性控精液对奶牛体内胚胎质量、发育和移植妊娠率的影响

[目的]研究性控精液对奶牛体内胚胎质量、胚胎发育和胚胎移植妊娠率的影响。[方法]将144头青年奶牛随机分为对照组(63头)和试验组(81头),使用促卵泡激素(FSH,260 mg/头)进行超排处理。对照组和试验组分别使用常规精液和性控精液输精,并对获得的体内性控胚胎进行移植,对胚胎生产、胚胎质量、胚胎发育和胚胎移植妊娠情况进行统计。[结果]试验组供体获得的平均可用胚胎数(5.67枚)显著(P<0.05)低于对照组(6.92枚);试验组供体获得的可用胚胎中A级胚胎比例(62.53%)、B级胚胎比例(35.29%)与对照组(A级胚胎比例66.51%、B级胚胎比例30.97%)相比差异均不显著(P>0.05);试验组供体获得的可用胚胎中桑葚胚比例(84.10%)显著(P<0.05)高于对照组(61.24%),囊胚比例(15.90%)显著(P<0.05)低于对照组(38.76%);试验组的鲜胚移植妊娠率(52.41%)显著(P<0.05)低于对照组(66.13%)。[结论]与常规精液相比,使用性控精液生产奶牛体内性控胚胎并移植后,平均可用胚胎数、可用胚胎中囊胚比例和胚胎移植妊娠率降低,可用胚胎质量未明显降低;优化性控精液使用方案和胚胎移植技术能够提高体内性控胚胎生产和胚胎移植效率。

荷斯坦奶牛与和牛活体采卵-体外受精(OPU/IVF)体系的建立及应用

[目的]研究牛活体采卵-体外受精(ovum pick-up and in vitro fertilization,OPU/IVF)体系,建立高效的牛体外胚胎生产系统。[方法]以从屠宰场采集的健康牛新鲜卵巢为试验材料,进行卵母细胞体外成熟、体外受精、体外胚胎培养相关条件的摸索,重点考查体外胚胎培养液中添加瘦素(leptin)对囊胚率的影响。选取13~15月龄健康荷斯坦奶牛及和牛各10头作为供体,进行活体采卵、卵母细胞体外成熟、体外胚胎生产,记录可用卵数及可用囊胚数,统计卵裂率、囊胚率;2个品种牛的体外冷冻胚胎解冻后,以荷斯坦奶牛为受体进行胚胎移植,移植后45 d统计妊娠率。[结果]添加30 U/mL的leptin可以显著(P<0.05)提高屠宰场来源牛体外胚胎的囊胚率。随机选择供体牛活体采卵,平均每头荷斯坦奶牛获得可用卵7.5枚,平均每头和牛获得可用卵8.1枚;荷斯坦奶牛及和牛的卵裂率分别为84.00%、82.71%,二者差异不显著(P>0.05)。体外培养条件下,平均每头荷斯坦奶牛获得可用囊胚4.3枚,平均每头和牛获得可用囊胚3.7枚;荷斯坦奶牛的囊胚率(57.33%)显著(P<0.05)高于和牛(45.68%)。体外胚胎解冻后移植,荷斯坦奶牛胚胎组的妊娠率为54.17%,和牛胚胎组的妊娠率为55.79%,二者差异不显著(P>0.05)。[结论]该研究建立的OPU/IVF体系可以有效提高优质母牛的利用效率,降低生产成本,为牛体外胚胎生产系统的优化提供了参考。

奶山羊超数排卵与胚胎移植实用方法

奶山羊场应用超数排卵和胚胎移植现代高新生物技术对于加快奶山羊良种繁育进程,提高奶山羊良种扩繁速度等具有重要意义。本文就奶山羊场进行奶山羊超数排卵和胚胎移植的具体方法,如进行超数排卵和胚胎移植供体母羊与受体母羊的选择管理;供、受体母羊同期发情、超数排卵、胚胎采集、胚胎质检、胚胎移植等的具体方法步骤和技术要求及奶山羊进行超数排卵胚胎移植的善后处理工作,做了较为详细的阐述。同时结合奶山羊场实际,就如何进行奶山羊超数排卵胚胎移植技术工作人员的组织管理,工作场地环境等的技术要求也做了较为全面的介绍。

云南省奶牛胚胎移植试验

实验用12头黑白花奶牛(3-9岁),PGF_(2α)作同步发情处理后,周期第10-12天,总剂量36mg的FSH-P按递减方式每日肌肉注射2次,间隔12小时,共注射4天,在第3天加注PGF_(2α) 35mg,进行超数排卵处理。12头供体牛共得胚135枚,可用胚数118枚,为总胚数的87.47％。平均每头得胚11.25枚,可用胚9.8枚。其中有3头供体共得胚76枚(分别为24、25和27枚),可用胚69枚,平均每头可别胚高达23枚。胚胎分别移植给20头同步发情处理的黑白花奶牛和20头黄牛受体(有3头为自然发情),海头移植1枚胚胎。结果,奶牛受孕率为35％(受孕7头,产犊7头);黄牛受孕率为40％(受孕8头,流产2头,产犊6头)。奶牛和黄牛总受孕率为37.5％。

