胆南星治疗癫痫有效成分及作用机制研究进展

胆南星作为临床中抗癫痫的常用中药之一,为制天南星的干燥块茎细粉与牛、羊或猪胆汁经加工后合成。胆南星味苦、微辛,性凉,入肝、脾、肺三经,具有清热燥湿化痰、祛风解痉定惊之功。随着现代医学的进步,胆南星化学成分及药理作用的挖掘得到进一步开展。相关实验证明,胆南星的有效成分主要包括以β-谷甾醇、豆甾醇、胆固醇为代表的甾醇类和以鹅去氧胆酸、脱氧胆酸、丙戊酸为主的胆汁酸类等,其主要通过调节神经递质、抗炎、抗氧化、抗惊厥、调控血脑屏障和胶质细胞等方式来发挥神经系统作用,可全方位、多角度抑制癫痫发作。该文通过查阅近10年相关文献,综述了胆南星治疗癫痫的相关有效成分及作用机制,为胆南星抗癫痫提供了科学依据,以期为临床药物的研发提供有益参考。

胆南星炮制工艺、化学成分及药理作用研究进展

为进一步优化胆南星炮制工艺,开发胆南星临床应用,在查阅了历代本草古籍、《中华人民共和国药典》、各省中药炮制规范等相关书籍,结合中国知网、万方数据、维普网、PubMed等数据库中的相关文献,对其中所载有关胆南星的炮制工艺、化学成分、药理作用及临床应用进行总结。胆南星传统炮制方法为发酵法、混合蒸制法及复制法,现代出现了利用微生物工程技术发酵的方法。胆南星化学成分包括多糖类、黄酮类、生物碱类、皂苷类、胆汁酸类等,具有解热抗炎、抗惊厥、镇痛、祛痰等药理作用。由于胆汁来源和炮制方法的不同,其所含的化学成分和药理作用有明显的区别,通过比较不同炮制方法、不同炮制条件下胆南星活性成分、药效学变化,为后续胆南星炮制工艺优化及其开发利用提供文献依据。

基于PKA信号通路探讨胆南星对MPTP诱导帕金森病模型小鼠的保护作用

目的 探讨胆南星对帕金森病(PD)模型小鼠的改善作用及可能机制。方法 将60只雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常组、模型组、胆南星低剂量组[0.39 g/(kg·d)]、胆南星高剂量组[1.56 g/(kg·d)]和阳性对照药左旋多巴片组[80 mg/(kg·d)],每组12只。除正常组小鼠注射等体积生理盐水外,其余各组连续5 d腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶[MPTP,35 mg/(kg·d)]建立亚急性PD模型;造模完成后连续给药治疗7 d,于造模前1 d、造模第5天和末次给药后进行爬杆实验和线悬挂测试。采用免疫荧光法检测小鼠脑黑质中酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元数量;采用酶联免疫吸附法检测小鼠血清中白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平以及脑黑质中IL-1β、TNF-α、环氧合酶2(COX-2)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)水平;采用Western blot法检测小鼠脑黑质中cAMP依赖的蛋白激酶催化亚单位α(PKA C-α)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)以及铁蛋白重链多肽1(FTH1)蛋白的表达。结果 末次给药后,与正常组比较,模型组小鼠爬杆时间显著延长(P<0.01),线悬挂评分显著降低(P<0.01),脑黑质中TH阳性神经元数量显著减少(P<0.01),血清中IL-1β、TNF-α水平和脑黑质中IL-1β、TNF-α、COX-2、iNOS水平显著升高(P<0.01),脑黑质中GPX4、PKA C-α和FTH1蛋白表达水平显著降低(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,胆南星高剂量组小鼠上述指标水平均显著回调(P<0.05或P<0.01)。结论 胆南星能够改善MPTP诱导的PD模型小鼠运动能力障碍,减少脑黑质TH神经元死亡,对模型小鼠具有神经保护作用;这可能与其激活PKA信号通路来抑制神经炎症和神经元细胞铁死亡有关。

