大承气汤通过内源性抗菌肽mCRAMP对脓毒症小鼠肠屏障的保护作用及机制

目的:采用分子对接和体内动物实验探讨大承气汤对脓毒症小鼠肠屏障的保护作用及分子机制。方法:采用文本挖掘方法筛选大承气汤的活性成分,利用AutoDock Tools和Discovery Studio分子对接软件研究其关键活性成分与脓毒症主要作用靶点紧密连接蛋白-1(Claudin-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、抗菌肽(mCRAMP)、Toll样受体4(TLR4)和髓样分化因子88(MyD88)的相互作用。动物实验采用C57BL/6小鼠50只,每组10只,随机分成5组,分别为假手术组、模型组、大承气汤低、高剂量(4、8 g·kg^(-1))组和乌司他丁(50000 U·kg^(-1))组。造模前、手术当天和术后,各组给予相应的药物进行干预。除假手术组外,其余各组小鼠均采用盲肠结扎穿刺法(CLP)制备脓毒症模型。采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测小鼠血清D-乳酸水平,评估肠黏膜通透性;采用苏木素-伊红(HE)染色法观察回肠组织病理变化,评估肠黏膜损伤程度及炎症浸润;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠回肠组织Claudin-1和Occludin蛋白表达水平,评估肠机械屏障功能;采用ELISA检测小鼠回肠组织TNF-α和IL-6水平,评估肠道炎症水平;采用免疫组化法(IHC)观察回肠组织mCRAMP蛋白表达;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测小鼠回肠组织内mCRAMP、TLR4和MyD88的基因表达水平,探讨大承气汤对脓毒症小鼠肠屏障的保护机制。结果:分子对接结果表明,采用文本挖掘方法所筛选出的10个大承气汤活性成分中多数与脓毒症靶点具有结合活性,主要通过范德华力、氢键和其他共轭体系相连。动物实验结果表明,与模型组比较,大承气汤低、高剂量组小鼠血清D-乳酸水平显著降低(P<0.01);回肠组织损伤、黏膜水肿减少,小肠绒毛完整性较好,炎症细胞浸润减少;回肠组织Claudin-1蛋白表达水平显著升高(P<0.01);回肠组织IL-6水平显著降低(P<0.01);回肠组织mCRAMP蛋白和mRNA表达水平显著升高(P<0.01);回肠组织TLR4和MyD88 mRNA表达水平显著降低(P<0.01);大承气汤高剂量组小鼠回肠组织TNF-α水平显著降低(P<0.01)和Occludin蛋白表达水平显著升高(P<0.01),大承气汤低剂量组小鼠回肠组织Occludin蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论:大承气汤对脓毒症小鼠肠屏障具有保护作用,其可减轻肠组织炎症水平,修复肠黏膜损伤,提高肠紧密连接蛋白水平,降低肠黏膜通透性,作用机制可能与内源性抗菌肽mCRAMP蛋白和基因表达的增加及其下游TLR4/MyD88炎症通路基因的下调有关。

大承气汤在脓毒症治疗中的相关研究进展

脓毒症是由感染等诱因发展而来的系统性炎症反应综合征,全球每年罹患人数冲破千万;其病理生理机制繁杂,常伴内毒素移位与胃肠道功能紊乱、炎性因子激活与免疫失调、凝血紊乱、多脏器功能受损等诸多机体失衡,且包含全身炎症反应、细胞凋亡、细胞氧化应激损伤等细胞受损机制;其诊治难度大、预后差,是沉重的医疗负担。中医与西医对脓毒症的诊治都进行了长足的探索。由于抗生素耐药与激素滥用问题凸显及高昂的医疗费用传递给医患双方的压力,使得西医在脓毒症诊治方面价值有限。祖国医学将脓毒症这一病证归于“温病”“伤寒”范畴。大承气汤为《伤寒论》中应对阳明腑实证的经典方剂,现代医学证实其具有在增进胃肠动力、调节肠道微生态基础上进一步发挥抗氧化应激、降低炎症水平、延缓细胞凋亡等功效。鉴于以往理论基础及大量用药经验,医家提出用大承气汤复方联合西药在注重“整体观”的基础上对脓毒症开展“菌毒并举,标本兼治”等新的治疗理念,现已将该组方广泛应用于临床。该文就与大承气汤相关经典研究、最新发现及其在脓毒症治疗中的确切表现为着手点进行综述,以期进一步明确该组方辅助治疗脓毒症的机制、优势,并发掘其潜在功效,为今后其在临床上的推广提供更及时、更充分、更科学的理论支撑。

