水稻程序性细胞死亡抑制基因Dad-1在薏苡中的定位

基因Dad-1是普遍存在于动物和植物中一个高度保守的程序性细胞死亡抑制基因。以水稻Dad-1基因为探针,采用Southern杂交在薏苡中检出了Dad-1基因的同源序列,并利用荧光原位杂交的方法对其进行了染色体物理定位。在薏苡第9染色体短臂上检测到Dad-1基因的杂交信号,信号与着丝粒的百分距离为67.44±1.45。

桂花DAD-1基因克隆与表达分析

以"柳叶金桂"桂花(Osmanthus fragrans‘Liuye Jingui’)为试材,采用TAIL-PCR技术,克隆了"柳叶金桂"花瓣中DAD-1基因的全长序列,并分析了其在桂花不同组织部位及开花阶段的时空表达模式,以期为研究该基因在桂花花瓣衰老过程中的功能提供参考依据。结果表明:DAD-1基因由560个碱基组成,包含一个351bp的完整开放阅读框和一个3′-Poly A尾巴;DAD-1基因编码的蛋白包含116个氨基酸,其结构预测表明DAD-1蛋白属于疏水性膜整合蛋白,通过3个α?螺旋构成的跨膜区行使功能。半定量PCR结果表明,该基因在"柳叶金桂"的根、茎、叶、花等各组织器官中均有表达,且在花苞、新叶等幼嫩组织器官中相对表达量较高,在老叶等成熟组织器官中相对表达量较低。实时荧光定量PCR结果表明,在"柳叶金桂"花瓣衰老过程中,DAD-1基因在铃梗期开始显著下调表达。

HPLC-DAD法测定草鱼肉质中的维生素B_(1)和维生素B_(12)的含量

本文建立了高效液相色谱-二极管阵列检测法(HPLC-DAD)同时分离检测草鱼肉质中维生素B_(1)和维生素B_(12)的方法。草鱼样品经过酸消化和酶提取后释放出样品中蛋白结合和磷酸化的维生素B_(1)和维生素B_(12),再经固相萃取净化,结合HPLC-DAD对两种目标物进行检测。考察了高效液相色谱条件中流动相组成对分离效果的影响及固相萃取条件中样品溶液pH和洗脱剂对样品回收率的影响。采用HLB固相萃取柱对草鱼样品进行净化,甲醇/水(v/v=1/1)混合液洗脱维生素B_(1)和维生素B_(12)。色谱流动相分别为85%甲醇和50 mmol/L磷酸二氢钠(pH 3.00,含5 mmol/L己烷磺酸),进行梯度洗脱,柱温为40℃,检测波长为255 nm,进样体积为20µL,维生素B_(1)和B_(12)可在15 min内分离。在最佳分离检测条件下,维生素B_(1)和B_(12)的检出限(S/N=3)为0.21~0.36µg/mL,加标回收率为83.9%~95.1%。本文建立的方法可对草鱼肉质中维生素B_(1)和维生素B_(12)含量进行准确定量。

英红1号、英红9号和祁门茶树芽叶中嘌呤生物碱和茶多酚的HPLC-DAD-MS／MS分析

采用HPLC-DAD-MS/MS技术对英红1号、英红9号和祁门茶树的芽叶进行了分析,鉴定出了2种嘌呤生物碱,7种儿茶素类化合物以及2种非儿茶素类茶多酚。对这3个茶树品种的嘌呤生物碱和儿茶素类成分质量分数进行比较分析,结果表明三者的儿茶素类总质量分数均大于20%,其中英红1号和祁门红茶品种在儿茶素类成分的组成上较为接近,EGCG质量分数均为最高;而英红9号质量分数最高的是ECG。

DADS诱导人胃癌细胞分化作用中ERK/AP-1通路的改变

目的 探讨ERK/AP 1通路在二烯丙基二硫 (DADS)诱导人胃癌细胞分化中的作用 ,阐明DADS诱导人胃癌细胞分化的分子机制。方法 采用免疫细胞化学、图像分析及WesternBlot等方法 ,观察DADS作用于体外培养的人胃癌MGC80 3细胞前后AP 1成员c fos与c jun表达的改变以及ERKMAPK激酶的变化。结果 免疫细胞化学及图像分析结果显示 ,对照组c fos、c jun表达呈强阳性 ,而处理组呈阴性或弱阳性 ,阳性率明显降低 ,处理组光密度值较对照组明显低 (P <0 0 5 )。WesternBlot结果显示 :从 2 0、2 5、30到 35mg·L-1DADS处理癌细胞 ,DADS呈浓度依赖性抑制人胃癌细胞中ERK的活化 (P <0 0 5 ) ;并且DADS +MEK抑制剂PD980 5 9能完全阻断ERK活化 (P <0 0 5 ) ;时间效应上 ,在DADS刺激后 15～ 30min抑制作用最强 ,2h左右恢复至接近正常 (P <0 0 5 )。结论 ERK/AP

DADS对TE-1体外以及裸鼠体内生长的影响及作用机制

目的探讨二烯丙基二硫化物(DADS)对TE-1细胞体外以及裸鼠体内生长的影响及其作用机制。方法 MTT法检测24 h、48 h不同浓度DADS体外对食管癌TE-1细胞活力的影响。使用TE-1细胞建立裸鼠皮下移植瘤模型,分为对照组和DADS低浓度治疗组(20 mg/kg)、DADS高浓度治疗组(40 mg/kg),腹腔注射14次,隔日1次,观察动物状态并监测移植瘤生长状况,28 d后处死动物,使用Western blot检测不同组别移植瘤中磷酸化p38、磷酸化ERK1/2、caspase-3、活化caspase-3的表达水平。结果 MTT结果提示DADS能够在体外抑制TE-1的增殖,且具有剂量依赖性。DADS药物治疗组移植瘤生长速度明显低于对照组,以高剂量组为著。Western blot检测结果显示,DADS药物组移植瘤中p38MAPK磷酸化水平升高、ERK1/2的磷酸化水平显著降低,活化caspase-3水平明显升高,且均呈剂量依赖性(P<0.05)。结论 DADS在裸鼠体外、体内均能显著抑制人食管癌TE-1细胞的生长,其作用机制可能与DADS活化p38MAPK通路并抑制ERK通路,活化caspase-3进而抑制肿瘤增殖并促进TE-1细胞凋亡有关。