胆南星的炮制、成分分析及药理研究进展

胆南星是我国常用的传统中药,具有清热化痰、息风定惊的功效。本文通过查阅历代本草著作及相关文献资料,将历版《中国药典》与各地炮制规范进行深入比较,对胆南星的炮制历史沿革、现代炮制规范、主要成分及物质基础、炮制工艺、质量分析技术和药理作用进行梳理和归纳,为胆南星的进一步研究提供参考。

胆南星化学成分的研究

目的研究胆南星Arisaema cum bile的化学成分。方法胆南星氯仿提取物采用硅胶、ODS、MCI进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。结果从中分离得到10个化合物,分别鉴定为胆固醇(1)、6-氧代-甘氨猪去氧胆酸甲酯(2)、鹅去氧胆酸甲酯(3)、猪去氧胆酸甲酯(4)、鹅去氧胆酸(5)、猪去氧胆酸(6)、甘氨猪去氧胆酸甲酯(7)、胆酸(8)、甘氨猪去氧胆酸、(9)牛磺鹅去氧胆酸(10)。结论所有化合物均为首次从胆南星中分离得到。

胆南星辅料成分分析及其清热作用

目的:通过比较猪、牛、羊胆汁中胆酸类成分和对发热小鼠清热作用的差异,为胆南星炮制辅料的筛选提供参考依据。方法:采用HPLC-CAD法检测三种胆汁中胆酸类成分(胆酸、去氧胆酸、猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸、牛磺胆酸钠)。色谱条件为Waters C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为0.5%甲酸(A)-乙腈(B),梯度洗脱,体积流量:1 mL·min^(- 1);进样量:20μL,Corona参数:氮气压力为35 psi(241.3 Kpa),Filter:high,Range 200 p A。以干酵母制备小鼠发热模型,观察猪、牛、羊胆汁对发热小鼠体温的影响。结果:猪、牛、羊胆汁中胆酸类成分存在明显差异,五种胆酸总量分别为1.495 0%、0.354 0%、0.597 6%,猪胆汁中猪去氧胆酸含量最多,为1.128 7%。猪、牛、羊胆汁对发热小鼠均有一定的清热作用,猪胆汁在6 h时表现出清热作用但不持久。牛胆汁在8 h时表现出较明显的清热作用。羊胆汁清热作用最明显且持久。结论:猪、牛、羊胆汁无论胆酸类成分含量还是清热作用均存在明显差异,提示我们应对药典规定的胆南星的三种胆汁进行区分,将其分别发酵制成胆南星后并结合药效评价再进行筛选。

胆南星炮制历史沿革与现代研究

胆南星为临床常用清热化痰、息风定惊中药。通过查阅和分析历版《中华人民共和国药典》、各地炮制规范及现代研究文献,整理胆南星炮制历史沿革,发现胆南星炮制存在选用胆汁不同、工艺各异、质量标准简单等问题,结合现代研究进展分析,胆南星采用不同胆汁、不同方法炮制具有合理性,但成分存在差异。建议不同原料或炮制工艺的胆南星分开标注,规范管理。

消痰散结方对裸鼠人胃癌MKN-45端粒酶活性表达的影响

目的通过观察消痰散结方对裸鼠人胃癌MKN-45原位移植模型端粒酶活性表达的影响,探讨其抑制胃癌细胞增殖的作用机制。方法采用OB胶粘贴法建立裸鼠人胃癌MKN-45原位移植瘤模型,随机分成模型组、消痰散结方低、中、高剂量组、5-氟脲嘧啶(5-Fu),每组8只,运用PCR-ELISA方法检测端粒酶活性的表达。结果①消痰散结方低、中、高剂量组的平均瘤重与模型组相比,差异有统计学意义(P<0.01);②消痰散结方中剂量组和5-Fu组端粒酶活性与模型组组比较明显降低,差异有统计学意义,P<0.05,消痰散结高剂量组端粒酶活性与模型组组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论消痰散结方抑制胃癌细胞生长,部分可能与其抑制端粒酶活性有关。