影响黑白花母牛超排效果的主要因素分析

4年间超排307头次黑白花母牛的结果表明:①用高纯度的FSH超排供休母牛,所得的可用胚胎的比率高于普通FSH(P<0.05);②用FSH和PMSG+aPMSG超排的成功率和可用胚胎数分别是90.77%、89.29%和5.42、5.57枚(P>0.05);③供体母牛开始超排时黄体对侧卵巢有活性,比静止和有卵泡的黄体数和可用胚胎数高;④A级黄体母牛的超排结果好于B级(P<0.05)和C级黄体(P<0.01);⑤第2、3胎供体母牛比其它胎次的可用胚胎数稍高;⑥在发情周期的第8～14天开始超排,其中第10～12天的卵巢反应最好;⑦重复超排4次,第4次的可用胚胎数比前3次低;⑧不同的年度、季节、产奶量和产后60天以后开始超排的时间对超排结果没有显著影响。

波尔山羊胚胎移植奶山羊应用技术研究

1999～ 2 0 0 0年 ,在成都波尔山羊种羊场进行了波尔山羊胚胎移植奶山羊应用技术研究。对 12只供体用FSH减量法进行超排处理 ,回收胚胎 2 5 7枚 ,平均 2 1 4± 11 1枚 ,其中可用胚 2 0 6枚 ,平均 17 2± 8 3 3枚。将 170枚可用胚移植给同期发情的 78只雅安奶山羊受体 ,其中 2只在妊娠 2个月后流产 ,49只受体羊妊娠到期产下纯种波尔山羊羔 88只 ,移植受体妊娠率 65 4%(5 1/ 78) ,产羔受体比率 62 8% (4 9/ 78) ,胚胎成羔率 5 1 8% (88/ 170 )。平均每只波尔山羊供体通过胚胎移植增加纯种后代7 3 3只。其中RB5 2号波尔山羊获 16枚胚胎 ,移植给 8只奶山羊 (双胚 ) ,全部妊娠 ,产下 13只纯种波尔山羊 ,胚胎成羔率达 81 3%。结果表明 ,波尔山羊胚胎移植奶山羊能获得较高的妊娠率和胚胎成羔率 ,已可从研究阶段发展到产业化应用。

牛胚胎移植产业化超数排卵的系统研究

为了提高供体牛的利用率,加速胚胎移植技术的产业化,试验系统地研究了超排方案、青年奶牛的月龄及发情周期不同阶段、重复超排次数、超排间隔时间、卵巢状态、胎次与产后间隔时间对超排效果的影响,共超排供体奶牛1127头次,回收胚胎共10900枚,可用胚胎数量为6942枚,平均每头次获得胚胎数量为6.73枚。结果表明:①应用PSO1、PSO2和PSO3三种方案进行超排处理,PSO3方案的超排成功率和平均回收可用胚胎数均高于其他两个方案;②利用发情周期9～11d的自然发情奶牛直接超排效果最好;③对青年奶牛进行超排处理,应限制超排起始时间,15月龄以上的青年奶牛超排效果较好;④供体牛连续重复超排控制在3次以内,连续4次超排处理后极大降低胚胎可用率;⑤超排处理的间隔最短时间应该选择46～60d;⑥经产牛1～3胎次超排效果较好,7胎次以上较差;⑦产后间隔时间选取80～90d。

奶牛胚胎一分为四分割移植试验

1990年7月至1991年3月,以非手术方法采得黑白花奶牛7日龄胚胎。在立体显微镜下,应用徒手简易胚胎分割法,一分为四分割6枚胚胎。将所分割的24枚1/4裸胚,以非手术方法,分别移植给18头受体牛。其中9头妊娠,受体移植妊娠率为50％(9/18),胚胎移植妊娠率为150％(9/6)。得到同胚三犊一组,同胚二胎一组(其中一头产犊,一头流产)和单胎四个(其中两头产犊,两头流产)。

奶牛胚胎移植黄牛应用技术研究

超排处理黑白花奶牛58头,有效47头,头均获卵7.2±5.2枚(340/47),可移胚4.7±4.3枚(220/47)。两种超排方法比较试验,低剂量预处理超排组头均获卵8.2±5.3枚(164/20),可移胚5.2±4.3枚(103/20),高于常规超排组头均获卵数6.5±5.1枚(176/27),可移胚数4.3±4.3枚(117/27)。鲜胚移植农户饲养的黄牛受体,其受胎率为44.6％(41/92)。

