对H929、ARP-1细胞均有增殖抑制作用,而联合用药与单药相比,前者细胞存活率更低,凋亡率更高(P<0.05)。结论:雷公藤红素能抑制H929和ARP-1细胞增殖、促进其凋亡,其机制可能与抑制IRAK4的磷酸化、阻断IRAK4/ERK/p38信号通路的激活有关;雷公藤红素联合硼替佐米具有协同作用,能更有效地抑制H929、ARP-1细胞增殖并诱导其凋亡。

炎症微环境作用下BMP9通过ERK5/KLF4信号通路促进牙周膜干细胞成骨分化

目的:探讨骨形态蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)在炎症环境中是否通过ERK5/KLF4信号通路促进牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)成骨分化。方法:利用重组腺病毒技术,在TNF-α刺激的PDLSCs中过表达BMP9,通过RT-PCR和Western印迹法检测成骨相关基因及蛋白的表达变化。随后,通过转染技术使KLF4在PDLSCs中过表达,在炎症条件下观察其对成骨分化及相关基因表达的效应。在KLF4敲低的背景下过表达BMP9,观察其对成骨分化的影响。添加ERK5抑制剂BIX02189,揭示ERK5在BMP9诱导的成骨分化中的关键作用。采用SPSS 20.0软件包对数据进行统计学分析。结果:BMP9在炎症环境下显著促进PDLSCs成骨分化,并增强KLF4表达。KLF4过表达进一步加强了PDLSCs成骨分化。然而,当KLF4被敲低时,BMP9对PDLSCs成骨促进效应受到明显抑制。BMP9处理显著增加ERK5磷酸化水平,但在ERK5被抑制后,BMP9对成骨分化的促进效应大幅减弱。结论:BMP9可在炎症环境中通过ERK5/KLF4信号通路显著促进PDLSCs成骨分化。

TRPV4通过调控MAPK/ERK信号通路促进卵巢癌细胞的增殖和迁移

目的:探讨TRPV4通过影响MAPK/ERK信号通路调控卵巢癌细胞的增殖与迁移。方法:RT-qPCR和Western Blot方法检测TRPV4在卵巢癌细胞系和正常卵巢上皮细胞中的表达差异;GEPIA在线数据库分析卵巢癌患者TRPV4表达水平和预后关系;敲低TRPV4,通过RT-qPCR和Western Blot检测转染效率;通过细胞计数试剂盒(CCK8)、克隆形成实验以及Transwell迁移实验检测TRPV4在卵巢癌发生发展过程中增殖及迁移作用;通过GSEA软件富集分析信号通路并用Western Blot验证卵巢癌细胞MAPK/ERK信号通路表达量变化。结果:在卵巢癌细胞及临床组织样本中,TRPV4表达量明显增高,TRPV4表达量较高的患者预后更差。siRNA转染卵巢癌HO8910和Caov3细胞后,与Control组相比,TRPV4 mRNA和蛋白表达显著降低;细胞增殖迁移能力显著减弱;WB实验结果显示ERK总量不变,磷酸化水平降低,进一步实验中证实:敲低TRPV4后,ERK信号通路中的关键蛋白(P90RSK、MEK1/2、MSK1)磷酸化水平降低。结论:TRPV4在卵巢癌细胞及组织中高表达,可能通过正向调控MAPK/ERK信号通路,促进卵巢癌细胞增殖迁移等功能。

基于AQP4、Kir4.1及Ras/Raf-1/ERK信号通路和F-ERG探讨活血通络方对视网膜静脉阻塞大鼠视网膜功能的影响

目的观察视网膜分支静脉阻塞大鼠应用活血通络方后视网膜组织内AQP4、Kir4.1及Ras/Raf-1/ERK1/2的表达及电生理变化。方法将SD大鼠分为正常空白对照组、实验对照组、中药实验组。采用眼底视网膜激光机光凝视网膜分支静脉。实验对照组给予生理盐水2 ml每日灌胃1次,中药实验组给予活血通络方2 ml每日灌胃1次。应用电生理闪光ERG(F-ERG)观察造模前、造模后第3天、第6天的视网膜双极细胞功能变化。应用Westernblot方法,于造模后第6天,观察水通道蛋白4(Aquaporin-4,AQP4)、钾离子通道4.1(Kir4.1)及Ras/p-Raf-1/p-ERK1/2的表达情况。结果视网膜分支静脉阻塞发生后,F-ERG示大鼠视网膜功能下降,但中药实验组功能好于实验对照组;造模后AQP4、Kir4.1及Ras/p-Raf-1/p-ERK1/2表达增高,但中药实验组结果均低于实验对照组。结论活血通络方能够抑制AQP4、Kir4.1;Ras/Raf-1/ERK1/2信号通路的表达,有助于受损的视网膜功能恢复。