辨胆南星炮制“胆”与“南星”孰重

目的探讨胆南星炮制的重点是在胆还是在天南星。方法通过古代本草文献研究与实践操作。结果胆南星炮制的本意是以胆之苦,制南星之燥,且胆汁本身有镇惊之功,用于治疗痰热惊风之证。但是在炮制方法上出现两种观点,一是重在南星,以胆制燥,以姜解毒;一是重在胆,以南星收汁,功近牛黄。结论胆汁添加的比例不同,使胆南星的功效主治发生了变化,这与明清时期的过度炮制相关。

中药炮制辅料胆汁质量标准研究

目的:建立胆汁辅料质量标准,为提高和稳定胆汁制中药饮片质量和临床疗效提供参考。方法:收集不同批次的牛、猪、羊胆汁,对其进行质量分析,包括性状、理化和薄层鉴别,异性胆汁、相对密度、异性有机物和水分检查及总胆酸含量测定,制订胆汁辅料标准。采用胆汁发酵天南星,按照2020年版《中华人民共和国药典》对胆南星饮片进行质量检测从而评价辅料胆汁质量。结果:胆汁呈具有一定黏度的棕黄色至黄绿色或至绿褐色、半透明液体,气微腥,味极苦,含有胆汁酸类成分且均含有胆酸。薄层和显微检查表明样品中均无异性有机物掺入。胆汁相对密度为1.020~1.430,水分为86.53%~94.00%,紫外-可见分光光度法测得总胆酸含量为5.20~75.16 mg/mL。胆汁发酵后的胆南星饮片质量符合《中华人民共和国药典》规定。结论:初步建立了中药炮制辅料胆汁质量标准,可为中药炮制辅料胆汁质量标准制订提供依据。

小活络丸中胆南星的薄层色谱鉴别方法

目的:建立小活络丸中胆酸、猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸的薄层色谱鉴别方法,用以帮助提高胆南星的鉴别手段。方法:采用薄层色谱方法,在异辛烷-乙醚-冰醋酸-正丁醇-水(10∶5∶5∶3∶1)上层溶液的展开条件下对所抽取45批样品进行实验。结果:经过对13个被抽样单位共45批样品的薄层色谱结果进行汇总统计分析,有73.33%的样品检出胆酸,86.67%的样品检出猪去氧胆酸,93.33%的样品检出鹅去氧胆酸。结论:建立的胆酸、猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸的薄层色谱鉴别方法,可作为小活络丸中胆南星鉴别的辅助手段。

胆南星发酵制品与混合蒸制品的鉴别研究

目的:以猪胆汁及天南星、制天南星为原料分别制备发酵制胆南星及混合蒸制胆南星,以胆汁酸类成分为指标,建立以猪胆汁为炮制辅料的胆南星2种炮制品的薄层鉴别及HPLC-ELSD特征图谱。方法:采用硅胶G薄层板,以石油醚:丙酮:冰醋酸(11∶8∶0. 8)为展开剂,10%硫酸乙醇溶液为显色剂,建立薄层色谱鉴别方法。采用Agilent Eclipse XDB C_(18)(4. 6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈与0. 1%冰醋酸水为流动相进行梯度洗脱,流速为1 m L/min,柱温为30℃,ELSD:漂移管温度为105℃,氮气流量为2. 5 m L/min,建立胆南星HPLC-ELSD特征图谱鉴别方法。结果:TLC和HPLC-ELSD图谱均显示发酵制胆南星可检测到游离型胆汁酸类成分猪胆酸(HCA)、猪去氧胆酸(HDCA)和鹅去氧胆酸(CDCA)3个特征成分,而混合蒸制胆南星中未检测出;混合蒸制胆南星可检测到结合型胆汁酸类成分甘氨猪去氧胆酸(GHDCA)和甘氨鹅去氧胆酸(GCDCA) 2个特征成分,而发酵制胆南星中未检测出。结论:所建胆汁酸类成分的薄层色谱鉴别法(TLC)和高效液相色谱-蒸发光散射法(HPLC-ELSD)均可有效鉴别胆南星的发酵制品和混合蒸制品,为胆南星质量控制提供依据。