大承气汤类方治疗急性胰腺炎临床研究进展

急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)是临床中一种常见的急腹症,分为轻、中重和重3种类型,重症者仍有较高的病死率,但目前尚没有针对该病发病机制的特效药物,早期以非手术的对症支持治疗为主。近年来大量临床研究表明,中医药在防治AP的实践中有着独特优势,根据该病发病特点:腹满痛、大便不通等,经辨证论治用药后可以缓解其一系列症状,尤其是以大承气汤为代表的通里攻下方剂,包括根据大承气汤发展而来的类方:柴芍承气汤和柴芩承气汤,可以改善肠道功能,不同程度地改善AP患者合并的肠麻痹等胃肠道症状,防止肠道菌群异位,保护肠黏膜屏障功能,并且有助于早期启动肠内营养,调节免疫炎症反应,进而避免全身炎症反应综合征的出现。除此之外,大承气汤类方还可以促进胰腺微循环,促进AP发病过程中胰腺受损部位的恢复,降低血淀粉酶,同时改善全身凝血功能,提高治疗效果。目前,在我国中西医结合治疗已成为治疗AP的重要组成部分,可以防止AP由轻转重,减少并发症,缩短住院时间。为了总结大承气汤及其类方在临床对AP的治疗效果,笔者现将近5年来大承气汤类方治疗AP的临床研究,根据临床研究比较多的"肠道功能、肠道营养、炎症介质、胰腺微循环"作一综述。

差异蛋白质组学法探索大承气汤优化方治疗便秘小鼠的生物学基础

目的:应用差异蛋白质组学方法探索大承气汤优化方治疗便秘小鼠的生物学基础。方法:实验动物分为正常组、模型组及大承气汤优化方组。模型组、大承气汤优化方组小鼠按50 mg·kg^(-1)灌胃给予复方地芬诺酯混悬液以制备便秘模型,正常组小鼠则给予等量生理盐水。大承气汤优化方组按31 g·kg^(-1)灌胃给予大承气汤优化方药液,正常组及模型组小鼠则给予等量生理盐水。完成药效指标检测后,处死动物,称取小鼠大肠组织,提取蛋白样品,经纳升级高效液相色谱联用线性离子阱/静电场轨道阱高分辨组合式质谱(Nano LC-LTQ Orbitrap Elite)系统分析检测,Protein Discovery软件进行蛋白质搜库,Sieve v2.1软件对所有样本蛋白进行相对定量分析。结果:与模型组相比,大承气汤优化方组小鼠的肠组织蛋白表达上调或下调且与正常组变化方向一致的有77个。经文献检索分析表明,以上蛋白生物学功能一方面集中于促进糖脂代谢、三羧酸循环、生物氧化及能量代谢等,由此增加机体对大肠蠕动的供能,另一方面表现为增强肠道平滑肌的收缩功能,以促进肠道蠕动,缓解便秘。结论:差异蛋白质组学法找出的相关蛋白靶点及其涉及的生物体调控通路极可能是大承气汤优化方治疗便秘小鼠的生物学基础。

大承气汤加味灌肠治疗小儿术后炎性肠梗阻的临床观察

目的:探讨大承气汤加味灌肠治疗小儿术后炎性肠梗阻(EPISBO)的疗效,及对炎症因子、胃肠动力和肠屏障功能的影响。方法:将106例患儿采用随机按数字表法分为对照组52和观察组54例。两组患儿均给予禁食水、胃肠减压、维持水电解质平衡、营养支持等基础治疗。对照组采用注射用生长抑素,0.003 5 mg·h-1·kg-1,持续微泵泵入,连续3 d;口服醋酸地塞米松片,2.5~5 mg/次,2次/d;合并感染采用注射用头孢他啶,30~100 mg·kg-1,分2~3次静脉滴注。观察组基础治疗同对照组,并给予大承气汤加味灌肠,125 mL/次,2次/d。两组疗程均为连续治疗5 d。记录腹胀缓解时间、肠鸣音恢复时间、恢复排气、恢复排便时间和饮食恢复时间;记录住院时间和中转手术情况;进行治疗前后主要胃肠道症状、体征评分;检测治疗前后血清白细胞介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),超敏C-反应蛋白(hs-CRP),血管活性肠肽(VIP),胃泌素,胃动素,二胺氧化酶(DAO)和D-乳酸水平。结果:经秩和检验分析,观察组临床疗效优于对照组(P<0.05);观察组胃肠道功能指标(腹胀缓解时间、肠鸣音恢复时间、恢复排气、恢复排便时间、饮食恢复时间)恢复时间均短于对照组(P<0.05,P<0.01);观察组平均住院时间短于对照组(P<0.01),两组患儿中转手术率,经确切概率法分析,无统计学差异;观察组血清IL-6,TNF-α和hs-CRP水平均低于对照组(P<0.01);观察组VIP水平低于对照组,胃动素和胃泌素水平均高于对照组(P<0.05);观察组DAO,D-乳酸水平均低于对照组(P<0.01);观察组主要胃肠道症状、体征评分均低于对照组(P<0.01)。结论:在西医常规治疗的基础上,给予大承气汤加味灌肠治疗小儿EPISBO,能起到抗炎、调节胃肠激素和保护肠屏障功能作用,从而起到改善胃肠动力、减轻症状、缩短病程及提高临床疗效。

