大黄附子汤对重症急性胰腺炎早期大鼠结肠黏液层作用的研究

目的探讨大黄附子汤对重症急性胰腺炎(SAP)早期大鼠结肠黏液层的作用机制。方法18只健康雄性Sprague-Dawley大鼠,随机数字表法分为3组(每组6只):对照组(Sham组)、重症急性胰腺炎组(SAP组)、重症急性胰腺炎-大黄附子汤组(DHFZT-SAP组)。逆行胰胆管注射4%牛磺胆酸钠(1 ml/kg)构建SAP模型,对照组开腹翻动胰腺组织后关腹。Sham组和SAP组造模后6、12 h分别给予1.5 ml生理盐水(37℃)灌胃;DHFZT-SAP组对应给予1.5 ml大黄附子汤(37℃)灌胃。于造模24 h后,经腹主动脉取血,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清淀粉酶、内毒素、TNF-α和IL-6的含量;取胰腺、肺和结肠组织行病理学观察并评分;采用过碘酸希夫/阿利新蓝(PAS/AB)染色法观察结肠黏液层及杯状细胞的变化;采用免疫组织化学法检测结肠组织黏蛋白-2(MUC2)及结肠上皮细胞间Occludin蛋白的表达。组间比较用单因素方差分析。结果SAP组胰腺、肺、结肠组织可见水肿淤血及部分坏死,组织病理评分高于Sham组(9.33±1.86比0.17±0.41,F=130.761,P<0.05;4.50±1.22比0.33±0.52,F=58.962,P<0.05;9.0±1.67比0.17±0.41,F=157.809,P<0.05);而DHFZT-SAP组胰腺、肺、结肠呈轻度水肿淤血,病理评分低于SAP组(5.50±1.05比9.33±1.86,F=19.307,P<0.05;2.67±1.03比4.50±1.22,F=7.857,P<0.05;6.0±1.41比9.0±1.67,F=11.250,P<0.05)。SAP组血清淀粉酶、内毒素、TNF-α和IL-6含量高于Sham组(2254.89±197.29比224.66±42.82,F=606.760,P<0.05;68.90±8.55比23.01±4.92,F=129.806,P<0.05;292.03±20.33比56.0±11.60,F=610.122,P<0.05;198.14±17.36比30.86±2.63,F=544.778,P<0.05);DHFZT-SAP组血清淀粉酶、内毒素、TNF-α和IL-6含量低于SAP组(1353.93±54.23比2254.89±197.29,F=116.332,P<0.05;34.0±4.70比68.90±8.55,F=76.712,P<0.05;152.35±14.43比292.03±20.33,F=188.416,P<0.05;102.18±7.01比198.14±17.36,F=167.720,P<0.05)。SAP组大鼠结肠黏液层完整性被破坏,厚度和隐窝中杯状细胞数量低于Sham组(4.90±0.45比44.82±1.69,F=3135.946,P<0.05;7.14±0.79比15.77±0.85,F=329.202,P<0.05),MUC2和结肠上皮细胞间Occludin表达低于Sham组(0.14±0.02比0.32±0.05,F=60.693,P<0.05;0.19±0.03比0.55±0.06,F=167.018,P<0.05);DHFZT-SAP组结肠黏液层完整性有一定程度修复,厚度和隐窝中杯状细胞数量高于SAP组(13.31±0.78比4.90±0.45,F=533.746,P<0.05;10.92±0.71比7.14±0.79,F=75.635,P<0.05),MUC2和结肠上皮细胞间Occludin表达高于SAP组(0.18±0.02比0.14±0.02,F=11.552,P<0.05;0.31±0.10比0.19±0.03,F=9.383,P<0.05)。结论大黄附子汤通过修复结肠黏液屏障阻止内毒素移位而减轻SAP时全身炎性反应。

大黄附子汤对重症急性胰腺炎小鼠肠道微皱褶细胞变化的影响

目的:研究大黄附子汤对重症急性胰腺炎(SAP)小鼠肠道微皱褶细胞(M细胞)变化的影响,为大黄附子汤临床防治SAP提供理论基础。方法:选取40只健康SPF级C57BL/6J雄性小鼠,随机分为4组(每组10只):空白对照组、大黄附子汤对照组、SAP组、大黄附子汤治疗组,其中SAP组和大黄附子汤治疗组分别以3.5 g/kg剂量腹腔注射20%L-精氨酸,空白对照组和大黄附子汤对照组注射等剂量的等渗盐水;于造模后12、24、36 h,空白对照组和SAP组给予等渗盐水0.2 mL,大黄附子汤对照组和治疗组给予大黄附子汤0.2 mL灌肠,均于造模完成48 h后处死取材,使用ELISA检测血清淀粉酶、内毒素、IL-1β及TNF-α含量,取回肠及胰腺组织行HE染色、评分,免疫组化染色检测M细胞特异性蛋白GP2并评分。结果:(1)一般情况:对照组腹腔注射后小鼠一般情况好,精神状态良好,能正常进水,四肢活动自如,行动未受影响;SAP组小鼠腹腔注射后一般情况差,精神萎靡,反应迟钝,行动迟缓,呼吸急促,拱背收腹,饮水减少。(2)SAP组淀粉酶、内毒素、IL-1β及TNF-α水平较对照组明显升高(P<0.05);与SAP组进行对比,大黄附子汤治疗组血清淀粉酶、内毒素、IL-1β及TNF-α水平出现显著下降(P<0.05)。(3)HE染色:SAP组胰腺及回肠组织坏死严重,可见大量白细胞浸润。大黄附子汤治疗组胰腺及回肠组织轻度坏死,可见少量中性粒细胞等白细胞浸润。(4)免疫组化染色:SAP组与对照组相比GP2表达降低(P<0.05);相较于SAP组,大黄附子汤治疗组GP2的表达水平升高(P<0.05)。结论:大黄附子汤治疗可改善作为肠道免疫应答起始的M细胞数量与功能,增强肠道免疫应答,减轻肠免疫屏障损伤,减少内毒素入血,改善SAP症状。