吉祥草中甾体皂苷RCE-4对人宫颈癌Caski细胞Ras/Erk和p16/cyclinD1/CDK4通路的影响

目的:研究吉祥草中甾体皂苷RCE-4影响Ras/Erk和p16/cyclin D1/CDK4信号通路促进Caski细胞凋亡的作用机制。方法:体外培养人宫颈癌Caski细胞株,用RCE-4作为处理因素,MTT法检测细胞增殖活力;流式细胞术检测细胞周期分布;Real-time PCR检测p16、cyclin D1和CDK4m RNA表达水平;Western blot检测Ras/Erk信号通路总蛋白和磷酸化蛋白表达水平。结果:RCE-4呈剂量依赖性抑制Caski细胞增殖,其作用24 h的IC50值为12.33μmol/L;升高G0/G1期细胞比例,降低S期细胞比例;抑制Ras、p-Raf、p-Mek1/2和p-Erk1/2蛋白表达,降低p-Raf/Raf、p-Mek1/2/Mek1/2和p-Erk1/2/Erk1/2比值,上调p16的m RNA表达,下调cyclin D1和CDK4的m RNA表达。结论:RCE-4可抑制Caski细胞的增殖,诱导细胞在G0/G1期阻滞,其诱导作用与其抑制Ras/Erk和p16/cyclin D1/CDK4信号通路激活有关。

Nodal信号靶基因dusp4抑制斑马鱼中内胚层形成

丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-2(MKP-2/DUSP4)具有酪氨酸磷酸酶和丝氨酸/苏氨酸磷酸酶活性,可以作用于MAPKs(Mitogen-activated protein kinases)底物,使其去磷酸化。但dusp4在脊椎动物胚胎发育中的功能还所知甚少。为深入了解dusp4在发育中的作用,文章首先检测了其在斑马鱼胚胎的表达。通过整胚原位杂交实验,发现dusp4是斑马鱼母源表达的基因,并且随着发育的进行,在原肠早期特异表达在中内胚层区域。进一步的实验表明,Nodal信号对dusp4的表达至关重要。过表达Nodal信号的配体sqt、dusp4的表达水平明显升高,而在缺失Nodal信号的突变体MZoep中,几乎检测不到dusp4的表达。此外,文章利用反义核苷酸Morpholino(MO)敲降dusp4的表达,中内胚层标识基因gsc、sox17和sox32的表达水平显著升高,而过表达dusp4对中内胚层的形成没有明显的影响,表明dusp4对中内胚层形成的抑制作用是必需的,但不是充分的,可能还有其他未被鉴定的协同作用因子。以上研究结果表明,dusp4基因的表达受到Nodal信号调控,在原肠期具有抑制中内胚层形成的作用。

RSK4与TRAF4在不同乳腺细胞中的表达及分子作用通路研究

目的研究抑癌基因p90核糖体S6蛋白激酶4(p90 ribosomal protein S6 kinase 4,RSK4)相互作用蛋白与肿瘤坏死因子受体相关因子4(tumor necrosis factor receptor associated factor 4,TRAF4)在不同乳腺细胞株中的表达,探讨RSK4-TRAF4相互作用蛋白所在分子作用通路对乳腺癌侵袭转移的影响。方法采用实时荧光定量PCR法检测RSK4和TRAF4在HBL-100正常乳腺细胞株和MCF-7、Her-2阳性型、MDA-MB-231人乳腺癌细胞株中的表达情况。用蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测RSK4和TRAF4以及MAPK通路下游蛋白ERK1/2在HBL-100、MCF-7、Her-2阳性型、MDA-MB-231 4种乳腺细胞株中的表达。结果 RSK4 mRNA、TRAF4 mRNA在4种细胞中均表达,RSK4 mRNA在HBL-100表达量最高,在MCF-7、Her-2阳性型、MDA-MB-231细胞中含量依次降低;TRAF4 mRNA在4种细胞中的表达量由低到高依次为HBL-100、MCF-7、Her-2阳性型、MDA-MB-231细胞,RSK4 mRNA、TRAF4 mRNA在4种细胞中两两比较,差异有统计学意义(P<0.05)。RSK4与TRAF4在4种细胞中蛋白表达水平与mRNA表达水平相一致,具有高度相关性(rRSK4=0.92,P<0.01;rTRAF4=0.82,P<0.01);ERK1/2蛋白表达量由高到低依次为MDA-MB-231、Her-2阳性型、MCF-7、HBL-100。在mRNA转录水平,RSK4和TRAF4表现出负相关(r1=-0.81,P<0.01);在蛋白翻译水平,RSK4和TRAF4同样呈现出高度负相关(r2=-0.84,P<0.01)。结论 RSK4和TRAF4具有较高的负相关性,RSK4与TRAF4相互作用后可能通过MAPKs下游信号通路ERK起分子调控作用。