胆南星中胆酸类成分含量测定及发酵前后含量比较

目的:建立胆南星样品中猪胆酸、猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸的含量测定方法,比较胆南星发酵前后这几种胆酸类成分的含量变化,为胆南星发酵原理、工艺规范化研究提供参考。方法:Waters C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),柱温为30℃;流动相为乙腈-0.5%冰乙酸溶液(60∶40);检测器:奥泰2000蒸发光散射检测器;流速:1.0 mL·min^(-1);漂移管温度:105℃,气体流速:3.0 mL·min^(-1)。结果:猪胆酸、猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸均在定量范围内呈良好的线性关系,加样回收率分别为99.63%、100.04%、101.4%。结论:本方法操作简单,测定结果准确,胆南星发酵后猪胆酸、猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸含量增加,可作为胆南星发酵程度及胆汁加入量的判定指标。

胆南星发酵制与混合制的成分鉴别及药效对比研究

目的:通过对比发酵制胆南星与混合制胆南星中的结合型和游离型胆汁酸类成分以及抗高热惊厥作用、解热作用,分析2种制备方式胆南星样品的差异,为解析胆南星的炮制原理、规范制备方法提供依据。方法:以药典收载的2种方法分别制备胆南星。采用UPLC-QQQ-MS/MS负离子MRM模式,使用MassLynx 4.1软件进行LC-MS/MS数据分析,考察2种制法胆南星中结合型和游离型胆汁酸类成分的差异;建立45℃热水浴诱发的21日龄大鼠高热惊厥模型,灌胃给药后观察惊厥发生率、惊厥潜伏期等;皮下注射20%干酵母混悬液制备大鼠发热模型,灌胃给药后观察肛温变化,测定PGE_(2)、Na^(+)-K^(+)-ATPase、SDH、GLYCOGEN、IL-1β、IL-6水平。结果:发酵制胆南星中主要含有游离型胆汁酸,混合制胆南星中主要含有结合型胆汁酸;与模型组相比,2种胆南星均可明显降低21日龄大鼠惊厥发生率,均能明显降低高热大鼠的肛温,并使PGE_(2)、Na^(+)-K^(+)-ATPase、SDH、IL-6、IL-1β水平降低,GLYCOGEN水平升高(P<0.05或P<0.01),且发酵制胆南星效果优于混合制胆南星。结论:发酵制、混合制胆南星中胆汁酸类成分含量存在明显差异,可区分2种炮制品。发酵制胆南星的抗高热惊厥、解热作用优于混合制胆南星。

胆南星拮抗热性惊厥模型小鼠脑组织损伤及炎症的作用研究

目的研究胆南星拮抗热性惊厥模型小鼠脑组织损伤及炎症的药效作用。方法采用干酵母混悬液及戊四氮溶液构建热性惊厥小鼠模型,考察不同剂量胆南星水提物对模型小鼠肛温、惊厥潜伏期及惊厥持续时间的影响,HE染色观察小鼠海马神经元形态,ELISA法检测小鼠血清cAMP、PGE_(2)水平,Western blot法检测脑组织COX-2、iNOS、γ-氨基丁酸A型受体(GABAAR)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)蛋白表达,qPCR法检测海马组织炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表达。结果与模型组比较,胆南星高剂量组能够降低模型小鼠肛温(P<0.05),延长惊厥潜伏期(P<0.05),缩短惊厥持续时间(P<0.01),上调GABAAR蛋白表达(P<0.05);同时降低血清cAMP、PGE_(2)水平(P<0.01),改善海马神经元细胞形态学变化,下调脑组织COX-2、iNOS、GFAP蛋白表达(P<0.05),降低海马组织炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表达水平(P<0.05)。结论胆南星具有良好的抗热性惊厥作用,其机制可能与解热、拮抗脑组织炎症有关。