星蒌承气汤治疗中风痰热腑实证的研究进展

中风是由于脑血管的阻塞或爆裂造成脑血流中断的一类破坏性脑血管事件,容易造成患者身体残疾和多重功能损伤。我国中风患者的死亡率占世界首位,如何有效地治疗中风是目前亟待解决的卫生健康问题之一。王永炎院士在临床中观察到60%中风患者兼有痰热腑实证,表现为大便郁结、口臭咽干等,经临床实践后创立星蒌承气汤,对证治疗具有痰热腑实证的中风患者。星蒌承气汤为化痰通腑类方药的代表方剂之一,由大黄、芒硝、瓜蒌、胆南星按5∶5∶15∶3比例组成。目前星蒌承气汤的研究多集中在临床观察及药理作用机制的初步探索,其药效物质基础研究相对薄弱。笔者拟对星蒌承气汤的组方药味化学成分、药理作用及其作用机制进行梳理,以期为后期该复方的化学成分鉴定、药物靶标预测、药效物质基础筛选等提供依据;此外,拟通过对星蒌承气汤及其加减方治疗脑中风的案例分析,总结其临床应用规律,旨在为该复方的临床应用提供参考。

大承气汤对过敏性哮喘小鼠肺部炎症及MAPK信号通路的影响

目的:观察大承气汤对过敏性哮喘小鼠的肺指数及肺指数抑制率、肺组织形态学,支气管肺泡灌洗液(BALF)炎细胞分类变化以及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的影响。方法:40只雌性C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、地塞米松组(0.005 g·kg^(-1))和大承气汤组(19 g·kg^(-1))。采用卵白蛋白(OVA)致敏加激发的方式建立小鼠过敏性哮喘模型,分别于第0,14天致敏,第21天开始OVA雾化激发,连续7 d,地塞米松组和大承气汤组在雾化激发前1 h进行药物灌胃干预,每只0.2 m L,正常组给予等量生理盐水处理。第28天造模结束后取肺组织,苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织形态学,迪夫染色检测肺泡灌洗液炎细胞分类计数,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肺组织MAPK信号通路关键蛋白表达情况。结果:与正常组比较,模型组小鼠肺指数明显升高(P<0.01),肺组织出现炎性病理变化,气道炎细胞渗出严重,以嗜酸性粒细胞为主(P<0.01),且肺组织磷酸化p38 MAPK和细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)的表达上升;而经过大承气汤治疗后,模型小鼠肺指数升高受到抑制,肺指数抑制率达68.4%,肺组织炎性病理改善明显,炎细胞渗出减轻,且MAPK蛋白磷酸化水平明显降低。结论:基于"肺肠同治"的大承气汤能有效改善过敏性哮喘小鼠的肺部炎症,其机制可能与磷酸化的p38 MAPK和ERK1/2的表达量有关。

