YAP对糖尿病心肌缺血再灌注损伤大鼠BNIP3及线粒体自噬的影响

目的探究Yes相关蛋白(YAP)调控B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)/E1B-19k Da相互作用蛋白3(BNIP3)在糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)中的作用。方法无特定病原体(SPF)级成年雄性SD大鼠,腹腔注射链脲佐菌素(SZT)法构建1型糖尿病模型,成功造模后继续饲养12周。取非糖尿病大鼠12只和糖尿病大鼠24只,分为6组:非糖尿病假手术组(NS组)、非糖尿病缺血再灌注组(NIR组)、糖尿病假手术组(DS组)、糖尿病缺血再灌注组(DIR组)、糖尿病缺血再灌注+YAP抑制剂Super-TDU组(DIR+ST组)、糖尿病缺血再灌注+YAP抑制剂Super-TDU+自噬抑制剂3-MA组(DIR+ST+3-MA组),每组6只。MIRI模型通过结扎左冠状动脉前降支30 min后再灌注120 min的方法建立。Super-TDU和3-MA分别于再灌注前1 d和1 h注射。再灌注结束后ELISA法检测各组大鼠血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)和乳酸脱氢酶(LDH)水平;2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)法检测各组大鼠心肌梗死面积,苏木素-伊红(HE)染色法观察心肌组织病理变化,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测各组大鼠心肌组织YAP、BNIP3和Beclin表达水平。结果与各自NS组、DS组比较,NIR组和DIR组大鼠血清CK-MB和LDH表达水平升高,心肌组织YAP、BNIP3和Beclin表达水平上升(均P<0.05);与NIR组比较,DIR组血清CK-MB和LDH表达水平升高,心肌梗死面积增加,心肌病理损伤加重,心肌组织YAP表达水平明显上升,且BNIP3和Beclin表达水平下降(均P<0.05);与DIR组比较,DIR+ST组血清CK-MB和LDH表达水平和心肌梗死面积明显降低,心肌病理损伤减轻,心肌组织YAP表达水平明显下调,BNIP3和Beclin表达水平降低(P<0.05);与DIR+ST组比较,DIR+ST+3-MA组血清CK-MB和LDH表达水平升高,心肌梗死面积增加,心肌病理损伤加重,BNIP3和Beclin表达水平降低(P<0.05)。结论YAP介导的BNIP3线粒体自噬可能是调控糖尿病大鼠MIRI的重要机制。