主成分分析在胆南星质量控制研究的应用

目的:探讨胆南星加工过程中,不同工艺参数对饮片TLC图谱的定量影响,以及相同工艺条件不同批次样品图谱的分布。方法:混合炮制工艺实验研制饮片;眦分析;主成分分析(PCA);多元方差分析(multivariat analysis)。结果:猪胆汁来源对TLC图谱中各个峰高值的联合分布有非常显著影响。在方差分析中,虽未见蒸制时间对其有明显影响。但PCA对图谱的4个峰高变量值通过主轴变换(线性变换)和压缩,可以得到PC1和PC2个参照指标,用其可表达图谱的变异分布规律和解释饮片在图谱中的91%变异部分。并且可以较好地区分不同工艺参数所得制品。结论:PCA技术在分析计算中药指纹图谱的研究中,可以更加灵敏准确地揭示其饮片图谱变化的分布规律。

胆南星对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的保护作用及机制研究

目的研究胆南星对四氯化碳(CCl_(4))致小鼠急性肝损伤的保护作用及可能的作用机制。方法将50只小鼠按体质量随机分为正常组、模型组、阳性对照组(联苯双酯滴丸,150 mg/kg)和胆南星低、高剂量组(0.78、2.34 g/kg),每组10只。每天灌胃给药1次,连续7 d。末次灌胃2 h后,除正常组外的其余各组小鼠均腹腔注射0.2%CCl_(4)-橄榄油溶液复制急性肝损伤模型。腹腔注射17 h后,按照试剂盒方法检测小鼠血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和肝组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平,测定小鼠的肝脏指数,采用苏木精-伊红染色法观察小鼠肝组织的病理形态学变化并对肝损伤程度进行量化评分,采用实时荧光定量PCR法检测小鼠肝组织中IL-6、TNF-αmRNA表达水平,采用Western blot法检测小鼠肝组织中酪氨酸激酶2(JAK2)、信号传导及转录激活因子3(STAT3)、核因子κB p65(NF-κB p65)蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组小鼠ALT、AST、IL-6、TNF-α、MDA水平和肝脏指数显著升高(P<0.05),SOD水平显著降低(P<0.05);IL-6、TNF-αmRNA及JAK2、STAT3、NF-κB p65蛋白表达显著上调(P<0.05);肝索结构严重紊乱,肝细胞有较多炎症细胞浸润,肝损伤程度评分显著升高(P<0.05)。与模型组比较,胆南星低、高剂量组小鼠肝组织病理变化及上述指标水平均显著改善(P<0.05)。结论胆南星对CCl_(4)致小鼠急性肝损伤具有保护作用,其机制可能与抑制JAK2/STAT3/NF-κB信号通路介导的炎症反应及抗氧化应激作用有关。

高效液相色谱法测定“天竺痫康宁胶囊”中胆红素的含量

目的：建立天竺痫康宁胶囊胆红素含量的高效液相色谱（HPLC）测定方法。方法采用 Intersil －C18色谱柱，流动相为甲醇－三氯甲烷－1％磷酸（80∶14∶6），流速1．0 mL·min －1，检测波长为450 nm，柱温为室温，进样量为10μL。结果在该条件下，浓度为2．26～45．2 mg·L －1范围内，胆红素峰面积与其浓度呈良好线性关系（r ＝0．9996），平均回收率为97．4％，RSD为2．02％（n ＝6）。结论该方法灵敏、简便、准确、重复性好，可作为天竺痫康宁胶囊质量标准的控制指标之一。