肺肠合治法对LPS诱导急性肺损伤大鼠NF-κB炎症通路和巨噬细胞极化的影响

目的:探究肺肠合治法(麻黄汤+大承气汤)对脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)大鼠的作用与保护机制。方法:将Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、肺肠合治低、中、高剂量组、地塞米松组。通过LPS(10 mg·kg^(-1))腹腔注射成功复制ALI大鼠模型。观察与记录各组大鼠一般状态;采用肛温测量法记录各组大鼠造模后0~8 h体温数值;造模后24 h取材,收集血清与肺组织。酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)、精氨酸酶-1(Arg-1)含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠肺组织中核转录因子-κB p65(NF-κB p65)、磷酸化核转录因子-κB p65(p-NF-κB p65)、核转录因子抑制蛋白α(IκBα)、磷酸化核转录因子抑制蛋白α(p-IκBα)蛋白的表达量;免疫荧光双标检测大鼠肺组织经典激活型(M1)巨噬细胞标记物CD80、IL-1β、巨噬细胞标记物F4/80、IL-10表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠体温和热效应指数(TRI)显著升高,血清促炎因子TNF-α、IL-1β和抗炎因子IL-10水平显著升高(P<0.01),肺组织p-NF-κB p65、p-IκBα蛋白表达显著升高(P<0.01),肺组织巨噬细胞标志物F4/80、M1巨噬细胞标志物CD80和IL-1β的表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,肺肠合治各组和地塞米松组大鼠体温与TRI指数降低(P<0.01),血清炎症因子TNF-α、IL-1β水平降低(P<0.05,P<0.01),血清抗炎因子IL-10、Arg-1水平升高(P<0.05,P<0.01),肺组织p-NF-κB p65、p-IκBα蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),肺组织M1巨噬细胞标志物CD80、IL-1β表达显著降低和IL-10表达显著升高(P<0.01),巨噬细胞标志物F4/80表达无明显变化。结论:肺肠合治方剂对ALI大鼠的发热与炎症状态有明显的改善,其机制可能与NF-κB炎症通路被抑制,肺组织巨噬细胞向抗炎表型极化有关。

基于VIP/cAMP/PKA/AQPs信号通路研究肺肠合治法减轻肺水肿治疗急性肺损伤的作用机制

目的:探究肺肠合治法(麻黄汤+大承气汤)减轻脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)大鼠肺水肿的作用和机制。方法:Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、肺肠合治低、中、高剂量组、地塞米松组。采用LPS(10 mg·kg^(-1))腹腔注射复制ALI大鼠模型,造模后开始灌胃给药,正常组给予生理盐水(25 m L·kg;),肺肠合治低(5 g·kg^(-1))、中(7.5 g·kg^(-1))、高(10 g·kg^(-1))剂量组分别给予(麻黄汤+大承气汤)灌胃,阳性药组给予地塞米松(5 mg·kg^(-1)),分别于LPS注射后0、8、16 h给药,共3次。给药结束后取肺组织及血清,肺组织苏木素-伊红(HE)染色,进行肺水肿评分;计算各组大鼠肺组织干/湿(D/W)质量比;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清血管活性肠肽(VIP)含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠肺组织水通道蛋白1(AQP1)、水通道蛋白5(AQP5)、VIP、环磷酸腺苷(c AMP)、磷酸化蛋白激酶A(p-PKA)、蛋白激酶A(PKA)蛋白的表达量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组大鼠肺组织中VIP m RNA表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠肺损伤明显,水肿评分升高,肺组织D/W降低(P<0.01),肺组织AQP1、AQP5、c AMP、p-PKA/PKA明显降低(P<0.05,P<0.01),VIP含量显著升高(P<0.01),肺组织VIP蛋白和m RNA表达明显升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,肺肠合治组大鼠肺损伤减轻,肺组织D/W显著升高(P<0.01),肺组织AQP1、AQP5、VIP、c AMP、p-PKA/PKA升高(P<0.05,P<0.01),肺组织VIP表达升高(P<0.05,P<0.01)。结论:肺肠合治法能减轻急性肺损伤造成的肺组织水肿,其机制可能通过激活VIP/c AMP/PKA信号通路,进而促进水通道蛋白AQP1、AQP5的表达,增强肺组织的水液代谢有关。