放牧条件下不同处理对西门塔尔牛超排效果的影响

为探索适合草原放牧条件下西门塔尔牛的超数排卵技术,分别采用国产及进口促卵泡素(FSH)和三种方案(A:FSH+PG;B:FSH+PG+GnRH;C:FSH+PG+CIDR+GnRH)对放牧条件下西门塔尔牛进行超数排卵试验。结果表明,采用国产FSH超排时,方案A、方案B和方案C所获头均可用胚数分别为(3.43±2.41)枚、(5.93±3.54)枚和(7.21±3.19)枚,采用进口FSH超排时,三种超排方案所获头均可用胚数分别为(4.34±2.71)枚、(6.76±3.79)枚和(7.79±4.23)枚,采用两种FSH超排,方案B、方案C所获头均可用胚数明显高于方案A(P<0.05);3种方案中,国产与进口FSH所获头均可用胚数差异均不显著(P>0.05)。试验表明,在放牧条件下,采用三种超排处理方案,以FSH+PG+CIDR+GnRH法最好,FSH+PG+GnRH法次之,FSH+PG法效果最差;国产FSH与进口FSH超排效果差异不显著。

黑安格斯牛超数排卵试验效果分析

[目的]为了验证黑安格斯牛超数排卵设计方案的可行性。[方法]超数排卵方案采用CIDR+GnRH+VADE+FSH+PG的方法。[结果]本次试验获得平均可用胚胎数7.6枚/头,可用胚胎率为82%。[结论]该试验方案效果显著,可以应用于黑安格斯牛超数排卵处理。

低剂量FSH预处理奶牛超数排卵的效果

超数排卵(简称超排)是胚胎移植的首要技术环节.D·T·Armstrong等研究认为,一些动物于发情的第4天或第5天起,有一个持续3天的“卵波生长波”,这个波中的卵泡数决定超排处理后的排卵数.对牛卵巢组织学观察以及对啮齿类动物的研究结果表明,其超排排卵率很大程度上决定于发情周期阶段以及相关的卵泡生长波.发情周期早期用低剂量FSH对供体牛进行预处理,使其“卵泡生长波”得以加强,可增加排卵周期第11天(超排处理开始)卵巢的有腔卵泡数.近年国外对牛的超数排卵处理大都在发情周期的第9～13天开始,连续4天递减注射FSH或一次注射PMSG,其超排效果始终在“丰收,歉收乃至无收”间剧烈波动.笔者根据母牛发情周期内FSH的变化特点,设计了用低剂量FSH于发期周期的早期进行预处理,然后进行常规超排处理的新超排处理方案,以期获得较好而稳定的超排效果.现将其试验研究结果报告如下:

奶牛体内性控胚胎生产的研究

为探讨奶牛合理的超排方法,采用分离的X冻精对17头超数排卵的荷斯坦奶牛进行人工授精,生产体内性控胚胎。结果表明,处理Ⅰ组在头均获卵数、可用胚及退化胚几个方面都低于处理Ⅱ组,但差异不显著(P>0.05);头均黄体数和未受精数,Ⅰ组高于Ⅱ组(P>0.05);青年牛头均获卵数、可用胚和退化胚方面都高于经产牛组,但差异不显著(P>0.05);青年牛头均未受精卵数显著高于经产牛(P<0.05),头均黄体数低于经产牛,但差异不显著(P>0.05)。

影响本地杂交黄牛胚胎移植妊娠率的因素分析

本试验选用本地杂交黄牛作为受体,在同一饲养条件下,利用自然发情的方法,移植黑白花奶牛提供的胚胎,移植结果显示:胚胎发育日龄和受体发情日期同步移植,受胎率44.2%,8天受体移植7天桑葚胚,受胎率38.9%,7天受体移植8天囊胚,受胎率35.5%,三者比较差异不显著(P>0.05)。冻胚分别移植A、B、C级黄体的受体,其受胎率分别为40.4%、37.2%、33.3%,三者差异不显著(P>0.05);而鲜胚移植A、B、C级黄体,受胎率分别为48.6%,40.3%,25.8%,A、B级黄体移植受胎率差异不显著(P>0.05),A、C级黄体差异极显著(P<0.01),B、C级黄体差异显著(P<0.05)。不同胚胎质量比较:一、二、三级胚胎移植受胎率分别为50.5%、42.6、25.2%,三者比较,一级、二级胚胎受胎率差异不显著(P>0.05),但二级和三级差异显著(P<0.05),一级和三级差异极显著(P<0.01)。移植单胚和双胚的受胎率分别为25.2%,40.2%,二者差异显著(P<0.05)。