二烯丙基二硫下调DJ-1抑制人白血病HL-60细胞增殖及诱导分化

目的研究二烯丙基二硫(DADS)通过下调DJ-1对人白血病细胞系HL-60增殖抑制及诱导分化的影响。方法通过细胞形态法观察细胞分化;Western blot及免疫细胞化学检测DADS对HL-60细胞DJ-1表达的影响;针对DJ-1mRNA序列设计合成siRNA转染人白血病细胞HL-60,Western blot检测基因干扰效果;利用MTT法及间接免疫荧光检测DADS及DJ-1沉默对HL-60细胞的生长及细胞分化的影响。结果 DADS可以诱导HL-60细胞向成熟粒细胞系样分化。DADS呈时间依赖性抑制DJ-1的表达(P<0.05),DJ-1干扰组细胞生长减慢(P<0.05),与DADS共同作用后可诱导HL-60细胞分化。检测细胞生长情况发现干扰组细胞生长减慢(P<0.05)。结论 DADS通过下调DJ-1抑制细胞增殖并诱导HL-60细胞分化;干扰DJ-1基因可以增强DADS对HL-60细胞的增殖抑制诱导分化作用。

HPLC-DAD法检测桑叶中的1-脱氧野尻霉素

本实验旨在建立检测桑叶中1-脱氧野尻霉素(1-DNJ)的高效液相色谱(HPLC)-二极管阵列检测器(DAD)方法。以0.05mol/LHCl为提取溶剂,芴甲氧羰酰氯(FMOC-Cl)为衍生剂,在pH8.5的硼酸盐缓冲液中进行衍生化反应,生成具有紫外吸收的1-DNJ-FMOC络合物,采用C18色谱柱,乙腈和水为流动相,最大吸收波长为265nm处对目标物进行检测。结果表明:1-DNJ的色谱图分离效果良好,线性相关系数为0.9997,检出限为0.015mg/mL。样品平均加标回收率为81.3%~92.1%,相对标准偏差(RSDs)为4.7%~6.5%(n=5)。

siRNA-DAD1联合人参皂苷Rh2对肝癌SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨基因沉默DAD1联合人参皂苷Rh2对肝癌细胞增殖和凋亡的作用机制。方法化学合成siRNADAD1,然后转染肝癌SMMC-7721细胞,分别采用Q-PCR和Western blot检测DAD1的mRNA及蛋白表达水平变化,CCK-8法检测肝癌SMMC-7721细胞增殖能力的改变,DNA Ladder法和流式细胞术检测肝癌SMMC-7721细胞凋亡的变化。结果 siRNA-DAD1可下调肝癌SMMC-7721细胞中DAD1的mRNA及蛋白表达水平;siRNA-DAD1与人参皂苷Rh2均具有抑制SMMC-7721细胞增殖的能力,并促使其发生凋亡,二者联合作用效果更好(P<0.05)。结论 siRNADAD1可下调肝癌SMMC-7721细胞中DAD1的mRNA和蛋白表达水平,与人参皂苷Rh2协同抑制肝癌细胞SMMC-7721的增殖并促进其凋亡。

HPLC-DAD法测定板蓝根药材及其制剂中主要抗病毒生物碱含量

目的:利用HPLC-DAD测定板蓝根药材及其制剂中表告依春(Epigoitrin)和2,4(1H,3H)喹唑二酮(2,4(1H,3H)-quinazolinedione)的含量。方法:ZORBAX SB-C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱;流动相为乙腈-(0.1%磷酸+0.03%三乙胺)水溶液=12∶88;流速为0.7 mL/min;检测波长为224 nm,柱温为30℃。结果:表告依春在0.040 9μg^1.103 8μg,2,4(1H,3H)喹唑二酮在0.010 6μg^0.169 6μg与峰面积呈良好的线性关系,回收率分别为98.44%,RSD为1.43%;98.67%,RSD为1.65%。结论:本方法能够很好地测定板蓝根药材及其制剂中主要抗病毒类生物碱表告依春、2,4(1H,3H)喹唑二酮的含量,可用于板蓝根药材及其制剂的质量控制。

HPLC-DAD和HPLC-ESI-MS/MS检测小麦及土壤中申嗪霉素残留方法比较

[目的]选出更优化的检测小麦、麦苗/麦秆和土壤中申嗪霉素的残留分析方法。[方法]样品经提取、净化后,分别采用DAD检测器和质谱检测器检测。[结果]申嗪霉素在小麦、麦苗/麦秆和土壤中平均添加回收率分别为80.3%～95.8%、71.7%～94.9%和77.2%～101.1%,RSD分别为1.59%～8.03%、1.74%～8.40%和1.29%～8.55%。申嗪霉素用DAD和MS/MS两种方法在小麦、麦苗/麦秆和土壤中LOQ分别为0.01、0.05、0.005 mg/kg和0.005、0.01、0.005 mg/kg。[结论]HPLC-ESI-MS/MS方法操作简便、灵敏度高,更适合检测田间样品中申嗪霉素残留。