CART肽通过激活ERK抑制氧糖剥夺诱导的星形胶质细胞AQP-4上调

目的:探讨可卡因-苯丙胺调节转录(CART)肽抑制星形胶质细胞氧糖剥夺(OGD)性损伤及调节水通道蛋白4(AQP-4)表达的分子机制。方法:体外培养新生ICR小鼠大脑皮层星形胶质细胞,通过胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光染色鉴定细胞。所得细胞随机分为4组:对照组、模型组、CART组和CART+PD98059(ERK信号通路特异性阻断剂)组,MTT法检测星形胶质细胞活力,Western blot检测ERK及AQP-4的表达。结果:OGD处理后,CART肽能显著提高OGD后星形胶质细胞的活力(P<0.01);CART肽能够提升星形胶质细胞内ERK的磷酸化水平(P<0.05);PD98059能够阻断CART肽诱导的ERK磷酸化(P<0.01),并减弱CART肽抑制AQP-4表达的作用(P<0.05)。结论:CART肽提高OGD处理后星形胶质细胞的活力,并通过激活ERK通路抑制OGD处理后细胞AQP-4的表达。

Exendin-4通过JNK和ERK信号通路增强大鼠脂肪来源干细胞的增殖

目的:探讨Exendin-4对大鼠脂肪来源干细胞的(Adipose-derived stem cells,ADSCs)增殖作用及其机制。方法:体外分离培养SD大鼠腹股沟处脂肪组织,流式细胞学方法鉴定分离的ADSCs,使用Exendin-4(Ex-4,0-50 nm/L)对P4代(第四代)ADSCs进行干预,采用MTT检测ADSCs的增殖情况,Western blot检测MAPK通路中JNK和ERK的磷酸化水平,使用相应的阻断剂来观测JNK和ERK通路对ADSCs增殖作用的影响。结果:分离培养的ADSCs高表达CD29、CD90和CD105,低表达CD31、CD34和CD45,符合间充质干细胞的表型。Ex-4以浓度依赖方式促进ADSCs体外增殖,10 nm/L为最适促增殖处理浓度。同时,Ex-4可以提高细胞中c-Jun和ERK的磷酸化水平,而给予相应阻断剂后,磷酸化蛋白表达减弱,细胞增殖能力也明显减弱。结论:Ex-4可以通过JNK和ERK通路增强大鼠脂肪来源干细胞的增殖。

骨形成蛋白4通过激活p38MAPK和ERK1／2信号通路增加肺动脉平滑肌细胞经典瞬时受体电位蛋白的表达

骨形成蛋白（BMP）信号通路在肺动脉高压的发病机制中起着十分重要的作用，我们前期研究发现BMP4可以增加肺动脉平滑肌细胞内钙离子通道蛋白经典瞬时受体电位蛋白（TRPC）1，4，6的表达，进而增加细胞基础钙浓度及钙池操纵性钙内流（SOCE），促进细胞增殖和迁移。但是BMP4如何影响TRPC的表达，仍不清楚。有研究显示p38MAPK和ERK1／2在是BMP4的下游通路与血管重塑有关，在本研究中我们深入探讨了BMP4是否通过该通路影响TRPC的表达。

