丹寿汤含药血清对抗心磷脂抗体引起的内皮细胞损伤的影响

目的探讨丹寿汤含药血清对抗心磷脂抗体(anticardiolipin antibody, aCL)致人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVEC)损伤的影响及作用机制。方法制备丹寿汤大鼠含药血清,将HUVEC为5组:空白血清对照组、损伤模型组、低浓度含药血清处理组、中浓度含药血清处理组、高浓度含药血清处理组。10%含药血清预处理24 h后,加入aCL诱导建立细胞模型。细胞增殖检测试剂盒(cell counting kit-8, CCK-8)分析各组细胞的增殖能力,蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测各组细胞Toll样受体4(Toll-like receptor4, TLR4)、髓样分化因子88(mydoid differentiation factor88, MyD88)、胞核p65的表达,酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测各组细胞上清液中白细胞介素1β(interleukin1β, IL-1β)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor, TNF-α)、白细胞介素6(interleukin6, IL-6)表达水平,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)结合Western Blot检测组织因子(tissue factor, TF)、血管细胞黏附分子1(vascular cell adhesionmolecule-1, VCAM-1)。结果丹寿汤含药血清可抑制aCL引起的细胞活力下降,抑制TLR4/MyD88/NF-κB通路活性,抑制炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α释放,降低TF、VCAM-1 mRNA和蛋白表达。结论丹寿汤含药血清对aCL所致HUVEC损伤的保护作用可能与其抗炎及抗黏附作用有关。

丹寿汤对妊娠丢失大鼠Th17/Treg细胞平衡的调节作用

目的探讨丹寿汤对妊娠丢失大鼠辅助性T细胞17(helper T cells17,Th17)/调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)失衡的影响。方法将受孕SD大鼠按照随机数字法均分为空白对照组、阴性对照组、模型组、丹寿汤干预组(低、中、高)。分别于孕8 d和孕12 d背部皮下多点注射抗心磷脂抗体(anticardiolipin antibody,aCL)建立妊娠丢失大鼠模型,丹寿汤干预组自受孕第1天起灌胃丹寿汤,2次/d,剩余组大鼠灌胃等体积生理盐水,孕15 d处死孕鼠取材。胚胎称重,计算胚胎吸收率,酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中白介素10(interleukin 10,IL-10)、转化生长因子β1(transforming growth factor beta 1,TGF-β1)、白介素17A(interleukin 17A,IL-17A)、白介素6(interleukin6,IL-6)水平变化,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)结合蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测胎盘组织中维甲酸相关核孤儿受体γt(retinoic acid-related orphan nuclear receptorγt,RORγt)、叉头状螺旋转录因子3(Foxp3)表达。结果与模型组比较,丹寿汤显著抑制RORγt表达,降低血清IL-17A、IL-6水平,促进Foxp3表达,升高血清IL-10、TGF-β1水平,增加胚胎重量,降低胚胎吸收率,呈剂量依赖性。结论丹寿汤能够抑制胚胎吸收,提高妊娠成功率,其作用机制可能与调节Th17/Treg平衡失调有关。

加味丹寿汤合地屈孕酮片治疗原因不明复发性流产50例

目的:观察加味丹寿汤合地屈孕酮片治疗原因不明复发性流产的临床疗效。方法:将150例患者随机分为对照组1、对照组2和治疗组,每组各50例。对照组1口服加味丹寿汤,对照组2口服地屈孕酮片,治疗组口服加味丹寿汤联合地屈孕酮片。比较各组临床疗效、治疗前后症状、体征的改善情况及胚胎存活率。结果:治疗后治疗组在临床疗效、中医证候积分、中医证候疗效及孕65 d与孕12周胚胎存活率方面均优于对照组1和对照组2,差异均有统计学意义(P<0.05);对照组1与对照组2比较,差异亦具有统计学意义(P<0.05)。结论:加味丹寿汤合地屈孕酮片能明显提高原因不明复发性流产患者的临床疗效,提高孕65 d及孕12周胎儿存活率。

加味丹寿汤对双酚A染毒孕鼠之胎鼠致畸的防护作用

目的探讨加味丹寿汤对双酚A染毒孕鼠之胎鼠致畸的防护作用。方法 将44只受孕大鼠随机分为4组,空白对照组与模型组各10只,加味丹寿汤组与寿胎丸组各12只。模型组、加味丹寿汤组及寿胎丸组自孕第1～20天均予双酚A600mg/kg灌胃,空白对照组予大豆油灌胃。其间模型组不予其他干预,其他3组分别予生理盐水、加味丹寿汤及寿胎丸浓煎液灌胃。所有孕鼠均于孕20天处死取材。结果 与模型组比较,加味丹寿汤能增加孕鼠及胎鼠体质量,改善胎鼠身长及尾长(P<0.05),且优于寿胎丸(P<0.05)。加味丹寿汤还可降低胎鼠畸形率(P<0.05)。结论 加味丹寿汤能促进孕鼠体质量增长,改善胎鼠体质量、身长及尾长,降低胎鼠畸形率。

