基于“肠脑互动”探讨大建中汤治疗肠易激综合征大鼠内脏痛作用机制

目的研究大建中汤对肠易激综合征(irritable bowel syndrome,IBS)大鼠内脏痛的影响及神经-免疫-内分泌网络的分子机制。方法将新生大鼠48只,随机分为正常对照组(control组)、肠易激综合征模型组(IBS组)、酮替芬组(Ketotifen组)、低剂量大建中汤治疗组(DJZT-L)、中剂量大建中汤治疗组(DJZT-M)、高剂量大建中汤治疗组(DJZT-H)。采用母婴分离法制备IBS内脏痛大鼠模型,利用腹壁撤退反应(abdominal withdrawal reflex,AWR)评估大鼠内脏敏感性;免疫组化法测定大鼠下丘脑星形胶质细胞(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、小胶质细胞(OX-42);免疫蛋白印迹(Western blot,WB)检测结肠和下丘脑P物质(substance P,SP);甲苯胺蓝染色法检测结肠组织肥大细胞(mast cell,MC)脱颗粒率;酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbentassay,ELISA)测定分析结肠组织SP、特异性IgE(sIgE)和组胺。结果与正常大鼠相比,模型大鼠中60、40和20 mm Hg压力下AWR评分明显升高(P<0.05),下丘脑GFAP、OX-42、SP表达显著上升(P<0.05),结肠组织中肥大细胞脱颗粒率、sIgE、组胺和SP表达显著上升(P<0.05);与模型大鼠相比,大建中汤高剂量组(40和20 mm Hg压力),大建中汤中剂量组(60、40和20 mm Hg压力)的AWR评分,下丘脑GFAP、OX-42、SP,结肠肥大细胞脱颗粒率、sIgE、组胺、SP表达明显下降(P<0.05)。结论大建中汤能够降低IBS模型大鼠内脏痛,可能与其抑制SD大鼠结肠组织中肥大细胞活性,进而影响免疫神经网络有关。

基于网络药理学研究大建中汤治疗术后肠梗阻作用机制

目的:基于网络药理学筛选大建中汤中有效成分及作用靶点,并结合巨噬细胞炎症模型探讨其治疗术后肠梗阻(Postoperative ileus, POI)潜在作用机制。方法:使用TCMSP、TCMID数据库查找大建中汤中四味药成分,结合生物利用度以及类药性等条件挖掘其有效成分,通过疾病数据库挖掘术后肠梗阻相关基因,构建大建中汤-活性小分子-靶基因-术后肠梗阻网络,分析大建中汤治疗术后肠梗阻关键靶点以及信号通路;使用脂多糖(LPS)或白介素-4(IL-4)诱导M0 RAW264.7分别向M1或M2型巨噬细胞分化,以大建中汤干预,qRT-PCR、ELISA法检测M1或M2型巨噬细胞因子表达,激光共聚焦检测P65入核情况,蛋白质印迹法(Western blot)检测相关蛋白表达。结果:筛选获得人参皂苷Rh2、人参皂苷Rg1、6-姜酚、6-姜烯酚、羟基-ɑ-山椒素、羟基-β-山椒素、等27个有效化学成分,这些有效成分与POI靶点共有119个交集基因。GO功能富集分析表明大建中汤治疗术后肠梗阻潜在机制与调控蛋白质磷酸化、泛素样蛋白连接酶,调控细胞因子生成有关;KEGG通路富集分析表明大建中汤治疗POI涉及PI3K、AKT、MAPK等通路;大建中汤能够抑制M0型巨噬细胞细胞向M1或M2极化;激光共聚焦及Western blot揭示大建中汤通过调控MAPK通路及NF-κB入核抑制M0型巨噬细胞细胞向M1极化。结论:大建中汤可能通过调控M0型巨噬细胞极化抑制炎症因子的释放而治疗POI。