大黄黄连泻心汤治疗2型糖尿病临床研究

目的研究大黄黄连泻心汤治疗2型糖尿病(T2DM)的疗效和安全性。方法纳入鹰潭一八四医院100例T2DM受试者,随机分为对照组和试验组,在原治疗基础上试验组加用大黄黄连泻心汤,对照组加用大黄黄连泻心汤模拟剂。干预8周后进行治疗效果以及安全性评估。结果治疗后,试验组治疗总有效率较对照组显著升高;试验组的糖化血红蛋白(HbA1C),空腹血糖(FPG)、餐后2 h血糖(2 h PG)、三酰甘油(TG),低密度脂蛋白(LDL-C)、身体质量指数(BMI)指标均较对照组明显降低;试验组中医证候积分较对照组明显较低,差异具有统计学意义(P<0.05)。干预期间,2组均未出现严重的不良事件。结论采用大黄黄连泻心汤联合降糖药二甲双胍片对2型糖尿病患者治疗的临床效果良好,安全性较好,值得推广。

从六经九分法看热痞证

热痞证在教材中归入太阳病变证,有大黄黄连泻心汤证和附子泻心汤证。通过对症状和方药的分析,认为大黄黄连泻心汤证属阳明病,附子泻心汤证属厥阴病。只有在六经辨证的大框架下,两证才能得到正确认识和充分运用。

仝小林教授运用黄连不同配伍经验

总结了仝小林教授运用黄连不同配伍,治疗脾瘅、失眠、呕吐、腹泻、心悸、痈疮的经验。仝小林教授以黄连系列方剂为基础,灵活化裁配伍治疗脾瘅、失眠、腹泻、呕吐、心系疾病、皮肤病等疾病,并根据病证、病势,给予不同的剂量和配比。

大黄黄连泻心汤及其加减方改善2型糖尿病研究进展

2型糖尿病(T2DM)以胰岛素抵抗(IR)和胰岛素分泌缺陷为发病基础,具体机制尚未明确,目前研究涉及糖脂毒性、炎症反应、氧化应激损伤及线粒体功能障碍等机制。现代中医学者根据T2DM临床特征及自然发展进程,将其命名为“糖络病”,即早期主要表现为血糖异常,随着病程进展,逐渐致全身脉与络广泛损害,最终导致脉络病变的一类疾病。其中脾瘅(肥胖型)是T2DM临床最为常见的类型,“内热致消”贯穿T2DM发病及并发症发生的始终,内热为病机之要。对此临床应用经方大黄黄连泻心汤及其加减方治疗取得显著疗效。笔者通过梳理大黄黄连泻心汤溯源及证治特点、治疗T2DM的临床应用研究及实验基础研究,包括调节糖脂代谢紊乱、改善胰岛素抵抗、调节炎症反应、抗氧化应激损伤、调控自噬相关信号通路、调节肠道菌群、抑制细胞焦亡、减轻内质网应激等作用机制。以期为大黄黄连泻心汤及其加减方防治T2DM及相关并发症的进一步研究提供方向、为将其开发为针对肥胖型T2DM实现快速降糖的优势中成药提供参考及更好指导该药的临床推广。