丹寿汤调节miR-744-3p降低内皮细胞损伤干预复发性流产的研究

目的探讨丹寿汤调节微小RNA-744-3P(miR-744-3p)降低内皮细胞损伤干预复发性流产的作用及其潜在分子机制。方法收集复发性流产模型组和丹寿汤干预组小鼠胎盘组织,称重胚胎并计算胚胎吸收率,Real-time PCR检测胎盘组织中miR-744-3p的表达;转染miR-744-3p,模拟物(mimics)或抑制物(inhibitors)至人脐静脉内皮细胞中,通过CCK-8法、划痕实验和小管形成实验来检测miR-744-3p对内皮细胞增殖、迁移和成管能力的影响;利用Real-time PCR和Western blot技术检测miR-744-3p对TLR4表达的影响,并通过双荧光素酶报告基因实验来验证miR-744-3p对TLR4的靶向性。结果与模型组相比,丹寿汤治疗可显著抑制复发性流产小鼠胚胎吸收率并上调miR-744-3p表达;与对照组相比,过表达miR-744-3p可显著增强内皮细胞的增殖、迁移及成管能力,而抑制miR-744-3p时结果则与之相反;miR-744-3可通过靶向TLR4来抑制其表达。结论丹寿汤通过诱导miR-744-3p表达来靶向抑制TLR4的表达,从而降低内皮细胞损伤并缓解复发性流产疾病进程。

基于PI3K/Akt/eNOS通路分析丹寿汤通过靶向miR-146a-5p调控子宫内膜异位症的作用机制

目的:探讨丹寿汤通过miR-146a-5p调控磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)/内皮一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)通路影响子宫内膜异位症的作用机制。方法:选取异位子宫内膜基质细胞ecESC,并转染miR-146a-5p inhibitor对照品和miR-146a-5p inhibitor,采用不同浓度的丹寿汤(0μmol·L^(-1)、50μmol·L^(-1)、100μmol·L^(-1)、150μmol·L^(-1)和200μmol·L^(-1))进行干预,CCK-8试剂盒检测细胞增殖;细胞划痕考察细胞迁移能力;Transwell实验考察细胞的侵袭能力;流式细胞术检测细胞凋亡;RT-qPCR测定miR-146a-5p的表达;Western blot检测p-PI3K、p-AKT、p-eNOS的蛋白表达水平。结果:丹寿汤能明显抑制ecESCs增殖、迁移和侵袭并促进凋亡且呈剂量依赖性(P<0.05)。丹寿汤可能通过上调miR-146a-5p抑制ecESCs增殖、迁移、侵袭并促进细胞凋亡(P<0.05)。丹寿汤可明显降低p-PI3K、p-AKT、p-eNOS的mRNA及蛋白表达水平(P<0.05),而miR-146a-5p inhibitor则逆转了丹寿汤对p-PI3K、p-AKT、p-eNOS mRNA及蛋白表达的影响(P<0.05)。结论:丹寿汤通过miR-146a-5p调控PI3K/Akt/eNOS通路调节子宫内膜异位症细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡,缓解子宫内膜异位症。

丹寿汤对抗心磷脂抗体致妊娠丢失孕鼠子宫螺旋动脉重铸障碍的影响

目的 探讨丹寿汤对抗心磷脂抗体(ACA)致妊娠丢失孕鼠子宫螺旋动脉重铸障碍的影响。方法 以人ACA标准蛋白液为诱导剂制备ACA阳性孕鼠模型。实验随机均分为空白组、模型组、阳性药组、丹寿汤组。自受孕日起,空白组和模型组给予蒸馏水灌胃,阳性药组给予低分子肝素钙注射液[558 IU/(kg·d)]皮下注射,丹寿汤组给予丹寿汤药液[11.2 g/(kg·d)]灌胃,持续给药15d后处死取材。计算胚胎吸收率,HE染色法观察胎盘组织病理形态,Case Viewer图像分析测量胎盘血管管腔直径与血管密度,ELISA法检测血清白介素-6(IL-6)与血管内皮生长因子(VEGF)水平。结果 与模型组相比,阳性药组和丹寿汤组孕鼠的胚胎和胎盘质量显著增加,胚胎吸收率显著降低,胎盘血管管腔直径和血管密度显著扩增,血清IL-6水平显著降低,且血清VEGF水平显著升高(均P<0.05)。结论 丹寿汤对ACA致妊娠丢失孕鼠有明确保护作用,其机制可能与通过抗炎和促进血管新生改善子宫螺旋动脉重铸障碍有关。