天南星和虎掌南星胆汁炮制前后毒性对比研究

目的:探讨胆汁制天南星和虎掌南星前后的急性毒性、刺激性和燥性效应变化。方法:将132只小鼠随机分组后进行急性毒性试验;39只家兔随机分组后进行兔眼刺激试验;104只大鼠随机分组进行燥性试验。以小鼠中毒表现、兔眼刺激评分和大鼠的饮水量、排尿指数、大便含水率和颌下腺、肾脏、结肠的病理变化以及水通道蛋白5(Aquaporin5,AQP5)、AQP2、AQP3的表达、血浆粘度、血清中环磷腺苷/环磷酸鸟苷(adenosine cyclic 3’,5’-hydrogen phosphate/current good manufacture practices,cAMP/cGMP)、三磷酸腺苷酶(ATPase,Na^(+)-K^(+)-ATP酶)、血浆中的肌酐(Cr)和尿素氮(BUN)含量等指标进行考察。结果:天南星和虎掌南星胆汁炮制前后的水煎液对小鼠灌胃无毒性,小鼠最大耐受量生品均为108 g/kg,炮制品均为75.6 g/kg。胆汁炮制后对家兔眼刺激的作用显著减弱(P<0.05);天南星和虎掌南星对正常大鼠结肠、颌下腺、肾脏有明显损伤作用;显著升高血浆中Cr和BUN的含量(P<0.05或P<0.01),胆汁炮制后对正常大鼠结肠、颌下腺、肾脏组织损伤作用较弱。天南星和虎掌南星可使正常大鼠血液中cAMP/cGMP、Na^(+)-K^(+)-ATP酶含量和肾脏、结肠、颌下腺组织中水通道蛋白(AQP2、AQP3、AQP5)表达异常(P<0.05或P<0.01),使正常大鼠出现水液代谢紊乱、血液黏度增加、排尿指数增加、排便量减少、大便干结(P<0.05或P<0.01),各胆汁制南星组大鼠相应的指标考察中发现与生品相比其作用较弱。结论:胆汁炮制可使天南星和虎掌南星刺激性和燥性减弱,本研究可为天南星的“炮制缓燥”和“炮制减毒”提供科学依据。

基于胆南星挥发性成分的发酵年份识别

目的:该研究采用顶空固相微萃取(HS-SPME)结合气相色谱-质谱法(GC-MS),分析未发酵胆南星、一年制胆南星、二年制胆南星和三年制胆南星的挥发性成分的差异,以识别不同发酵年份的胆南星。方法:采集不同发酵年份的胆南星样本,利用HS-SPME-GC-MS技术检测各样本的挥发性成分。通过主成分分析(PCA)、聚类热图分析(HCA)、偏最小二乘法判别分析(PLS-DA)等化学计量学分析方法,对检测到的挥发性成分的相对含量进行处理和分析。结果:共鉴定出145种挥发性物质,其中杂环类、醇类、醛类和芳香类是相对含量较高的挥发性成分。采用PCA、HCA和PLS-DA等分析方法均可直观地对不同发酵年份的胆南星进行有效区分。根据VIP值>1的标准,筛选出73种具有差异性标志的挥发性成分。在未发酵胆南星2,6,11-三甲基十二烷、间二甲苯的含量最高,且与发酵样品的含量差异均有显著统计学意义(P<0.05);仅在一年制胆南星中检出2,3-丁二醇,仅在二年制胆南星中检出正辛烷,仅在三年制胆南星中检出庚酸乙酯,这些成分可作为不同发酵年份胆南星的气味标志物。结论:该研究基于HS-SPME-GC-MS技术所建立的胆南星挥发性成分识别方法,可实现胆南星未发酵与1~3年发酵年份的快速判别,为胆南星炮制工艺规范化及质量标准研究提供科学依据。