大黄灵仙方对胆道炎症模型大鼠胆管组织miRNA-30b表达及炎症-纤维化相关因子的影响

目的探讨大黄灵仙方减轻胆道炎症防治胆石症的可能作用机制。方法将50只SD大鼠随机分为空白组、模型组、大黄灵仙组、大黄灵仙+空白抑制剂组、大黄灵仙+抑制剂组,每组10只。除空白组外,其余各组均采用脂多糖(LPS)诱导构建大鼠胆道炎症动物模型。大黄灵仙组、大黄灵仙+空白抑制剂组、大黄灵仙+抑制剂组三组大鼠制备胆道炎症模型前3天开始中药灌胃,给药剂量为320 mg/(kg·d),空白组、模型组大鼠给予2 ml/100 g蒸馏水灌胃,每天2次,连续干预6天。采用HE染色观察各组胆管病理形态改变,免疫组化法检测胆管核因子κB(NF-κB)蛋白表达,ELISA法检测大鼠血清白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达水平,实时PCR法检测胆管组织中微小核糖核酸-30b(miRNA-30b)及转化生长因子β1(TGF-β1)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)和骨形态发生蛋白2(BMP2)mRNA表达,Western blot法检测TGF-β1、NLRP3以及BMP2蛋白表达量。结果与空白组比较,模型组大鼠胆管结构异常,汇管区内可见大量淋巴细胞、浆细胞浸润以及胆小管扩张,NF-κB蛋白阳性表达增加,出现核浸润,血清炎症因子IL-1β、TNF-α表达明显升高,胆管组织中TGF-β1、NLRP3、BMP2 mRNA以及蛋白表达量显著增加,miRNA-30b表达水平明显下降(P<0.01)。与模型组比较,大黄灵仙组和大黄灵仙+空白抑制剂组胆管病理形态均改善,炎性细胞浸润减少,NF-κB阳性表达降低,同时核浸润减轻,血清炎症因子IL-1β、TNF-α表达水平下降,胆管组织中TGF-β1、NLRP3、BMP2 mRNA以及蛋白表达量均降低,miRNA-30b表达水平均明显升高(P<0.05或P<0.01),而大黄灵仙+抑制剂组各指标改善不明显(P>0.05)。大黄灵仙组和大黄灵仙+空白抑制剂组各指标差异亦无统计学意义(P>0.05)。结论大黄灵仙方可能通过调控miRNA-30b及炎症-纤维化相关因子表达,起到延缓胆石症病程进展的作用。