长链非编码RNA DMTF1v4在结肠癌发生中的分子机制

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)DMTF1v4在结肠癌中的表达情况,并研究其表达量与结肠癌发生的关系。方法:分别取2016年7月至2016年12月深圳市第二人民医院胃肠外科收治的结肠癌患者的结肠癌和癌旁组织,用半定量聚合酶链反应(PCR)检测lncRNA DMTF1v4表达;采用siRNA下调DMTF1v4在结肠癌细胞株HT–29中的表达,通过噻唑兰(MTT)检测和平板克隆实验研究沉默DMTF1v4对结肠癌细胞生长的影响;通过AnnexinV/PI双染法检测DMTF1v4对结肠癌细胞凋亡的影响;应用免疫印迹检测蛋白p–ERK、p–JNK和p–p38的变化;采用沉默DMTF1v4的HT–29构建裸鼠皮下异位移植瘤模型,研究其在动物体内对肿瘤生长的影响。结果:lncRNA DMTF1v4在结肠癌组织中的表达明显高于癌旁组织,差异具有统计学意义(P <0.01);采用lncRNA DMTF1v4低表达的细胞系研究,结果表明lncRNA DMTF1v4有促进细胞增殖和迁移并抑制细胞凋亡的作用,差异具有统计学意义(P <0.05);研究lncRNA DMTF1v4对ERK/MAPK信号通路的影响,通过沉默DMTF1v4发现其p–ERK、p–JNK和p–p38的表达明显增加,差异具有统计学意义(P <0.01);研究沉默基因DMTF1v4在动物体内对肿瘤生长的影响,发现裸鼠肿瘤的增长受到抑制,凋亡相关蛋白的表达增加,差异具有统计学意义(P <0.01)。结论:lncRNA DMTF1v4在结肠癌组织中的表达明显高于癌旁组织;lncRNA DMTF1v4通过下调蛋白p–ERK、p–JNK和p–p38的表达进而促进结肠癌细胞增殖和迁移,抑制凋亡,从而影响结肠癌的发展。这将为临床治疗结肠癌提供新思路。

二甲双胍对急性早幼粒细胞白血病细胞系NB4的作用及机制探讨

本研究旨在探讨二甲双胍对急性早幼粒细胞白血病细胞系NB4细胞生物学特性的影响及可能的作用机制。采用不同浓度的二甲双胍处理NB4细胞,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,通过细胞黏附实验分析药物对细胞黏附能力的影响。采用细胞外信号调节激酶(ERK)磷酸化抑制剂U0126预处理NB4细胞,Western blot观察ERK磷酸化水平的变化,同时检测细胞凋亡和黏附能力的改变。结果表明,二甲双胍能抑制NB4细胞增殖,诱导细胞凋亡,增强细胞的黏附能力。5μmol/L U0126预处理有效抑制NB4细胞中ERK的磷酸化,降低5 mmol/L二甲双胍诱导的细胞凋亡并减弱细胞的黏附能力。结论:二甲双胍对NB4细胞有抑制增殖、促进凋亡和黏附的作用,MEK/ERK信号通路可能是二甲双胍在NB4细胞中的分子作用机制之一。

苏黄止咳胶囊中五味子醇甲对感冒后咳嗽的改善作用

目的探讨苏黄止咳胶囊中五味子醇甲对感冒后咳嗽(PIC)的改善作用。方法气管滴注脂多糖(LPS)并联合香烟烟雾刺激建立体内PIC小鼠模型,小鼠随机分为对照组、模型组、苏黄止咳胶囊组(14 g/kg)、孟鲁司特钠组(阳性对照,3 mg/kg)和五味子醇甲低、高剂量组(10、30 mg/kg);LPS刺激人支气管上皮细胞(BEAS-2B)建立体外PIC模型,细胞分为对照组、模型组、苏黄止咳胶囊组(10μg/mL)和五味子醇甲低、高浓度组(3、10μmol/L)。HE和Masson染色检测肺及支气管组织病理变化,ELISA法检测肺组织IL-1β、IL-6、TNF-α、ROS、MDA、SOD、GSH水平,RT-qPCR法检测BEAS-2B细胞IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表达,Western blot法检测小鼠肺组织和BEAS-2B细胞中p-PI3K、p-Akt、NOX4、SIRT1、p-ERK、Fibronectin、E-cadherin、Vimentin、α-SMA蛋白表达。结果与模型组比较,五味子醇甲和苏黄止咳胶囊均可延长PIC小鼠咳嗽潜伏期(P<0.01),减少咳嗽次数(P<0.01),减轻肺组织炎性细胞浸润和胶原沉积,降低肺组织IL-1β、IL-6、TNF-α、ROS、MDA水平和Fibronectin、Vimentin、α-SMA、p-ERK、p-PI3K、p-Akt、NOX4蛋白表达(P<0.05,P<0.01),升高肺组织SOD、GSH水平和E-cadherin、SIRT1蛋白表达(P<0.05,P<0.01);降低BEAS-2B细胞ROS水平、IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表达和p-ERK、p-PI3K、p-Akt、NOX4蛋白表达(P<0.05,P<0.01),升高BEAS-2B细胞SIRT1蛋白表达(P<0.01)。结论五味子醇甲可通过调节SIRT1/ERK信号通路抑制炎症,通过调节PI3K/Akt/NOX4信号通路抑制氧化应激,发挥对PIC的止咳作用,是苏黄止咳胶囊的主要止咳功效成分之一。