大黄黄连泻心汤加味对肥胖2型糖尿病大鼠内脏脂肪线粒体自噬及棕色化影响

目的:观察大黄黄连泻心汤加味对肥胖2型糖尿病(T2DM)模型ZDF大鼠内脏脂肪组织线粒体自噬及棕色化的影响。方法:将40只ZDF大鼠高脂饲料诱导为肥胖T2DM模型,随机分为模型组、二甲双胍组(0.18 g·kg^(-1))、大黄黄连泻心汤加味高、中、低剂量组(2.16、1.08、0.54 g·kg^(-1)),每组8只,另取8只ZDF(fa/+)大鼠作为正常组,灌胃体积均为10 mL·kg^(-1),模型组和正常组灌服等体积纯净水,1次/d,持续12周。定期检测大鼠空腹血糖(FBG);干预12周后检测大鼠体质量、附睾脂肪质量、血清中葡萄糖(GLU)、糖化血清蛋白(GSP)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平;采用苏木素-伊红(HE)染色观察附睾脂肪组织病理形态学改变;透射电镜(TEM)观察脂肪细胞线粒体自噬情况;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测附睾脂肪低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、腺病毒E1B19kD相互作用蛋白3(BNIP3)、微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)、泛素结合蛋白1(p62)、解偶联蛋白1(UCP1)、碘代甲状腺素2(Dio2)、PR结构域结合因子16(Prdm16)mRNA表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测附睾脂肪HIF-1α、BNIP3、LC3B、p62及UCP1蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠附睾脂肪出现病理学改变;脂肪细胞线粒体固缩、自噬小体较多并发生线粒体自噬;大鼠体质量、附睾脂肪质量、FBG、GLU、GSP、TC、TG、LDL-C水平显著升高(P<0.01),HDL-C水平显著降低(P<0.01),附睾脂肪HIF-1α、BNIP3、LC3B mRNA及蛋白表达显著升高(P<0.01),p62、UCP1 mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.01),Dio2、Prdm16 mRNA表达显著降低(P<0.01)。与模型组比较,各给药组大鼠附睾脂肪组织病变不同程度减轻;二甲双胍组和大黄黄连泻心汤加味高剂量组大鼠脂肪细胞胞浆中线粒体形态结构完整,嵴清晰,基质均匀,胞浆中可见少量自噬溶酶体和自噬小体;二甲双胍组、大黄黄连泻心汤加味高、中剂量组大鼠体质量及附睾脂肪质量均显著降低(P<0.01);各给药组大鼠附睾脂肪指数均明显降低(P<0.05);各给药组大鼠FBG均显著降低(P<0.01);二甲双胍组及大黄黄连泻心汤加味高、中剂量组大鼠血清中GSP、GLU、TG、LDL-C水平均明显降低(P<0.05,P<0.01);二甲双胍组和大黄黄连泻心汤加味高剂量组大鼠血清TC水平显著降低(P<0.01),各给药组大鼠血清HDL-C水平均明显升高(P<0.05,P<0.01);二甲双胍组和大黄黄连泻心汤加味高、中剂量组附睾脂肪HIF-1α、BNIP3、LC3B mRNA及蛋白表达明显降低,UCP1蛋白表达水平明显升高(P<0.05,P<0.01);二甲双胍组和大黄黄连泻心汤加味高剂量组p62、Dio2、Prdm16 mRNA及p62蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论:大黄黄连泻心汤加味可能通过HIF-1α/BNIP3/LC3B途径抑制内脏脂肪组织线粒体自噬,促进脂肪棕色化,改善肥胖T2DM糖脂代谢。

基于Nrf2/HO-1轴探讨大黄黄连泻心汤加味对2型糖尿病大鼠肝脏氧化应激损伤的影响

目的:基于核因子红系2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶-1(HO-1)轴探讨大黄黄连泻心汤加味对2型糖尿病(T2DM)大鼠肝脏氧化应激损伤的影响及其作用机制。方法:6只ZDF(fa/+)大鼠为正常组,30只ZDF(fa/fa)大鼠为造模组,采用高脂饲料喂食诱导建立T2DM大鼠模型,造模成功后随机分为模型组、二甲双胍组(0.18 g·kg^(-1))及大黄黄连泻心汤加味低、中、高剂量组(0.54、1.08、2.16 g·kg^(-1)),每组6只。药物干预12周后测定大鼠体质量、肝质量、空腹血糖(FBG)、口服葡萄糖耐量试验(OGTT)水平、全自动生化仪检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平,苏木素-伊红(HE)染色观察肝脏组织病理形态变化,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测肝脏组织超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧(ROS)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)水平,免疫组化检测肝脏Nrf2的表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝脏组织Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠体质量、肝质量、肝指数均显著升高(P<0.01);与模型组比较,二甲双胍组及大黄黄连泻心汤加味中、高剂量组大鼠体质量、肝质量、肝指数均显著降低(P<0.01)。与正常组比较,模型组大鼠TC、TG、LDL含量均显著升高(P<0.01),HDL含量显著降低(P<0.01);与模型组比较,二甲双胍及大黄黄连泻心汤加味各剂量组TC含量均显著降低(P<0.01),二甲双胍及大黄黄连泻心汤加味各剂量组TG含量均明显降低(P<0.05),大黄黄连泻心汤加味中、高剂量组LDL含量明显降低(P<0.05),二甲双胍及大黄黄连泻心汤加味各剂量组HDL含量明显升高(P<0.05)。与正常组比较,模型组大鼠ALT、AST活性显著升高(P<0.01);与模型组比较,二甲双胍及大黄黄连泻心汤加味各剂量组ALT活性均明显降低(P<0.05),AST活性均显著降低(P<0.01)。与正常组比较,所有时间点模型组大鼠FBG显著升高(P<0.01);与模型组比较,8、10、12周二甲双胍及大黄黄连泻心汤加味各剂量组FBG明显降低。OGTT结果显示,与正常组比较,所有时间点的模型组大鼠血糖均显著升高(P<0.01);与模型组比较,所有时间点的二甲双胍组血糖显著降低(P<0.01),90、120 min大黄黄连泻心汤加味中、高剂量组血糖均显著降低(P<0.01)。HE病理显示,正常组大鼠肝细胞结构清晰,排列规律;模型组大鼠肝细胞组织紊乱,可见脂肪空泡,大量细胞出现变形坏死状态;二甲双胍及大黄黄连泻心汤加味各剂量组大鼠肝组织结构转好,少量坏死细胞。与正常组比较,模型组大鼠肝脏SOD、GSH-Px显著降低(P<0.01),肝脏ROS、MDA显著升高(P<0.01);与模型组比较,二甲双胍及大黄黄连泻心汤加味各剂量组大鼠肝脏SOD、GSH-Px显著升高(P<0.01),MDA显著降低(P<0.01),二甲双胍及大黄黄连泻心汤加味中、高剂量组大鼠肝脏ROS明显降低(P<0.05)。与正常组比较,模型组大鼠肝脏Nrf2、HO-1 mRNA表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,二甲双胍及大黄黄连泻心汤加味中、高剂量组大鼠肝脏Nrf2、HO-1mRNA表达明显升高(P<0.05)。免疫组化结果显示,与正常组比较,模型组大鼠肝脏Nrf2、HO-1阳性表达明显降低(P<0.05);与模型组比较,二甲双胍及大黄黄连泻心汤加味各剂量组大鼠肝脏Nrf2、HO-1阳性表达升高,细胞核周围棕黄色颗粒明显增多(P<0.05)。Weatern blot结果显示,与正常组比较,模型组大鼠肝脏Nrf2、HO-1蛋白表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,二甲双胍及大黄黄连泻心汤加味各剂量组大鼠肝脏Nrf2、HO-1蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论:大黄黄连泻心汤加味能明显改善T2DM大鼠一般情况及肝脏组织的病理学变化,可能通过调控Nrf2/HO-1轴改善肝脏氧化应激损伤。