大承气汤脐部湿热敷治疗AECOPD合并Ⅱ型呼吸衰竭NIV并发腹胀患者胃肠动力的影响

目的:观察大承气汤加味脐部湿热敷治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)合并Ⅱ型呼吸衰竭,采用无创通气(NIV)并发腹胀的疗效及对胃肠动力激素水平的调节作用。方法:将160例符合要求的患者随机按数字表法分为对照组和观察组各80例。对照组口服枸橼酸莫沙必利片,5 mg/次,3次/d;观察组在对照组治疗的基础上给予大承气汤加味脐部湿热敷,30 min/次,2次/d。两组疗程均为连续治疗7 d。腹胀程度分别采用卷尺测量和患者主观评价,治疗前后各评价1次;记录肠鸣音恢复、腹胀缓解、排气、排便时间;记录每日呼吸机使用总时间、每日记录呼吸机使用压力,呼吸机使用总天数;记录治疗前后动脉血氧饱和度(Sa O2),动脉血氧分压(Pa O2)和二氧化碳分压(Pa CO2)变化情况;检测治疗前后胃泌素(GAS),胃动素(MTL),血管活性肠肽(VIP)和生长抑素(SS)水平。结果:经秩和检验,观察组临床疗效优于对照组(Z=2. 484,P <0. 05);治疗后观察组患者腹胀程度轻于对照组(Z=2. 456,P <0. 05);对照组治疗前后腹围差值(14. 63±3. 76) cm,观察组为(16. 33±4. 11) cm,观察组治疗前后腹围差值多于对照组(P <0. 05);观察组平均呼吸机使用时间短于对照组(P <0. 05),呼吸机使用压力低于对照组(P <0. 05),呼吸机使用总天数少于对照组(P <0. 05);治疗后,观察组患者Sa O2和Pa O2水平均高于对照组,Pa CO2低于对照组(P <0. 05);治疗后观察组患者GAS和MTL水平均高于对照组,VIP和SS水平均低于对照组(P <0. 01)。结论:大承气汤加味脐部湿热敷用于AECOPD合并Ⅱ型呼吸衰竭NIV并发腹胀患者的治疗,可明显减轻腹胀,降低腹内压,减轻呼吸困难,促进胃肠功能恢复,并具有调节胃肠激素水平的作用。

加味大承气汤治疗湿热蕴结型高脂血症性急性胰腺炎的疗效及作用机制

目的:观察加味大承气汤治疗湿热蕴结型高脂血症性急性胰腺炎的疗效,探讨作用机制。方法:将贵州中医药大学第一附属医院收治的110例湿热蕴结型高脂血症性急性胰腺炎患者随机分为对照组和观察组,各55例,两组患者均给予低分子肝素钙、胰岛素及前列地尔注射液等常规治疗。对照组在常规治疗基础上给予化滞柔肝颗粒;观察组在常规治疗基础上给予加味大承气汤治疗。治疗7 d,比较两组患者的临床疗效、中医证候评分、胃肠功能恢复情况、急性胰腺炎床旁指数(BISAP)评分、急性生理与慢性健康状况Ⅱ(APACHEⅡ)评分、炎性因子[肿瘤坏死因子(TNF)-α,白细胞介素-6(IL-6),C反应蛋白(CRP)]水平,氧化应激[丙二醛(MDA),氧化型谷胱甘肽(GSSG),总抗氧化能力(T-AOC)]指标水平,总胆固醇(TC),甘油三酯(TG),高、低密度脂蛋白胆固醇(HDL-C,LDL-C)血脂指标,安全性评价。结果:观察组临床疗效明显优于对照组(Z=3.353,P<0.05),且总有效率52/55(94.55%)高于对照组的41/55(74.55%)(χ^(2)=8.419,P<0.01);与本组治疗前比较,治疗后两组患者腹痛、大便不通、胸闷、发热评分均明显降低,且观察组腹痛、大便不通、胸闷、发热评分低于对照组(P<0.05);观察组的胃管留置时间、排气时间、排便时间和肠鸣音恢复时间低于对照组(P<0.05)。与本组治疗前比较,治疗后两组患者BISAP,APACHEⅡ评分均明显降低,且观察组BISAP,APACHEⅡ评分低于对照组(P<0.05)。与本组治疗前比较,治疗后两组患者血清TNF-α,IL-6和CRP水平均明显降低,且观察组血清TNF-α,IL-6和CRP水平低于对照组(P<0.05)。与本组治疗前比较,治疗后两组患者血清MDA,GSSG水平均明显降低,T-AOC明显升高,且观察组血清MDA,GSSG水平低于对照组,T-AOC水平高于对照组(P<0.05)。治疗后观察两组TC,TG,LDL-C水平降低,HDL-C水平升高,且TC,TG,LDL-C水平低于对照组,HDL-C水平高于对照组(P<0.05)。结论:加味大承气汤治疗湿热蕴结型高脂血症性急性胰腺炎临床疗效确切,可改善中医证候和患者症状,降低炎性因子,抑制机体氧化应激,改善血脂水平,且具有较好的安全性,值得临床推广应用。