胆汁淤积下FGF19-ERK通路可上调MRP3/4表达减轻肝细胞损伤

该文采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)、蛋白印迹实验(Western blot)检测成纤维细胞因子19(fibroblast growth factor 19, FGF19)处理肝细胞癌细胞系HepG2后细胞自分泌的FGF19;具有胆汁酸排泌作用的多药耐药性蛋白3(multidrug resistance-associated protein 3, MRP3)和多药耐药性蛋白4(multidrug resistance-associated protein 4, MRP4)表达量的改变对胆汁淤积条件下肝细胞的保护作用。结果表明,使用FGF19处理HepG2细胞, MRP3、MRP4的mRNA和蛋白表达水平均显著上调并呈浓度和时间依赖性。Western blot进一步证实FGF19处理细胞可激活磷酸化细胞外信号调节激酶(extracellular signal related kinase, ERK)信号通路;使用ERK信号通路的特异性小分子抑制剂(PD98059)预处理HepG2再加入100 ng/mL的FGF19刺激细胞,与未加入PD98059的对照组相比, MRP3、MRP4的mRNA水平和蛋白水平均被抑制。综上所述, FGF19通过调控ERK信号通路特异性地上调MRP3和MRP4表达水平,在胆汁淤积条件下可增加胆汁酸排泌以保护肝细胞。

抑制AQP4降低大鼠脊神经节ERK表达,减轻坐骨神经结扎导致神经病理性疼痛

目的探讨AQP4抑制剂对坐骨神经结扎导致的神经病理性疼痛的作用及其可能机制。方法制作大鼠坐骨神经慢性压迫性损伤(CCI)模型,采用热痛刺激仪测量热痛感受性潜伏期,Western blot和免疫荧光(双重染色)方法检测ERK, JNK, p38表达。结果神经损伤可诱导ERK, JNK, p38信号分子表达及卫星胶质细胞活化,AQP4抑制剂TGN-020则削弱ERK,JNK和p38信号分子及卫星胶质细胞的活化;p-ERK和GFAP共表达的细胞在损伤后明显增多,TGN-020则显著降低这一表达。结论抑制AQP4减轻坐骨神经结扎导致的神经病理性疼痛与抑制神经节卫星胶质细胞活化和MAPK信号通路活化相关。

基于MEKK1/SEK1/JNK1/AP-1通路探讨三七总皂苷对4T1乳腺癌荷瘤小鼠肿瘤模型的影响

目的:通过研究三七总皂苷对4T1乳腺癌荷瘤小鼠促分裂原激活的蛋白激酶的激酶1(MEKK1)/应激激活的蛋白激酶/细胞外信号调节的蛋白激酶(SAPK/Erk激酶,SEK1)/c-Jun氨基末端激酶1(JNK1)/激活蛋白-1(AP-1)通路的影响,探讨三七总皂苷抑制肿瘤的可能机制。方法:建立4T1乳腺癌荷瘤小鼠肿瘤模型,将48只造模成功的小鼠随机分为三七总皂苷低、中、高剂量组(10,20,40 mg·kg^-1)和模型组,每组12只,三七总皂苷各剂量组腹腔注射剂量为10 mL·kg^-1,模型组给予相同剂量的生理盐水,连续给药28 d。给药结束后分离肿瘤组织、称质量、切片、匀浆等,采用脱氧核苷酸末端转移酶(TdT)介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)染色检测肿瘤细胞凋亡;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肿瘤组织MEKK1,SEK1,JNK1,AP-1 mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测4T1乳腺癌荷瘤小鼠肿瘤组织MEKK1,SEK1,JNK1,AP-1蛋白表达。结果:与模型组比较,三七总皂苷中、高剂量组的肿瘤质量明显下降(P<0.05);肿瘤细胞凋亡数量随三七总皂苷剂量的升高明显升高(P<0.05);三七总皂苷中、高剂量组肿瘤组织中MEKK1,SEK1,JNK1,AP-1 mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论:三七总皂苷对4T1乳腺癌荷瘤小鼠肿瘤模型具有抑制作用,其作用机制可能与激活MEKK1/SEK1/JNK1/AP-1信号通路有关。