HPLC测定大黄、黄连药对提取物中10种成分的含量

目的:建立高效液相色谱法测定大黄、黄连药对提取物中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、药根碱、表小檗碱、黄连碱、巴马汀、小檗碱10种成分的含量。方法:采用Phenomsil BDS C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为甲醇-0.1%磷酸(65∶35),检测波长254 nm;乙腈-水(37∶63,内含磷酸二氢钾0.34 g,十二烷基硫酸钠0.17 g),检测波长345 nm,柱温25℃。结果:大黄中5种有效成分完全分离;黄连中5种有效成分完全分离;峰面积与其质量浓度呈良好的线性;加样回收率(n=6)分别为100.79%,99.38%,99.83%,98.94%,98.86%,100.20%,99.53%,99.76%,100.07%,100.37%。RSD分别为1.3%,1.8%,1.6%,0.5%,1.6%,1.2%,1.6%,1.8%,2.0%,1.6%。结论:该方法准确可靠、重复性好,可用于大黄、黄连药对提取物的质量控制。

基于网络药理学探讨大黄黄连泻心汤治疗2型糖尿病作用机制

目的:基于网络药理学方法探讨大黄黄连泻心汤治疗2型糖尿病的作用机制。方法:借助中药系统药理学技术平台(TCMSP)获取大黄黄连泻心汤主要化学成分、对应靶点及靶标基因,借助人类基因数据库(Gene Cards)获取2型糖尿病相关靶标基因,将药物靶标基因与疾病靶标基因映射得到大黄黄连泻心汤作用于2型糖尿病的预测靶点。利用Cytoscape3. 7. 1软件构建中药化合物-靶点网络及蛋白与蛋白相互作用网络(PPI),利用DAVID 6. 8在线工具进行潜在基因的基因本体(GO)分析和京都基因及基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。结果:大黄黄连泻心汤作用于2型糖尿病的有效成分有17个,相关靶点94个,关键有效成分17个,关键靶点16个。GO分析结果显示,大黄黄连泻心汤治疗2型糖尿病潜在基因的生物功能主要涉及氧化应激、细胞凋亡、蛋白结合、炎症反应等;KEGG通路富集结果显示,大黄黄连泻心汤治疗2型糖尿病潜在基因的通路主要涉及低氧诱导因子(HIF),肿瘤坏死因子(TNF),磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt),核转录因子-κB(NF-кB),血管内皮生长因子(VEGF)等信号通路。结论:大黄黄连泻心汤治疗2型糖尿病是多成分、多靶点、多通路的复杂过程,主要通过参与氧化应激、细胞凋亡、蛋白结合、炎症反应等发挥治疗2型糖尿病的作用。