奶牛鲜胚移植技术的研究

用PMSG+PG,PMSG+PG+激光照射,FSH+PG和PSH+PG+促排卵3号四组药物组合,超排处理15头黑白花奶牛。各组获得可用胚胎头均数分别为1.50±2.52枚(n=2)。3.30±2.52枚(n=3),2.86±3.85枚(n=7)和6.00±5.29枚(n=3),四组总头均数为3.40±3.70枚(n=15)。鲜胚移植三批受体妊娠率平均为62.2％(28/45),前两批移植妊娠率高达78.3％(18/23),其中1头供体一次冲胚11枚,移植11头受体,有9头妊娠。15头供体牛冲胚后40d内人工授精全部妊娠。

核心群奶牛超数排卵技术影响因素的研究

[目的]为进一步研究核心群奶牛超数排卵技术影响因素。[方法]试验使用3个FSH剂量和4个公牛精液对27头青年奶牛进行超数排卵。对供体牛胚胎生产情况和受体胚胎移植妊娠率进行统计。[结果]结果显示,供体2次超排获得7.8枚平均可用胚胎显著高于1次超排获得的5.7枚平均可用胚胎(P<0.05);260,280 mg FSH超排供体获得6.0和7.7枚平均可用胚胎显著高于300 mg FSH超排供体获得的4.6枚平均可用胚胎(P<0.05);供体使用4个公牛精液人工授精后获得的平均可用胚胎数和平均未受精卵数差异不显著(P>0.05);移植前接种疫苗的受体胚胎移植妊娠率显著降低(P<0.05)。[结论]核心群奶牛超排适宜FSH剂量为260~280 mg,使用高受精力公牛精液和对超排反应好的供体重复超排能够提高超排效率,受体移植前避免疫苗接种能够提高胚胎移植妊娠率。

通过阴道穹窿移植奶牛胚胎试验

采用改造的日本产FHK奶牛胚胎移植器械,用长针头穿过奶牛阴道穹窿将胚胎注入子宫角。此法移植2头受体,2头妊娠产犊。这种方法在受体牛子宫颈特别细小、紧缩,胚胎移植管不能插入,不能进行非手术方法移植时可采用。较开腹的外科手术方法简便、快速和安全,亦可无数次地反复采用。

不同分割液对奶牛不同阶段胚胎分割效果的影响

本试验探讨了3种不同分割液对奶牛桑葚胚和囊胚分割效果的影响。借助显微操作仪,将发育至第6～8天的体内常规生产的桑葚胚和囊胚进行分割,体外培养半胚,观察其发育情况,选择形态恢复好的半胚与一个囊胚滋养层细胞囊泡(trophoblastic vesicles,TRV)共移植。结果显示,在PBS+0.2mol/L蔗糖与PBS+5%PVP中分割桑葚胚,其分割成功率显著高于PBS(P<0.05),分别为89.13%、86.73%和69.67%,而半胚的囊胚发育率及移植妊娠率三者均无显著差异(P>0.05);在PBS+0.2mol/L蔗糖与PBS+5%PVP中分割囊胚,其分割成功率显著高于PBS(P<0.05),分别为94.52%、92.52%和70.52%,而半胚培养的囊胚发育率及移植妊娠率三者均无显著差异(P>0.05);说明在PBS中分别添加0.2mol/L的蔗糖和5%的PVP有利于提高奶牛桑葚胚和囊胚的分割成功率。

不同受体胚胎移植荷斯坦奶牛生长指标比较及相关性分析

通过对酒泉地区不同受体胚胎移植荷斯坦奶牛生长指标的研究，探讨胚胎移植荷斯坦奶牛对酒泉地区生态条件的适应性。采用生长指标比较和相关性分析，对甘肃酒泉地区土杂、西杂和黑白花三种受体牛所产45头胚胎移植荷斯坦奶牛0日龄、6月龄、12月龄阶段的体尺体重指标进行了研究。结果发现：三种受体胚胎移植牛体尺体重随日龄的增加而增加，0～12月龄体重增长快速，体高、胸围增长较快，管围生长较慢。三阶段体尺体重彼此之间的相关系数均在0．90以上，各相关数之间有高度统计意义（P=0．000〈0．01）。体尺体重彼此呈显著正相关，线性程度非常好。胚胎移植荷斯坦奶牛对酒泉地区的生态气候条件具有较强的适应性。

进口奶牛胚胎移植效果的研究

2007年5月8日至2010年11月9日以来,笔者在北京奶牛中心良种场及中国农机院小王庄牛场移植进口奶牛胚胎。引进美、加系优质荷斯坦奶牛胚胎的目的是选育优秀后备种公牛和建立种子母牛群。截止2010年11月,累计使用胚胎369枚,移植受体牛367头,妊娠212头,平均移植妊娠率为60.40%。移植结果说明,本研究成功建立了一套先进的进口胚胎移植方法。